肺癌中TSG101蛋白与Notch3受体表达的相关性

背景与目的TSG101蛋白是内吞分选通路的重要因子,该通路的异常会减少果蝇中Notch受体的降解,导致此受体信号对细胞分化、发育调节的紊乱。在哺乳动物中,Notch受体家族中的3亚型与肺组织发育及肺癌发生密切相关。本实验的目的是初步探讨在人类肺癌中,TSG101蛋白与Notch3受体之间的表达是否也存在关联。方法分别采用Western blot和免疫组化SP法检测TSG101蛋白与Notch3受体在肺癌组织、细胞系中的表达,并应用抗体封闭TSG101蛋白功能后观察Notch3受体的表达变化。结果TSG101蛋白在肺癌中比正常肺组织表达减少,而Notch3受体在肺癌中比正常肺组织表达则增多,此变化均与肺癌的分化及淋巴结转移相关。当用抗体封闭肺癌细胞系中TSG101蛋白功能时,Notch3受体检测水平呈上升变化。结论肺癌中TSG101蛋白表达下调,与Notch3受体检测水平上升有相关性。

Notch3受体在非小细胞肺癌中的表达

目的研究Notch3受体在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况,探讨Notch3受体与NSCLC发病的相关性。方法外科手术切除后由病理确诊为NSCLC 80例患者(临床病理资料完整,术前未经放、化疗及其他抗肿瘤治疗)的肺癌组织,40例正常肺组织(为癌旁距离肿块边缘5 cm以上、经病理HE染色证实为正常的肺组织),免疫组织化学SP法检测肺癌组织及癌旁正常肺组织中Notch3受体的表达。结果 NSCLC肺组织中Notch3受体水平明显高于对照组(χ~2=19.937,P<0.01); Notch3受体水平与患者性别,年龄,组织类型(肺腺、鳞癌)无相关性(P>0. 05); TNMⅢ+Ⅳ期中Notch3受体水平阳性率为73.3%,TNMⅠ+Ⅱ期阳性率为44.0%,差异有统计学意义(χ~2=6. 519,P<0. 05);有淋巴结转移患者的Notch3受体阳性表达率为84.2%,无淋巴结转移患者的阳性率为28.6%,差异有统计学意义(χ~2=24. 953,P<0.05)。结论 Notch3受体的表达水平与NSCLC的TNM分期、淋巴结转移密切相关,Notch3受体参与了NSCLC的发病及进展,对NSCLC患者的疾病进展及预后有重要意义;同时,阻断其表达有望成为NSCLC靶向治疗的新靶点。

TGF-β1通过TRAF6活化Notch3信号通路促进卵巢癌细胞迁移和侵袭的研究

背景与目的:转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)与Notch3在卵巢肿瘤组织中的异常表达与扩增分别与肿瘤转移和患者的低生存率有关。尽管TGF-β1与Notch3信号通路的交互作用促进多种肿瘤细胞的侵袭和转移,但其具体机制尚存在争议。该研究通过体外细胞学实验,探究TGF-β1与Notch3信号通路对卵巢癌细胞生物学行为的影响及其可能的相互作用机制。方法:以上皮性卵巢癌细胞Hey A8和Hey为细胞模型,用ELISA检测培养上清液中TGF-β1的表达;分别用500 ng/mL TGF-β1中和抗体(对照组)、10 ng/mL TGF-β1、50μmol/L DAPT、10 ng/mL TGF-β1和50μmol/L DAPT、50μmol/L TRAF6多肽抑制剂、10 ng/mL TGF-β1和50μmol/L TRAF6多肽抑制剂处理细胞,采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测各处理组TGF-β1和Notch3信号通路分子以及TRAF6蛋白表达水平的变化;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、划痕实验和Transwell小室测定各处理组细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果:Hey A8和Hey细胞培养上清液中TGF-β1浓度随时间延长而明显增加;与对照组相比,TGF-β1处理组Notch3-ICD、Hes1表达增加,Notch3抑制剂DAPT与TGF-β1共同处理组Notch3-ICD、Hes1表达水平无明显变化,TGF-β1明显促进细胞增殖、迁移和侵袭,Notch3抑制剂DAPT削弱了TGF-β1对卵巢癌细胞的促增殖、迁移和侵袭能力,说明TGF-β1通过激活Notch3信号通路促进卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭;进一步研究发现,TGF-β1激活Notch3信号通路的同时上调TRAF6表达,特异性抑制TRAF6能够抑制TGF-β1对Notch3信号通路的激活作用。结论:TGF-β1可能通过TRAF6活化Notch3信号通路,从而促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

Notch3在肿瘤发生发展中的作用

Notch信号通路是一个高度保守的信号通路，在脊椎动物发育过程中扮演重要角色。研究发现Notch受体介导的信号通路在多种肿瘤中异常表达。近年来研究表明Notch3与多种肿瘤的发生发展有着密切的联系，Notch3在调控肿瘤细胞的凋亡、增殖和分化中起着重要作用，本文就Notch3在各类常见肿瘤中的研究进展进行综述，重点探讨Notch3异常表达与肿瘤形成、发展的分子机制，以期推动Notch3作为药物作用靶点的研究。

常染色体显性遗传性脑动脉病伴皮质下梗死和白质脑病病理学及分子机制研究进展

常染色体显性遗传性脑动脉病伴皮质下梗死和白质脑病(CADASIL)是Notch3基因突变导致的遗传性脑小血管病。目前Notch3基因突变致CADASIL的分子机制尚不明确。本文综述CADASIL的病理改变、基因突变以及可能的相关分子机制,包括Notch3蛋白及其下游靶标的异常信号转导,细胞内质网应激和RhoA/Rho激酶活化,血管平滑肌细胞收缩异常及其自噬机制紊乱、增殖分化异常。

胞外Y-盒结合蛋白1通过Notch3受体促进肝癌细胞HepG2的增殖与转移

目的 阐明应激状态下肝癌细胞HepG2是否主动分泌Y-盒结合蛋白1（YB-1）,并初步探讨胞外YB-1的病理意义与作用机制. 方法 浓度梯度的脂多糖（LPS）、阿霉素刺激处理HepG2,离心收集培养上清液,采用已建立的化学发光免疫分析法（CLIA）实时定量检测上清液中YB-1水平;免疫共沉淀技术检测胞外YB-1是否特异结合Notch3受体,Western blot分析Notch-跨腹受体表达;浓度梯度的重组YB-1与HepG2共培养,四甲基偶氮唑盐法与细胞迁移实验检测HepG2细胞的增殖与侵袭转移.多组间数据比较采用单因素方差分析. 结果 CLIA检测结果显示培养液上清液中胞外YB-1水平显著高于对照组（F=10.54,P＜0.001）,分泌表达量在刺激培养（LPS：8 ng/ml和阿霉素：10 ng/ml）4 h后达高峰;免疫共沉淀与Westem blot结果证实胞外YB-1特异结合并上调表达Notch3;四甲基偶氮唑盐法与细胞迁移实验表明胞外YB-1显著促进HepG2细胞的增殖与侵袭转移（F=9.405,P＜0.001）.结论 化疗药物等应激状态下肿瘤细胞HepG2可经非经典途径主动分泌YB-1,胞外YB-1特异结合并上调表达Notch3受体,进而促进HepG2细胞的增殖与侵袭转移.为阐明肝细胞肝癌发病机制及进一步探讨胞外YB-1与恶性肿瘤的生物学关系奠定了基础.

Notch3信号通路与脑血管病

Notch通路是进化保守的信号转导通路，由复杂的相互作用的系统构成，其功能与胚胎发育和细胞分化调节有关。近年来研究表明，Notch通路与特定的人类疾病有关。其中，Notch3信号通路与神经系统发育和血管结构完整性关系密切。Notch3点突变可引起伴皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病。

桃红四物汤对鼠血管吻合模型Notch3受体及VEC增殖影响的研究

目的:观察桃红四物汤对大鼠尾血管吻合模型Notch3受体及血管内皮细胞(Vascular Endothelial Cell,VEC)增殖的影响。方法:将40只实验大鼠适应性喂养1周后随机分为4组,即桃红四物汤组、生理盐水组、假手术组和空白对照组,每组10只。桃红四物汤组和生理盐水组造模后干预,假手术组切开显露血管后直接缝合,空白对照组不做处理,并于术后第2天和第5天两个时间点随机选取5只大鼠,采用脊椎脱臼法处死,切取血管吻合区血管,利用免疫组化检测Notch3的表达情况,并对大鼠外周血分离、获取单个核细胞,进行体外细胞培养,反复纯化后利用MTT法检测VEC增殖情况。结果:桃红四物汤组血管吻合区Notch3蛋白表达含量明显高于生理盐水组、假手术组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);桃红四物汤组VEC增殖明显高于生理盐水组、假手术组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:桃红四物汤能上调血管吻合区血管新生相关因子Notch3受体的表达,能够促进血管内皮细胞的增殖,从而促进血管的成活。

胃癌NOTCH3的表达及其对细胞凋亡的影响研究

目的探讨NOTCH3在胃癌细胞中的表达水平及其对胃癌细胞凋亡的影响。方法Western blot检测NOTCH3蛋白在正常胃组织及胃癌细胞的相对表达水平。siScramble或si-NOTCH3-1、si-NOTCH3-2转染AGS和MKN28细胞,通过实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)及Western blot判断siRNA的转染效率;采用膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙啶(PI)双染,流式细胞仪检测转染后AGS和MKN28的细胞凋亡率;Western blot检测转染后AGS和MKN28的cleaved-DNA修复酶(PARP)和cleaved-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3的相对表达水平。结果胃癌细胞中NOTCH3蛋白相对表达水平高于正常胃组织。si-NOTCH3-1、si-NOTCH3-2转染后AGS和MKN28的细胞凋亡率明显升高。随着si-NOTCH3-2转染浓度的逐渐升高,NOTCH3蛋白的相对表达水平逐渐降低,而cleaved-PARP和cleaved-Caspase-3水平逐渐升高,且呈现明显的剂量依赖。结论NOTCH3在胃癌中表达增多,其可抑制胃癌细胞凋亡,促进胃癌进展。

NOTCH3基因EGFr区域突变与CADASIL表型

伴皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病(cerebral autosomal dominant arteriopathy with subcortical infarcts and leukoencephalopathy,CADASIL)是一种成年起病的遗传性小血管病,由位于染色体19p13区域的NOTCH3基因突变所致。其临床特点包括反复缺血性卒中、进行性认知损害、偏头痛以及精神异常等。近年来的研究表明,NOTCH3基因EGFr区域突变与CADASIL的病程、临床表现以及影像学特点均存在联系。文章就NOTCH3基因EGFr区域突变基因型、CADASIL临床表型以及二者的相关性研究进展进行了综述,期望为CADASIL的早期诊断以及发病机制研究提供思路。

NOTCH3基因c.697T>A突变所致CADASIL:一个中国家系报道

目的报道1个伴皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病(cerebral autosomal dominant arteriopathy with subcortical infarcts and leukoencephalopathy,CADASIL)中国家系患者的临床特征、影像学表现及基因突变特点。方法总结1个经基因测序证实的CADASIL家系的临床表现及影像学特征;对先证者进行NOTCH3基因测序,并对该位点进行突变基因编码蛋白结构预测。结果该家系患者主要表现为反复腔隙性梗死和高血压,而不伴有头痛和焦虑或抑郁等情感障碍。先证者颅脑MRI显示多发腔隙性梗死及广泛脑白质变性。磁敏感加权成像示颅内多发性小出血灶。NOTCH3基因分析显示先证者存在c.697T>A突变,对该突变位点编码蛋白进行3D结构预测显示,该位点可导致蛋白结构中第233位半胱氨酸变为丝氨酸。结论该CADASIL家系患者存在NOTCH3基因c.697T>A突变,该突变可导致野生型Notch3蛋白结构中氨基酸改变,可能因破坏二硫键导致其周围区域β折叠结构形成增加,从而改变蛋白质的结构和功能而致病。

新生儿lateral meningocele综合征一例并文献复习

目的总结lateral meningocele综合征(lateral meningocele syndrome,LMS)的临床特点及其致病基因。方法回顾性收集2020年5月在温州医科大学附属第二医院新生儿科确诊的1例LMS患儿的临床表现、实验室检查、影像学检查及基因检测结果等病例资料。以“lateral meningocele综合征”“侧脊膜膨出综合征”“NOTCH3变异”和“lateral meningocele syndrome”“NOTCH3”为检索词分别在中国知网数据库、万方数据库、维普数据库和在线人类孟德尔遗传数据库及PubMed进行文献检索(自建库至2021年2月)。结合本例患儿总结LMS的临床表现、致病机制和遗传学病因。结果本例患儿,男,7日龄,因“生后吃奶差1周”收入院。患儿表现为四肢肌张力低下、吞咽困难、高血压、侧脊膜膨出,伴有特殊面容和隐睾。脊柱MRI及脑干诱发电位均异常。全外显子组测序发现位于染色体19p13.12的NOTCH3基因杂合移码变异c.6667_6686del(p.Ala2223Profs*12),未检测到父母携带该致病变异。文献检索到相关病例报道12篇(均为英文),包括15个家系共17例患者(其中基因确诊9例),连同本例患儿共18例(基因确诊共10例)。诊断年龄为15 d~55岁,均存在胸腰椎内多个侧脊膜膨出,常见表现为小下颌畸形和低位耳(16/18)、上睑下垂及眼睑下裂(15/18)、肌张力低下(13/18)、高血压(11/18)、发育迟缓(9/18)、混合性或传导性听力损失(9/18)、心血管发育异常(7/18)及男性隐睾(7/10)。共检出9种NOTCH3基因变异,均为杂合变异,其中移码变异6种、无义变异3种。结论LMS的致病原因是NOTCH3基因变异,主要表现为胸腰椎内多个侧脊膜膨出、颅面畸形、高血压、肌张力低下、发育迟缓、喂养困难和隐睾等。

肺动脉高压相关因子研究进展

肺动脉高压以肺血管阻力升高为特征，由于小肺动脉血管平滑肌细胞增殖，肺动脉血管阻力升高，导致右心室衰竭直至死亡。肺动脉高压的发生不能以单一的病理生理理论来解释，而是涉及多种分子介质、遗传因素和平滑肌细胞、内皮细胞等多种细胞异常。最近的研究表明多种因子通过不同的途径参与了肺动脉高压的发病机制，包括骨形成蛋白Ⅱ型受体、Notch3、过氧化物酶增殖体激活受体γ、PTEN等。

CADASIL的临床和影像学特征

伴皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病（ cerebral autosomal dominant arteriopathy with subcortical infarcts and leukoencephalopathy, CADASIL）是最常见的单基因遗传性脑小血管病，以偏头痛、反复发作性皮质下缺血、进行性认知功能减退和情感障碍为主要特征。CADASIL的诊断依赖于典型的临床症状和神经影像学表现，并通过皮肤活检和基因检测确诊。近年来，在CADASIL的临床和影像学特征方面获得了一些新的认识，文章就此方面的研究进展进行了综述。