Advances in Researches of Extraction Processes of Total Saponins of Pnanx Notoginseng

Traditional extraction methods of total saponins of Panax notoginseng include cold soaking method,water decoction method,alcohol reflux method,percolation method,macroporous resin adsorption method,and accelerated solvent extraction( ASE) method. Modern extraction methods include ultrasonic extraction,microwave assisted extraction,supercritical CO_2 extraction,microbial fermentation assisted extraction,neural network model optimized extraction method,and multi-stage countercurrent extraction method. This paper discussed principles of these methods and compared their advantages and disadvantages.

Composition of Ophiopogon Polysaccharide,Notoginseng Total Saponins and Rhizoma Coptid is Alkaloids Inhibits Myocardial Apoptosis in Diabetic Atherosclerosis Rabbits

Objective: To investigate the effects of Composition of Ophiopogon polysaccharide, Notoginseng total saponins and Rhizoma Coptidis alkaloids(CONR) on myocardial apoptosis of diabetic atherosclerosis(DA) rabbits Methods: Sixty male New Zealand white rabbits were randomly divided into 6 groups [control group, model group, CONR high-dose group(450 mg/kg), CONR medium-dose group(150 mg/kg), CONR low-dose group(50 mg/kg), and simvastatin group] by using a completely random method, 10 in each group. DA model was established by intravenously injected alloxan combined with high-fat diet and abdominal aortic balloon injury. After mediation for 10 weeks, fasting blood glucose(FBG), glycosylated hemoglobin(GHB), glycosylated serum protein(GSP), fructoseamine(FRA), aldose reductase(AR), advanced glycation end products(AGEs) in serum were measured by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) method;the expression of receptor of AGEs(RAGE) in myocardial tissue were observed by immunohistochemical method;and p-Jun N-terminal kinase(p-JNK), caspase-3, B-cell lymphoma-2(bcl-2) protein expression in myocardial tissue were measured by Western blotting. The myocardial apoptosis was detected by Td T-mediated d UTPnick-end labeling(TUNEL) method, and apoptosis index(AI) was calculated. Results: Compared with the control group, serum FBG, GHB, GSP, FRA, AR, AGEs and the expression of myocardium RAGE, p-JNK, caspase-3 proteins, as well as apoptosis index(AI) were significantly increased and bcl-2 protein was significantly decreased in the model group(P<0.01). Compared with the model group, the levels of serum FBG, GHB, GSP, FRA and AR showed a significant decline in CONR high-and medium-dose groups(P<0.01). FBG and GHB showed a significant decline in CONR low-dose group(P<0.01). Compared with the model group, the expression of serum AGEs and myocardium RAGE, p-JNK and caspase-3 protein as well as AI were significantly decreased and bcl-2 protein was significantly up-regulated in all treatment groups(P<0.01);high-dose CONR had the most significant effect on abovementioned indices compared with other treatment groups(P<0.01). Middle-dose CONR had better effect on serum AGEs compared with the low-dose group(P<0.01);middle-dose CONR and simvastatin groups had better effect on the expression of caspase-3, bcl-2 protein, myocardium apoptosis compared with the CONR low-dose group(P<0.01). Conclusion: CONR may effectively inhibit myocardial apoptosis on DA rabbits by intervening AGEs-RAGE and JNK, caspase-3, and bcl-2 protein expressions.

不同品种和产地黄连的总生物碱含量测定

目的 :评价不同产地和品种的黄连药材的内在质量。方法 :以总生物碱含量作为评价黄连内在质量的主要指标 ,以紫外分光光度法测定不同品种和产地的黄连的总生物碱含量。结果 :7个样品黄连总生物碱的含量为 5 .80 %～ 9.31% ,其中云连含量最高 ,味连 (南岸连 )含量最低。结论 :品种不同其含量不同 ,而同品种不同产地其含量也是不同的。

大孔吸附树脂分离纯化黄连总生物碱的工艺研究

目的研究大孔吸附树脂纯化黄连总生物碱的工艺。方法采用LD605、D101、DA201、NKA-9、AB-8大孔吸附树脂对黄连总生物碱进行吸附纯化。以总生物碱的收率、质量分数为考察指标综合评价。结果AB-8大孔吸附树脂具有最佳的吸附洗脱参数,其动态饱和吸附-洗脱量达1.23mg/g,2倍体积蒸馏水、2倍体积40%乙醇依次洗脱,总生物碱收率为85%,质量分数为80%。结论AB-8大孔吸附树脂对总生物碱综合性能较好,适合于黄连总生物碱的分离纯化。

紫、绿三七的总花色苷和总皂苷含量及皂苷单体组成

目的:研究紫、绿三七总花色苷和总皂苷含量及其皂苷单体组成,以比较紫、绿三七的药用品质和商业价值。方法:以三年生紫、绿三七为材料,总花色苷和总皂苷含量用分光光度法检测,皂苷单体组成用高效液相色谱检测,含量差异的显著性以方差分析判别。结果:紫三七的总花色苷和总皂苷含量分别比绿三七的高204.85%和33.86%;紫、绿三七均主要含5种皂苷单体,且含量趋势均为人参皂苷Rg1>人参皂苷Rb1>三七皂苷R1>人参皂苷Rd>人参皂苷Re;紫三七的三七皂苷R1、人参皂苷Rd和人参皂苷Re含量分别比绿三七的高约16.03%、10.83%和5.39%,但绿三七的人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量却分别比紫三七的高约0.93%和3.33%;相对于绿三七,紫三七中总花色苷含量较高且差别达到显著水平,但总皂苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rd和人参皂苷Re含量较高以及人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量较低但差别均未达到显著水平。结论:三七总花色苷的积累意味着总皂苷和三七皂苷R1、人参皂苷Rd、人参皂苷Re含量的增加以及人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1含量的略微下降,但皂苷单体的种类及其相对含量不变;紫三七的药用品质和商业价值优于绿三七。

黄连生物碱提取及纯化工艺研究

目的研究黄连生物碱的最佳提取和纯化工艺。方法以黄连总生物碱得率为指标，采用单因素试验与正交试验优选黄连总生物碱提取工艺，并采用单因素试验优选黄连总生物碱纯化工艺。结果黄连总生物碱的最佳提取工艺为：黄连饮片加8倍量1．5％的硫酸溶液，煎煮3次，每次40min；最佳纯化工艺为：黄连提取液用Ca（OH）2调节pH5。6，抽滤，滤液加热浓缩至浓度为每mL含0．24g生药，抽滤，滤液加盐酸调节pHi．5～2，加5％氯化钠溶液使溶解，冰箱中静置过夜，抽滤，滤渣真空干燥（50℃），收集纯化物。结论所建立的黄连总生物碱提取纯化工艺简单、稳定、可行。

黄连总生物碱对糖尿病大鼠降血糖作用研究

目的:探讨黄连总生物碱对糖尿病大鼠的降血糖作用。方法:采用链脲佐菌素50 mg/kg诱导SD大鼠形成糖尿病模型,筛选糖尿病大鼠空腹血糖的禁食时间,考察黄连总生物碱给药68d对糖尿病大鼠血糖、糖化血清蛋白、肌酐、尿素氮的影响,并测定其肝、胃、肾脏器指数,评价黄连总生物碱对糖尿病大鼠的降血糖作用。结果:(1)选择白天禁食6 h为糖尿病大鼠的禁食时间。(2)与模型组比较,黄连总生物碱高剂量组(含黄连总生物碱578.7 mg/kg)可明显降低糖尿病大鼠空腹6 h血糖及糖化血清蛋白(P<0.05);黄连总生物碱低剂量组(含黄连总生物碱192.9 mg/kg)可显著降低谷胱甘肽-过氧化物酶(P<0.01)。黄连总生物碱对糖尿病大鼠肌酐、超氧化物歧化酶、总胆固醇、甘油三酯及脏器指数总体上影响不明显(P>0.05)。结论:黄连总生物碱对糖尿病大鼠有降血糖的作用。

黄连总生物碱纯化工艺研究

目的优选黄连最佳纯化工艺。方法对影响总生物碱纯化效果的因素进行了系统考察。结果黄连总生物碱的最佳纯化工艺为10倍量0.5%稀硫酸,用石灰乳调pH 9,静置2h,滤过,滤液用盐酸调pH1,加氯化钠使含盐量达10%,静置24h,滤过,沉淀水洗至pH 5。结论优选的黄连总生物碱纯化工艺稳定可行。

小檗碱、巴马亭及黄连总生物碱对胆碱能神经的作用

目的:比较小檗碱、巴马亭及黄连总生物碱对胆碱能神经的作用。方法:观察各药物对离体豚鼠结肠平滑肌自发性收缩活动以及氯化乙酰胆碱和氯化钙引起离体豚鼠结肠平滑肌收缩增强的影响;同时还观察了各药物对小鼠的急性毒性作用和对小鼠血清胆碱酯酶活性的影响。结果:小檗碱、黄连总生物碱以及盐酸巴马亭在低浓度时对胃肠运动均具有兴奋作用,而高浓度时抑制之,他们在高剂量时均能拮抗氯化乙酰胆碱所致平滑肌痉挛,这种作用可为2倍量的氯化乙酰胆碱所部分拮抗。体内试验小檗碱对小鼠的急性毒性较黄连总生物碱为小,可显著降低小鼠血清胆碱酯酶的活性,新斯的明有增强其毒性的趋势,而阿托品不增加其急性毒性。黄连总生物碱对小鼠血清胆碱酯酶的活性无明显影响;阿托品和新斯的明均可显著增强其急性毒性。结论:小檗碱既有直接拮抗胆碱受体的作用,同时也可能通过抑制胆碱酯酶活性发挥其拟胆碱样作用;在黄连总生物碱中,由于含有相当一部分可对抗小檗碱抑制胆碱酯酶活性作用的生物碱,使得胆碱受体拮抗剂阿托品和胆碱酯酶抑制剂新斯的明均可显著增强其急性毒性,其相互作用机理还有待进一步研究。

三七总皂苷口含片的含量测定

目的：建立三七总皂苷口含片含量的高效液相测定方法。方法：采用高效液相法进行梯度洗脱，色谱柱为Hypersil NH2（4．6mm×200mm，5μm），流动相为乙腈-1％磷酸二氢钾溶液，流速为1．0mL／min，检测波长203nm，柱温为35℃。结果：三七总皂苷中4种皂苷的线性都良好（r=0．9999），线性范围人参皂苷8910．09375-6μg，人参皂苷Re0．01172—0．75μg，三七皂苷R10．02344—1．5μg，人参皂苷Rb10．1406—9μg。结论：本文建立的方法简便，重现性好，能同时测定三七总皂苷中的4种主要成分，可用于三七总皂苷口含片的质量控制。

不同产地和生长年限黄连的总生物碱含量测定

目的 评价不同产地和生长年限黄连的内在质量。方法 用紫外分光光度法测定不同产地和生长年限黄连的总生物碱含量。结果 14个样品黄连总生物碱含量为 12 .0 %～ 17.4 %。结论 产地不同其含量不同 ,随生长年限增长 。

补阳还五汤及其有效组分和三七总皂苷含药血浆抗血小板衍生生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的作用

目的:研究补阳还五汤及其有效组分和三七总皂苷(total Panax notoginseng saponins,TSPN)含药血浆对血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth musclecell,VSMC)增殖的影响。方法:采用血浆药理学方法及 PDGF—BB 诱导 VSMC 增殖模型。以甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tet-razolium,MTT)法检测空白血浆对 VSMC 生长的影响和含药血浆对 PDGF—BB 诱导的 VSMC 增殖的半数抑制浓度,确定补阳还五汤及其有效组分和三七总皂苷用药浓度。MTT 法和流式细胞术检测补阳还五汤及有效组分和 TSPN、阿托伐他汀对 VSMC 增殖活性及细胞周期的影响。结果:PDGF—BB 刺激后,VSMC 增殖活性显著增强,G_0/G_1期细胞数减少,G_2/M 期和 S 期细胞数增多。与PDGF-BB 刺激组比较,补阳还五汤、有效组分生物碱和苷、TSPN、阿托伐他汀等含药血浆均可抑制 PDGF—BB 诱导的 VSMC 增殖,增加 G_0/G_1期细胞数,减少 G_2/M 期和 S 期细胞数。结论:补阳还五汤及其有效组分和 TSPN 均可抑制 PDGF—BB 诱导的 VSMC增殖。生物碱和苷可能为补阳还五汤中抗 VSMC 增殖的主要药效物质,补阳还五汤及其有效组分生物碱和苷具有与阿托伐他汀、TSPN相似的抗 VSMC 增殖的作用。

大孔树脂分离纯化黄连总生物碱型号的筛选

【目的】从众多的树脂型号中筛选出分离纯化黄连总生物碱效果较好的一种。【方法】选用AB-8、HP20、LD605、ADS-3、ADS-5、D151、DA-201、XAD7、NKA-9 9种树脂,以黄连总生物碱的吸附率和解吸率为指标进行初筛,并以盐酸小檗碱的解吸率为指标进行进一步的筛选。【结果】9种树脂中,ADS-3树脂的吸附和解吸能力均较强,总生物碱的吸附率达到97.26%,解吸率达到84.82%。盐酸小檗碱的解吸量达到9.311 mg。【结论】ADS-3树脂对总生物碱及盐酸小檗碱的吸附和解吸性能都较好,可用于黄连总生物碱的分离纯化。

三七中总皂苷闪式提取工艺

目的比较闪式提取法和回流提取法对三七总皂苷提取率。方法以三七提取物的出膏率和三七总皂苷含有量的综合评分为考察指标,采用正交试验法对提取的结果进行比较。结果闪式提取的最佳工艺为12倍量70%乙醇,提取1 min。结论闪式提取法所得三七总皂苷的量高于回流提取法,而且操作简便、高效、提取率高。

提取黄连须中药根碱及其他总生物碱的工艺探索

本实验用0．3％盐酸溶液浸提黄连须得到药根碱和其他总生物碱，其含量较高，分别为0．3％和0．86％。优选金属盐KBr和ZnCl2进行实验，得到较好沉淀效果，药根碱和其他总生物碱几乎完全沉淀，为进一步提纯黄连须生物碱做好准备。

参连汤及其有效组分配伍对α-葡萄糖苷酶的影响

目的:参连汤及其有效组分配伍对α-葡萄糖苷酶抑制作用的比较。方法:制备参连汤的不同溶剂提取样品及不同比例有效组分配伍样品,应用以蔗糖为底物的α-葡萄糖苷酶-抑制剂-96微孔板筛选模型,考察它们对α-葡萄糖苷酶的影响。结果:各组样品均具有一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其中有效组分黄连总生物碱、人参总皂苷8:2配伍时作用最佳(IC50=1.2209mg·mL-1)。结论:有效组分配伍时具有协同作用,并明显优于参连汤传统应用,为合理开发古方参连汤提供科学依据。

离子交换树脂纯化黄连生物碱的工艺研究

目的优选离子交换树脂纯化黄连生物碱的工艺条件。方法以表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱含量为指标,考察D113型、D001型、D151型、110型、732型阳离子交换树脂纯化黄连生物碱的效果及优选最佳树脂纯化工艺条件。结果 D151型离子交换树脂比其他树脂具有较优的吸附及洗脱参数;最佳纯化条件为:样品溶液浓度(以生药计)为0.1 g·mL-1、pH=9,流速为3 Bv/h,洗脱剂为40%乙醇酸性溶液(含10%醋酸),用量7 Bv,洗脱温度35℃。结论黄连提取液过D151型离子交换树脂柱前后各成分转移率均在95%以上,纯化效果好,适用于黄连生物碱的精制纯化。

黄连中生物碱有效部位纯化工艺研究

目的:用大孔吸附树脂对黄连总生物碱有效部位进行纯化工艺研究。方法:以总生物碱吸附量、含量和解吸率为考察指标,采用高效液相色谱法检测黄连中总生物碱的含量。结果:HPD722型大孔吸附树脂对黄连总生物碱有良好吸附分离性能,适宜的工艺条件为:黄连药材上样液质量浓度为100 mg·ml^(-1)(相当于原生药),上样体积为3BV湿树脂体积,洗脱方法为先以5BV湿树脂体积蒸馏水除去杂质,再以7BV湿树脂体积50%乙醇洗脱,收集50%乙醇洗脱部分。结论:该法简单可行,适合工业生产。

处理黄连最佳乙醇浓度研究

目的:研究处理黄连最佳乙醇浓度。方法:用不同浓度乙醇处理黄连后,用紫外分光光度法分别测定相应样品总碱含量,用固体琼脂稀释法研究相应样品抗菌作用。结果:70％乙醇处理黄连后,总碱含量最高,抗菌作用最强。结论:70％乙醇为处理黄连最佳乙醇浓度。

萸黄连提取物中吴茱萸的鉴别与黄连总生物碱含量测定

目的：鉴别萸黄连总生物碱提取物中吴茱萸的成分，并对黄连总生物碱进行含量测定。方法：采用硅胶薄层层析法，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-三乙胺（19：5：1：1）为展开剂，以10％硫酸乙醇溶液为显色剂，在365nm紫外灯下观察，鉴别提取物中吴茱萸成分；用紫外分光光度法，在波长349nm处测定提取物中黄连总生物碱的含量。结果：萸黄连供试液色谱在与吴茱萸对照溶液色谱相应的位置显相同颜色的荧光斑点，阴性对照溶液色谱无此斑点；用紫外分光光度法测定黄连总生物碱，盐酸小檗碱的线性范围为1．04—11．44μg/ml，r^2=0．99999，平均回收率为99．2％，RSD为1．0％。结论：采用硅胶薄层层析法可简便而准确地鉴别出萸黄连总生物碱提取物中吴茱萸的成分；采用紫外分光光度法测定黄连总生物碱方法简便，结果准确，在实际生产中可作为萸黄连提取物中黄连总生物碱盐含量监测的有效手段。