下调SLP-2基因表达抑制脑胶质瘤细胞增殖及诱导凋亡的机制研究

目的:探讨下调人Stomatin like protein 2(SLP-2)基因表达对脑胶质瘤细胞增殖凋亡的影响。方法:SLP-2的靶向siRNA序列转染人脑胶质瘤U251细胞(SLP-2敲低组),另设空白组(细胞未做任何处理)和阴性对照组(细胞转染无义siRNA序列),转染48 h后Western blot检测各组细胞中SLP-2、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Notch1、Hes1的蛋白表达;CCK8检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:阴性对照组SLP-2的蛋白表达与空白组差异无统计学意义(P>0.05),而SLP-2敲低组SLP-2的蛋白表达显著低于空白组(P<0.05);阴性对照组细胞存活率、细胞凋亡率、IL-6和TNF-α的mRNA表达及Bcl-2、Bax、Notch1、Hes1蛋白表达与空白组差异无统计学意义(P>0.05),而SLP-2敲低组细胞存活率、IL-6和TNF-α的mRNA表达及Bcl-2、Notch1、Hes1的蛋白表达显著低于空白组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于空白组(P>0.05)。结论:下调SLP-2基因表达可显著抑制脑胶质瘤细胞增殖及诱导细胞的凋亡,下调炎症细胞因子IL-6和TNF-α的表达,其机制与抑制Notch1信号通路有关。

Notch1信号调控小鼠胸腺T细胞凋亡的机制研究

目的:Notch1基因介导的信号传递系统对哺乳动物胸腺T细胞的发育极为重要,而细胞凋亡是T细胞分化和成熟过程中重要的调控方式,Notch1对小鼠胸腺T细胞凋亡的影响。方法:应用Notch1基因配体结合域点突变小鼠的胸腺T细胞以及突变小鼠胸腺T细胞和OP9-DL细胞共培养体系,研究Notch1对小鼠胸腺T细胞自发和诱导性凋亡的影响。结果:Notch1胞外段点突变后,Notch1信号转导能力降低,胸腺T淋巴细胞的自发性凋亡、诱导凋亡以及配体介导下的细胞凋亡等均有所增加;此外,Notch1信号传递能力的降低增强了促凋亡基因的表达而降低凋亡抑制基因的表达。结论:Notch1和配体相互作用通过凋亡相关基因的表达参与T细胞凋亡的调控。

表没食子儿茶素没食子酸酯通过调控P53/miR-34a抑制鼻咽癌细胞的增殖

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鼻咽癌细胞增殖的影响,并以微小RNA-34a(miR-34a)为靶点探讨其作用机制。方法:不同浓度的EGCG处理CNE-2Z细胞,CCK-8法、Ed U染色法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的改变;流式细胞术检测细胞周期分布的改变;Western blot检测P53和Notch1蛋白水平的变化;real-time PCR检测miR-34a和Notch1 mRNA的表达。结果:EGCG处理后,CNE-2Z细胞的增殖受到明显抑制,克隆形成能力降低,细胞周期阻滞于G0/G1期,呈剂量依赖关系;随着EGCG浓度增高,P53和miR-34a的表达水平明显上调,而其下游Notch1 mRNA和蛋白的表达水平则明显下降。结论:EGCG可能通过调控P53/miR-34a/Notch1通路诱导细胞周期阻滞,抑制鼻咽癌细胞增殖。

Notch1和细胞间黏附分子-1在原发性肝癌细胞中的作用

目的探讨Notch1和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在原发性肝癌中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学SP法检测34例原发肝癌组织、14例癌旁正常肝组织中Notch1和ICAM-1的表达情况。结果原发性肝癌组织中Notch1和ICAM-1表达定位于细胞核和/或细胞质,Notch1的表达低于癌旁正常肝组织,ICAM-1的表达明显高于癌旁正常肝组织(P<0.05)。二者的表达与性别、年龄、肿瘤大小等没有相关性(P均>0.05),与淋巴结转移、组织分化及癌栓等有关(P均<0.05);二者之间阳性表达呈明显负相关(P<0.05)。结论 Notch1和ICAM-1的表达与原发性肝癌的发生、发展和转移密切相关。

大鼠脊髓损伤后内源性神经干细胞分化调控的Notch-1表达

目的探讨成年大鼠在发生急性脊髓损伤后，其Notch-1和脊髓内源性神经干细胞（ENSCs）的表达及变化，并探讨其在神经再生过程中的作用。方法30只雌性SD大鼠（3—6月龄），体重300～350g，采用随机数字表法分为对照组（n=5）和实验组（n=25）。对照组给予椎板减压术；实验组为脊髓损伤组。两组术后1、3d、1、2、4周时进行行为学、组织学检查，采用免疫组化及免疫荧光法检测ENSCs的增殖及Notch-1蛋白的表达。结果行为学结果示：实验组的大鼠在每个时间点都发生了不同程度的运动功能障碍。组织学结果示：实验组大鼠术后神经纤维结构出现紊乱，水肿及变性。免疫组化结果示：实验组大鼠术后各个时间点的脊髓损伤部位都有Notch-1的表达，第3天时阳性区域面积达高峰。免疫荧光检测示：实验组大鼠损伤节段附近5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）阳性细胞数高于对照组。用立体定量学法检测到脊髓损伤后1周出现的新生有丝分裂细胞约是对照组的75倍左右。用直线回归法分析两组术后不同时间点的BrdU和Notch-1蛋白表达阳性区域的面积呈直线相关。结论大鼠脊髓损伤后ENSCs和Notch-1的表达有一定相关性。Notch-1的表达增加，可能与大鼠ENSCs的早期增殖有关。

Notch1在非小细胞肺癌中的研究

Notch1信号通路是许多细胞信号转导通路的交汇点，不仅在正常组织、细胞的分化、发育过程中起重要作用，而且与一些肿瘤的发生、发展相关，如食管癌、胃癌、宫颈癌、结肠癌、肺癌等。Notch1在非小细胞肺癌中的作用多样。了解Notch1和非小细胞肺癌的关系有利于进一步阐明非小细胞肺癌的发生机制，为非小细胞肺癌的治疗提供一个新的有希望的治疗靶点。

小细胞肺癌中Notch1信号通路、ASCL1与EMT关系研究进展

小细胞肺癌(SCLC)是人类常见恶性肿瘤之一,其具有转移率和复发率高、对初始化疗敏感、易获得化学耐药等特征。上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是肿瘤细胞发生侵袭、转移前重要的细胞表象,EMT的发生与多种细胞因子、信号传导通路及转录因子有关。尽管Notch途径激活在非小细胞肺癌(NSCLC)中起着致癌的作用,但在神经内分泌肿瘤(neuroendocrine tumors,NET)中,Notch通路激活抑制肿瘤生长。在SCLC中,Notch1通路激活可以诱导产生E-钙黏蛋白(E-Cadherin),增强细胞的粘附,诱导间质-上皮转化,从而抑制EMT过程。ASCL1(achaete-scute complex homologue 1)是SCLC一种系特异性基因,其编码的转录因子同样具有促进神经内分泌分化、EMT的功能。Notch1信号通路可以抑制ASCL1的转录,同时也可对ASCL1进行转录后调节。因此,可通过激活Notch1信号通路、抑制ASCL1表达从而抑制SCLC的发生、侵袭和转移。

Notch1／RBP-JK／Msχ2信号通路在慢性肾脏病血管钙化大鼠模型主动脉中的表达及作用

目的观察Notchl信号通路在慢性肾脏病（CKD）血管钙化大鼠模型主动脉上的表达，探讨该信号通路在CKD主动脉钙化中的作用。方法将40只SD雄性大鼠随机分为正常对照组（Nor组，n=15）和慢性肾脏病血管钙化组（CKD＋VC组，n=25）。分别在第4、6、8周后收集两组大鼠尿液检测24h尿蛋白量；经腹主动脉采血检测肾功能及血钙、血磷。HE染色观察大鼠肾组织病理改变。茜素红染色观察大鼠主动脉钙盐沉积。免疫组化检测大鼠主动脉组织ol平滑肌肌动蛋白（仅一SMA）、Runt相关转录因子2（Runχ2）和Notchl、免疫球蛋白KJ区重组信号结合蛋白（RBP—JK）、Msh同源异型基因2（Msχ2）、Jaggedl和Notchl胞内域（N1一ICD）信号蛋白的表达。实时定量PCR检测大鼠主动脉ol—SMA、平滑肌肌动蛋白220【（SM22c~）、Runχ2、碱性磷酸酶（ALP）和Notchl通路相关分子（Notchl、RBP—JK、Msχ2和Jaggedl）的mRNA表达。结果各时间点CKD＋VC组大鼠24h尿蛋白量、血尿素氮和血肌酐均较Nor组显著升高（均Pc0．05）。各时间点Nor组大鼠主动脉均未见明显钙盐沉积，CKD＋VC组大鼠均可见血管壁中膜层广泛存在呈线性连续分布的钙化斑块。Nor组主动脉壁上d，SMA广泛表达而Runχ2仅少量表达；而与Nor组比较，CKD＋VC组仅，SMA表达显著减少而Runχ2显著增加（均P〈0．05）。Notchl、RBP—JK、Msχ2、Jaggedl和N1一ICD信号蛋白在Nor组大鼠主动脉壁上均仅有微量散在表达；而CKD＋VC组大鼠主动脉中上述蛋白在各时间点较Nor组均增加（均P〈0．05）。与Nor组相比，CKD＋VC组大鼠主动脉中各时间点仅一SMA和SM22c^mRNA表达均明显降低（均P〈0．05），而Runχ2和ALPmRNA表达均显著升高（均P〈0．05）。各时间点CKD＋VC组大鼠主动脉Notchl相关信号通路mRNA表达较Nor组均明显增加（均P〈0．05）。结论CKD血管钙化大鼠主动脉钙化时存在平滑肌细胞的表型转变及Notchl／RBP—JK／Msχ2信号通路的激活。该信号通路可能是CKD主动脉钙化重要的信号转导通路之一。