BMP4对人根尖牙乳头干细胞增殖、迁移及矿化的作用机制研究

目的:观察骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic proteins 4,BMP4)对人根尖牙乳头干细胞(stem cells from the apical papilla,SCAPs)增殖、迁移及矿化的影响,并探讨可能机制。方法:取P3代对数期SCAPs,随机分为空白组、NC组、mimics组、mimics+DAPT[神经源性基因Notch同源蛋白1(neurogenic locus notch homolog protein 1,Notch1)/Jagged1信号通路抑制剂]组。空白组不处理,NC组转染阴性对照质粒BMP4 NC,mimics组转染过表达质粒BMP4 mimics,mimics+DAPT组转染BMP4 mimics并加入DAPT(10μmol/L)。MTT法检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移能力;茜素红染色法检测细胞矿化能力;实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA表达量;Western blot法检测细胞Notch1、Jagged1、发状分裂相关增强子1(Hes1)蛋白表达量。结果:与空白组、NC组比较,mimics组细胞24 h、48 h、72 h吸光度值,迁移量,矿化结节面积比,ALP、BSP、OCN mRNA表达量,Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达量升高(P<0.05);与mimics组比较,mimics+DAPT组细胞24 h、48 h、72 h吸光度值,迁移量,矿化结节面积比,ALP、BSP、OCN mRNA表达量,Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达量降低(P<0.05)。结论:过表达BMP4可提升SCAPs增殖、迁移能力并促进其矿化,推测其作用机制可能与激活Notch1/Jagged1信号通路有关。

mIL-4-SA双功能融合蛋白的制备和活性测定

目的制备链亲和素标记的鼠白介素4(mIL-4-SA)融合蛋白,并研究其生物学功能。方法通过RT-PCR克隆mIL-4基因,构建mIL-4-SA-pET21表达质粒,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,对表达的融合蛋白采用镍金属螯合(Ni-NTA)色谱柱纯化、透析复性。MTT法检测融合蛋白对C57小鼠胸腺细胞的增殖作用,流式细胞仪分析融合蛋白对生物素化的B16F10细胞锚定修饰率。结果成功构建了mIL4-SA-pET21质粒,并在大肠杆菌中实现高效表达,表达量达菌体总蛋白质的35%,纯化后的mIL-4-SA融合蛋白纯度达95%,并具有双重活性,即mIL-4对C57小鼠胸腺细胞具有增殖作用和SA介导的高效结合至已生物素化的B16F10肿瘤细胞表面的功能(表面锚定修饰效率96.69%)。结论研制的mIL-4-SA融合蛋白具有双重活性,可为研制表面修饰的新型肿瘤细胞疫苗提供基础。

化疗抑制下骨髓BMP4对造血干/祖细胞周期、凋亡的调控及其机制

目的:探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的骨髓抑制或应激造血条件下骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein4,BMP4)对造血干/祖细胞(HSPC)的周期、凋亡调控的作用及其相关机制。方法:设计构建BMP4过表达的C57BL/6转基因小鼠(transgenec group),选取周龄、性别、体重相匹配的野生型(WT)雌鼠为对照组,各实验重复3次。5-FU以150mg/kg的剂量诱导骨髓抑制模型,提取骨髓有核细胞。通过c-kit/Sca-1荧光抗体双标HSPC,分别用AnnexinV/PI和Ki-67/DAPI双染法观察其凋亡和细胞周期的变化。RT-g-PCR检测周期相关的造血调控因子,探讨BMP4调控HSPC细胞周期的分子机制。结果:生理状态下,野生型组和转基因组HSPC细胞周期和凋亡率无明显差异。骨髓抑制后,BMP4过表达小鼠骨髓中HSPC的G0期比例明显降低(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.05)。BMP4过表达小鼠骨髓基质中维持HSPC静息的低氧诱导因子Hif-1α和趋化因子CXCL12水平明显下调(P<0.01)。结论:在造血应激或骨髓抑制等非生理条件下,BMP4蛋白上调能促进HSPC进入细胞周期,促进其凋亡,且可能通过直接或间接下调Hif-1α和CXCL12表达来发挥对HSPC的周期调控功能。

miRNA-330-3p/Ap2m1轴在过表达GATA-4骨髓间充质干细胞外泌体抗心肌细胞凋亡中的作用

目的探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)分泌外泌体(BMSC^(GATA-4)exosome)通过miRNA-330-3p/Ap2m1轴减少心肌细胞凋亡,提高心肌梗死心功能。方法建立小鼠心梗模型,共分7组,分别经尾静脉注射BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome、BMSC^(miRNA-330-3p-inhibitor)-exosome、BMSC^(空载体)-exosome、BMSCexosome 48 h,同时将心梗未处理组及正常小鼠作为对照组。采用心脏彩超检测各组心功能,RT-PCR检测心梗心肌细胞内miRNA-330-3p的表达,Tunel法检测各组心梗心肌细胞凋亡数量。miRNA-330-3p对应靶基因Ap2.m1、Cnot4蛋白采用Western blot法进行检测。结果BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome组心梗心功能改善最为明显(P<0.05),其心肌细胞内miRNA-330-3p表达量最高(P<0.05)。BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome组心肌细胞的凋亡率最低(P<0.05),BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome组心梗心肌细胞内的Ap2.m1的表达最低(P<0.05)。结论过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞外泌体通过miRNA-330-3p/Ap2m1轴抗心肌细胞凋亡。

白藜芦醇通过SIRT1/AMPK信号通路减轻MPTP诱导的小鼠多巴胺能神经元丢失

目的观察白藜芦醇(RV)对帕金森病(PD)小鼠的神经保护作用,并探索其发挥神经保护作用的可能机制。方法将48只小鼠随机分为CON组、MPTP组、RV+MPTP组和EX527+RV+MPTP组,每组12只。腹腔注射MPTP建立PD小鼠模型,并给予RV灌胃、SIRT1特异性抑制剂EX257腹腔注射处理,利用免疫荧光、western blot等检测相关蛋白表达。结果给予RV后,与MPTP组相比,RV+MPTP组SIRT1蛋白表达显著增加(P<0.001),p-AMPK蛋白水平显著升高(P<0.01),Cleaved caspase 3蛋白水平显著下降(P<0.01),小鼠黑质区TH阳性神经元丢失率明显降低,纹状体组织中TH蛋白表达显著增加(P<0.01)。给予EX527后,阻断了RV的上述作用,p-AMPK蛋白水平显著降低(P<0.01),Cleaved caspase 3显著升高(P<0.01),小鼠黑质区TH阳性神经元丢失率明显升高,纹状体组织中TH蛋白表达显著下降(P<0.001)。结论 RV可能通过激活SIRT1/AMPK信号通路,SIRT1与AMPK相互调控,减少MPTP小鼠黑质区多巴胺能神经元丢失。

过表达心肌细胞转录因子骨髓间充质干细胞分泌外泌体抗心肌细胞凋亡的分子调控机制

目的过表达心肌细胞转录因子(GATA-4)的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)分泌的外泌体(BMSC^ATA-4-exosome )可能是修复心肌损伤的关键分子,文章探讨过表达GATA-4小鼠BMSC分泌外泌体(BMSC^ATA-4exosome)抑制心肌细胞凋亡的分子调控网络。方法在过表达GATA-4小鼠BMSC培养体系内加入miR-330-3p模拟剂(miR-330-3p-mimic)提取分泌的exosome与心肌细胞在低氧无血清条件下培养24h作为实验组(过表达miR-330-3p组),将过表达GATA-4组、空载体组、BMSC组作为混杂因素对照,同时将在低氧无血清条件下单独培养24h的心肌细胞及在正常条件下单独培养24h的心肌细胞作为阳性及阴性对照组。采用流式细胞技术检测各组心肌细胞的凋亡率。采用RT-PCR检测各组心肌细胞内miR-330-3p的表达量。并根据microRNA靶基因预测结果采用Western blot检测miR-330-3p对应靶基因Ap2m1及Cnot4转录蛋白表达。结果超过90%小鼠的BMSC表达CD29(表达率为99.71%)、CD44(表达率为97.28%)和SCA-1(表达率为99.4%),仅0.1%的细胞表达CD11b。过表达miR-330-3p组心肌细胞早期凋亡率[(7.90±0.34)%]较阴性对照组[(2.30±0.09)%]高,但较阳性对照组[(51.48±0.40)%]、BMSC组[(18.32±3.03)%]、空载体组[(16.99±2.93)%]、过表达GATA-4组[(10.22±0.35)%]明显降低(P<0.05)。过表达miR-330-3p组心肌细胞内的miR-330-3p的表达[(396.10±1.02)%]较阴性对照组[(1.37±0.33)%]、阳性对照组[(0.26±0.32)%]、BMSC组[(1.40±0.42)%]、空载体组[(1.41±0.27)%]、过表达GATA-4组[(3.80±0.62)%]明显增高(P<0.05)。过表达miR-330-3p组心肌细胞内Ap2m1、 Cont4的表达较阴性对照组、阳性对照组、BMSC组、空载体组、过表达GATA-4组明显下降(P<0.05)。结论过表达GATA-4的BMSCs分泌的外泌体通过miR-330-3p抑制Ap2m1蛋白表达抗心肌细胞凋亡。

灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对Cdk4表达的影响

目的探讨灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对依赖细胞周期蛋白激酶4(Cdk4)表达的影响。方法给予实验对照组和灵芝孢子组妊娠E7.75d的小鼠一次性胃饲维甲酸,造成这2组孕鼠的胚胎出现神经管畸形。然后,给予灵芝孢子组孕鼠胃饲灵芝孢子溶液。在孕期E10.5d时取出2组孕鼠的胚胎,应用免疫荧光组织化学染色和Western blotting检测胚胎神经管神经上皮依赖细胞周期蛋白激酶4(Cdk4)的表达情况。结果在灵芝孢子组可以观察到形态正常的胚胎中,神经管的神经上皮细胞有Cdk4的表达,其表达水平与空白对照组及正常对照组相比较没有明显差异。在灵芝孢子组形态异常的胚胎中,其神经管的神经上皮细胞也有Cdk4的表达,但其表达水平与空白对照组及正常对照组相比较是低的。结论灵芝孢子可能是通过促进神经管神经上皮细胞上调Cdk4的表达来减轻维甲酸诱导的胚胎小鼠神经管畸形。

丝裂霉素对小鼠淋巴瘤EL-4细胞P21蛋白表达的影响

目的:探讨丝裂霉素(MMC)对小鼠淋巴瘤EL- 4细胞P2 1蛋白表达的影响。方法:采用免疫荧光染色及流式细胞术检测P2 1蛋白表达的时程和量效改变。结果:时程实验研究证实,给予2 m g·L- 1 MMC处理后,EL- 4细胞中P2 1蛋白表达在2～4 8h明显高于对照组(P<0 .0 5 ,P<0 .0 1)。量效实验结果证实,给予1、2和4 mg·L- 1 MMC处理后2 4 h,P2 1蛋白表达与对照组相比明显增高(P<0 .0 1)。结论:MMC能诱导P2 1蛋白表达增高,并存在时间和剂量依赖关系。

4.1R基因敲除小鼠血液生理生化参数分析

目的:检测并分析蛋白4.1R基因敲除小鼠(4.1R-/-)和野生型小鼠(4.1R+/+)血液生理生化参数。方法:摘眼球法采集两组小鼠(n=6)血液,用全自动血液细胞分析仪和生化分析仪检测血液生理生化参数。结果:血液生理参数中,4.1R-/-小鼠红细胞计数、血红蛋白、红细胞压积和中性粒细胞比率显著低于野生型小鼠(P<0.05);血小板计数、平均血小板体积、血小板压积、白细胞计数、淋巴细胞比率显著高于野生型小鼠(P<0.05)。生化参数中,4.1R-/-小鼠碱性磷酸酶显著低于野生型小鼠,总胆红素、直接胆红素和间接胆红素显著高于野生型小鼠(P<0.05)。结论:蛋白4.1R缺失可导致慢性溶血性贫血,4.1R-/-小鼠相关血液生理生化参数随之改变。

γ-促分泌酶抑制剂对脑缺血再灌注小鼠海马CREB表达的影响

目的研究γ-促分泌酶抑制剂MWl67阻断Notch信号对脑缺血再灌注小鼠海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)表达的影响。方法 72只昆明小鼠随机分为:假手术组(Sham,8只)、γ-促分泌酶抑制剂组(MWl67,32只)、缺血再灌注组(I/R,32只)。γ-促分泌酶抑制剂组和I/R组依据缺血后再灌注的不同时间点再细分为1、3、7、14 d 4个亚组。应用免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组小鼠海马CREB蛋白的表达。结果免疫组织化学方法检测时发现,缺血处理后1d时,CREB表达迅速增高,之后持续激活,与假手术组相比,显著升高(P<0.01);与相同时间点的缺血组比较,MWl67组的CREB蛋白阳性表达则明显升高(P<0.05);Western blot方法也得到了相同的结论。结论γ-促分泌酶抑制剂很可通过上调CREB蛋白的表达参与脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。

BMP4、VEGF、sFlt1多基因逆转录病毒转染肌源性细胞对小鼠体内成骨过程的影响

目的:研究以肌源性细胞为基础的BMP4、VEGF、s Flt1多基因治疗在小鼠体内对成骨过程的影响。方法:分别以2种肌源性细胞C2C12和PM为细胞载体,用BMP4、VEGF、s Flt1逆转录病毒进行重复转染。2种肌源性细胞分别重复转染后,产生6组实验细胞,分别是C2C12-B-sF lt1、C2C12-B、C2C12-B-VEGF、PM-B-sF lt1、PM-B、PMB-VEGF。6组细胞在体外复合明胶海绵后分别植入小鼠的股肌袋内。术后不同时间应用组织学、X线检查观察各组的成骨量以及软骨化骨的组织学演变过程。结果:C2C12-B-sF lt1和C2C12-B 2组细胞在体内可引发软骨化骨过程,2组的成骨量在特定的时间段内无明显区别,但X线检查显示2组的成骨空间方向不尽相同。C2C12-B-VEGF在体内没有诱发软骨化骨的过程,其所诱发的组织学过程类似血管瘤。PM-B-sF lt1、PM-B、PM-B-VEGF 3组细胞在体内诱发软骨化骨的过程较为类似,3组的成骨量在35 d的观察期内无明显区别。结论:骨骼肌源性细胞可作为BMP4基因治疗的基础细胞,而在增加了VEGF和sF lt1基因的复合基因转染后,其软骨化骨的表现具有细胞种群的特异性。

氟西汀通过上调海马内溴结构域蛋白4的表达改善慢性束缚应激所致小鼠的抑郁样行为

目的探讨氟西汀(FLX)对慢性束缚应激(CRS)所致小鼠抑郁样行为及海马内溴结构域蛋白4(BRD4)表达的影响。方法 24只雄性昆明小鼠随机分为生理盐水对照(NS)组、抑郁模型(CRS)组、氟西汀干预(CRS+FLX)组。慢性束缚应激3周建立小鼠抑郁模型,应激的第8天至第21天CRS+FLX组于应激前30 min腹腔注射氟西汀(10 mg/kg),NS组及CRS组注射等体积生理盐水。采用糖水偏好实验、喷糖实验、强迫游泳实验、新旧事物识别实验和旷场实验检测各组小鼠行为变化;采用Western blotting及Real-time PCR法检测小鼠海马BRD4蛋白和mRNA的表达情况。结果与NS组相比,CRS组小鼠表现出明显的抑郁样行为,包括糖水偏好百分比显著降低(P<0.01),喷糖实验舔糖时间缩短(P<0.05),强迫游泳不动时间增加(P<0.01),新事物辨别指数降低(P<0.0001),抗抑郁药FLX干预可逆转CRS所诱导的上述抑郁样行为表现(P<0.05);与NS组相比,CRS组小鼠海马BRD4蛋白及mRNA的表达明显下调(1.0000±0.04577比0.08337±0.01658; 1.0000±0.04379比0.6672±0.03193,P<0.05),而FLX可上调抑郁小鼠海马BRD4蛋白及mRNA的表达(0.08337±0.01658比0.4983±0.08574; 0.6672±0.03193比0.8572±0.03181,P<0.05)。结论氟西汀可能通过上调海马BRD4的表达改善小鼠抑郁样行为。

阻断Notch信号通路降低1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶诱导的多巴胺能神经元损伤

目的探讨Notch信号通路的缺失对1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的中脑多巴胺能神经元损伤的影响。方法选用5月龄TH-Cre Rbpj基因敲除小鼠及野生型小鼠共48只,腹腔注射MPTP建立帕金森病(PD)模型,通过行为学、免疫组织化学和Western blotting等方法研究阻断Notch信号通路对MPTP诱导的中脑黑质多巴胺能神经元损伤的影响。结果 MPTP处理的Rbpj CKO小鼠运动能力强于MPTP处理的野生型小鼠;Rbpj CKO小鼠黑质致密部神经元数目较野生型小鼠减少;MPTP处理后,野生型小鼠多巴胺能神经元数目明显下降,而Rbpj CKO小鼠多巴胺能神经元数目无明显改变;Western blotting结果显示,MPTP处理后Rbpj CKO小鼠和野生型小鼠Notch-1胞内结构域(NICD-1)的表达均明显增加,且Rbpj CKO小鼠表达量增加更为显著。结论Notch信号通路缺失导致多巴胺能神经元数量减少,阻断Notch信号通路可以降低MPTP诱导的多巴胺能神经元损伤。

骨形态发生蛋白4/Smad信号通路在小鼠原始卵泡卵母细胞凋亡中的调控作用

目的探讨骨形态发生蛋白(BMP)4/Smad信号通路在小鼠原始卵泡卵母细胞凋亡中的调控作用。方法取出生3d的雌性昆明小鼠卵巢,采用两步酶消化法,分离纯化卵母细胞,进行原代培养。将卵母细胞分为3组:正常对照组(Con组)、添加重组人BMP4组(BMP4组)、添加BMP4和BMP4抑制剂6-{4-[2-(1-呱啶基)乙氧基]苯基}-3-(4-吡啶基)吡唑并(1,5-A)嘧啶(dorsomorphin)组(BMP4+抑制剂组)。采用TUNEL法,检测BMP4对卵母细胞凋亡的影响;采用免疫组织化学染色与实时定量PCR,检测BMP4对卵母细胞中p-Smad1/5/8、sohlh2、ckit及foxo3a表达的影响。采用RNA干扰技术、转染sohlh2质粒和LY294002处理,探讨BMP4/Smad信号通路在小鼠原始卵泡卵母细胞凋亡中的调控机制。结果 TUNEL结果显示,BMP4组凋亡卵母细胞比例明显低于Con组(P<0.05)和BMP4+抑制剂组(P<0.05);加入BMP4可明显促进细胞Smad入核,上调sohlh2和c-kit表达,抑制foxo3a入核;转染sohlh2 siRNA后,可明显阻断BMP4抑制卵母细胞凋亡的作用;转染sohlh2质粒后,p-foxo3a表达量显著增加,LY294002可明显抑制sohlh2促进foxo3a磷酸化的作用。结论激活BMP4/Smad信号通路可抑制小鼠原始卵泡卵母细胞的凋亡,其作用机制可能是通过上调sohlh2和c-kit基因表达,进而调控foxo3a入核而实现的。

小鼠IL-4重组质粒的构建及目的蛋白的表达和纯化

目的构建重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,纯化目的蛋白并鉴定。方法将优化后的小鼠IL-4cDNA片段克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,获得重组质粒pET32/rmIL-4,转入BL21(DE3)中经IPTG诱导表达得到包涵体。经复性处理后,依次用阴离子交换柱和分子筛纯化蛋白。对纯化得到的蛋白用Western blot检验免疫学特异性,用mIL-4生长依赖性细胞株CTLL-2增殖实验和动物实验测定其生物学活性。结果经酶切和测序证实重组质粒pET32/rmIL-4构建成功。诱导得到的包涵体用3mol/L盐酸胍溶液洗涤后溶于加有β-巯基乙醇的7mol/L盐酸胍溶液中变性,在pH9.5的条件下梯度透析复性。纯化出的蛋白经Western blot鉴定,能与抗小鼠IL-4抗体特异性结合;经细胞和动物实验鉴定,rmIL-4蛋白具有生物学活性,能刺激mIL-4生长依赖性细胞株CTLL-2增殖,使小鼠体内细胞因子发生从TH1到TH2的漂移。结论成功制备了高纯度、具有生物学活性的小鼠IL-4,为进一步研究其生物学功能提供了条件。

Notch信号介导骨细胞过表达BMP4促进骨髓基质细胞成骨分化

目的探究骨细胞MLO-Y4过表达骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein-4,BMP4)通过Notch信号对骨髓基质细胞ST2成骨分化的影响。方法使用BMP4重组腺病毒(Ad-BMP4)以及阴性对照(Ad-GFP)分别感染MLO-Y4后与ST2共培养,分为GFP组及BMP4组;Western blot检测MLO-Y4细胞BMP4蛋白表达;采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测MLO-Y4的BMP4和Notch配体基因、共培养体系中成骨标志基因、Notch靶基因以及促血管生成因子表达;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及生化定量检测ALP活性;在共培养体系中加入Notch信号抑制剂DAPT后,再次检测上述指标。结果MLO-Y4过表达BMP4,上调Notch配体Jag1、Jag2、Dll4表达;ALP染色以及生化定量结果显示共培养第1天GFP组和BMP4组ALP活性差异无统计学意义,在第3、5天,BMP4组ALP活性更高(P<0.05);BMP4组成骨标志基因在第1天仅Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)显著升高(P<0.05),第3、5天BMP4组Alp、Runx2、骨钙蛋白(osteocalcin,Ocn)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ)均显著增高(P<0.05);第3天BMP4组Notch信号靶基因Hey1、Hey2,血管内皮生长因子(vascular endothlial growth factor,VEGF)、低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor 1α,HIF1α)的表达也显著增高(P<0.05);加入DPAT抑制Notch信号后,BMP4组ALP活性、成骨标志基因以及促血管生成因子表达均显著下降(P<0.05)。结论MLO-Y4过表达BMP4可以促进ST2成骨分化,该过程可能与Notch信号增强有关。

高脂饮食对子宫内膜异位症小鼠异位病灶生长及FABP4蛋白表达的影响

目的:探究高脂饮食对子宫内膜异位症发展的影响及作用机制。方法:取20只C57BL/6J小鼠建立子宫内膜异位症小鼠模型,将建模小鼠随机分为高脂饮食组和普食组,每组9只,高脂饮食组小鼠采用高脂饲料饲养,普食组小鼠采用普通饲料饲养,每周测量小鼠体重1次。饲养8周后取静脉血并处死小鼠,测量两组小鼠体重、观察子宫内膜异位病灶的大小及形态,计算Lee′s指数,免疫组化法检测子宫内膜异位病灶中脂肪酸结合蛋白4(FABP4)蛋白的表达,ELISA法测定两组小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平,Western blot检测子宫内膜异位病灶中PPARγ和NF-κB蛋白的表达。结果:高脂饮食组小鼠饲养8周后体重增加量、Lee′s指数和子宫内膜异位病灶体积大于普食组小鼠(P<0.05)。高脂饮食组小鼠子宫内膜异位病灶中FABP4蛋白的阳性表达高于普食组小鼠(P<0.05)。高脂饮食组小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平高于普食组小鼠(P<0.05)。与普食组比较,高脂饮食组小鼠子宫内膜异位病灶中PPARγ蛋白表达降低,NF-κB蛋白表达升高(P<0.05)。结论:高脂饮食促进小鼠子宫内膜异位病灶中FABP4的表达,从而促进子宫内膜异位症的发展,其机制可能与抑制PPARγ表达和激活NF-κB有关。

电针天枢穴和太冲穴对便秘型肠易激综合征模型小鼠5-羟色胺信号系统的影响

目的:观察电针天枢穴和太冲穴对便秘型肠易激综合征(IBS-C)模型小鼠5-羟色胺(5-HT)信号系统的影响,为临床治疗提供依据。方法:36只野生型小鼠,按随机数字表法分为3组,每组12只。对照组不做处理,模型组与电针组经冰水灌胃法成功建立IBS-C模型。电针组针刺双侧天枢穴、太冲穴,日1次,每次15 min,共治疗14 d。对照组和模型组均正常喂养,不做其他特殊处理。观察各组小鼠首粒黑便排出时间、粪便颗粒数及含水量,检测各组小鼠血清中5-HT的表达以及远端结肠组织5-羟色胺4型受体(5-HT4R)蛋白及mRNA的表达。结果:与对照组比较,模型组小鼠首粒黑便排出时间延长,粪便颗粒数及含水量降低,血清中5-HT的表达升高,远端结肠组织5-HT4R蛋白及mRNA的表达下调;与模型组比较,电针组小鼠首粒黑便排出时间缩短,粪便颗粒数及含水量增加,小鼠血清中5-HT的表达量下调,远端结肠组织5-HT4R蛋白及mRNA的表达上调。结论:电针天枢穴和太冲穴可以通过调节5-HT信号系统治疗IBS-C。

FABP7与TLR4在糖尿病周围神经病变模型小鼠脊髓中的表达

目的观察脂肪酸结合蛋白7(FABP7)、Toll样受体4(TLR4)在糖尿病周围神经病变(DPN)小鼠脊髓中的表达。方法采用随机数字表法将20只C57BL/6小鼠分为2组:对照组(Ctrl组)、DPN组,每组10只。采用连续2 d腹腔注射链脲佐菌素(100 mg·kg^(-1))复制DPN小鼠模型,Ctrl组小鼠同方法等剂量注射柠檬酸钠缓冲液;测2组0、2、4、6、8和10周时小鼠体重、随机血糖、热缩足潜伏期(TWL)、机械缩足反应阈(MWT);免疫组化法测定2组足底表皮神经纤维密度(INEFD);Western blot法检测2组脊髓FABP7和TLR4的表达;ELISA法测定2组血浆与脊髓中TNF-α水平。结果与Ctrl组比较,DPN组随机血糖(2、4、6、8和10周)、TWL(4、6、8和10周)明显升高(均P<0.05),体重(2、4、6、8和10周)、MWT(2、4、6、8和10周)、IENFD明显下降(均P<0.05)。与Ctrl组比较,DPN组FABP7、TLR4蛋白表达显著上调(均P<0.05),血浆与脊髓组织中TNF-α水平均升高(均P<0.05)。结论DPN小鼠模型中脊髓组织FABP7、TLR4表达均增高,提示FABP7参与DPN发病,可能与FABP7调控TLR4受体影响炎症因子水平有关。

G蛋白耦联受体30对去卵巢小鼠子宫中toll样受体4分布与表达的影响

目的探讨雌激素膜性受体G蛋白耦联受体30(GPR30)在子宫免疫中的作用。方法将80只小鼠分为假手术(sham)组、卵巢摘除(OVX)组、OVX注射0.1nmol、0.5nmol和2.5nmol GPR30激动剂G1组及OVX小鼠注射0.1nmol、0.5nmol和2.5nmol GPR30拮抗剂G15组,分别采用免疫组织化学SP法及实时定量PCR技术,对子宫中toll样受体4(TLR4)的分布及TLR4 mRNA的表达量进行研究。结果 TLR4免疫反应阳性产物主要分布在小鼠子宫的内膜上皮、腺上皮及间质细胞;G1高浓度组中TLR4的免疫组织化学阳性着色强度显著低于其他组(P<0.01),去卵巢小鼠给予GPR30拮抗剂G15后,TLR4的相对表达量随G15浓度的升高而升高,各浓度组间TLR4的相对表达量显著性变化差异同OVX+G1组。各组小鼠子宫中TLR4 mRNA的表达量变化与TLR4相对表达量变化一致。结论 GPR30可下调子宫中TLR4的表达,并可能介导雌激素参与子宫的局部免疫功能的调节。