Notch1基因在神经干细胞分化过程中的表达

目的 研究Notch1基因在全反式维甲酸 (all trans retinoic acid ,ATRA)诱导人胚胎神经干细胞分化为神经元过程中的表达及其发挥的作用。方法 用 1 μmol/L的ATRA在体外诱导人胚胎神经干细胞 ,诱导 7d后 ,做神经元特异性烯醇化酶 (neuronspecificendase,NSE)免疫荧光染色 ,计数分化为神经元的比例。于诱导前、诱导 3d和诱导 7d ,提取细胞的总RNA。用半定量RT PCR法检测Notch1基因的表达。结果 与对照组相比 ,ATRA能显著提高人胚胎神经干细胞分化为神经元的比例 (P <0 .0 1 )。Notch1基因在ATRA诱导后明显下调 (P <0 .0 0 1 )。结论 ATRA能显著提高人胚胎神经干细胞分化为神经元的比例 ,Notch1基因在人胚胎神经干细胞分化为神经元的过程中起负调控作用。

人胚胎神经干细胞向神经元分化过程中Notch1基因的表达

目的 :探讨Notch1基因在全反式维甲酸 (ATRA)诱导人胚胎神经干细胞分化为神经元过程中的表达及其发挥的作用。方法 :用不同浓度 (0 .5、1、5和 10 μmol/L)的ATRA在体外诱导人胚胎神经干细胞 ,7d后 ,做NSE免疫荧光染色 ,计数分化为神经元的比例。用 1μmol/L的ATRA诱导人胚胎神经干细胞 ,于诱导前、诱导 3d和诱导 7d,提取细胞的总RNA ,用半定量RT PCR法检测Notch1基因的表达。结果 :与对照组相比较 ,ATRA能显著提高人胚胎神经干细胞分化为神经元的比例 (P <0 .0 1)。其中 1μmol/L的ATRA诱导人胚胎神经干细胞分化为神经元的比例最高 ,为 (2 9.2 0± 1.0 9) %。Notch1基因在ATRA诱导后表达明显下调 (P <0 .0 0 1)。结论 :ATRA能显著提高人胚胎神经干细胞分化为神经元的比例 。

激活Notchl信号对宫颈癌细胞生长的影响及其机制

目的 研究Notch1（ICN）基因对人宫颈癌细胞生长的影响，并对其作用机制进行探讨。方法 采用脂质体法转染人宫颈癌HeLa细胞，MTT比色法测定瞬时表达Notch1（ICN）对细胞生长的影响，用流式细胞仪分析细胞周期分布的变化，Western blot法检测P53蛋白的表达改变。结果 瞬时表达Notch1（ICN）基因可以抑制HeLa细胞的生长，使细胞周期停滞在G1期，并上调细胞周期调控蛋白P53的表达水平。结论 通过影响细胞周期的分布及细胞周期调控蛋白的表达，激活Notch1基因可抑制人宫颈癌细胞的生长。

利用高效siRNA表达载体抑制结肠癌细胞Notch1基因表达的研究

目的 探讨利用靶向Notch1基因的高效siRNA真核表达载体抑制结肠癌细胞中Notch1表达的可行性.方法 根据Notch1 cDNA编码序列,设计并合成靶向Notch1基因的4对特异性RNA干扰片断,将其克隆入pSilencer4.1-CMV neo载体中.将重组载体及其阴性对照载体转染结肠癌细胞SW480,采用逆转录-多聚酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR）检测各组细胞中Notch1 mRNA表达水平,筛选获得能够高效抑制结肠癌细胞Notch1表达的siRNA真核表达载体.结果 成功构建了4个靶向Notch1基因的siRNA真核表达载体;转染结肠癌细胞SW480后,与对照组相比各干扰组细胞中Notch1 mRNA表达水平均明显下降,其中尤以psiNotch1-A组下降最为明显.结论 成功筛选出能够在结肠癌细胞中高效抑制Notch1基因表达的特异性siRNA真核表达载体,为进一步利用siRNA靶向Notch1治疗结肠癌奠定了基础.

微小RNA-137调控Notch1基因介导自噬在肝癌细胞增殖和迁移中的作用

目的探讨微小RNA-137（miR-137）调控Notchl基因并介导自噬对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法体外培养人SMMC7721肝癌细胞系，用miR-137模拟物、miR-137抑制物以及Notchl基因的干扰RNA（siRNA）转染细胞，分为正常对照组（NC组）、miR-137模拟物组、miR-137抑制物组、NotchlsiRNA组。采用实时定量-PCR（RT—PCR）检测SMMC7721细胞转染后miR-137与NotchlmRNA的表达。细胞迁移实验（Transwell）分析miR-137及Notchl基因对SMMC7721细胞迁移侵袭的影响。细胞免疫组化观察SMMC7721细胞B-链蛋白（13-catenin）和波形蛋白（vimentin）的表达情况，自噬双标腺病毒检测SMMC7721细胞自噬体个数的变化。采用蛋白印迹法（Westernblot）检测Notchl基因、上皮型钙黏蛋白（E-Cadherin）、神经型钙黏蛋白（N—Cadherin）、vimentin、选择性自噬接头蛋白（P62）及微管相关蛋白1轻链3（LC3）的表达。结果实时荧光定量PCR（RT—PCR）结果显示miR-137抑制物组Notchl基因的相对表达含量（5．71±0．45）明显高于miR-137模拟物组（0．21±0．06），差异有统计学意义（P〈0．05）。Transwell实验显示miR-137模拟物组（66．00±4．55）和NotchlsiRNA组（88．00±6．78）肝癌细胞侵袭转移的个数较miR-137抑制物组（515．00±35．12）明显降低（P〈0．05）。细胞组化检测显示miR-137模拟物组及NotchlsiRNA组B—catenin表达明显增加且vimentin表达明显下降（P〈0．05）。自噬双标腺病毒检测结果显示miR-137模拟物组自噬体数量（5．50±3．70）明显低于miR-137抑制物组（32．75±4．11），差异有统计学意义（P〈0．05）。Westernblot检测显示，与miR-137抑制物组、NC组比较，miR-137模拟物组Notchl基因、N—Cadherin、vimentin和LC3表达水平明显降低，E—Cadherin、P62表达水平明显增高。NotchlsiRNA组Notchl基因、N-Cadherin、LC3表达水平明显低于NC组，E—Cadherin、P62表达水平明显高于NC组。结论miR-137可通过抑制Notchl基因的表达抑制自噬从而抑制肝癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭，有可能成为肝癌治疗的新靶点。