NoV GⅡ.2亚型RT-RPA-CRISPR/Cas12a检测方法的建立

近年来,一种新的诺如病毒GⅡ.2亚型(norovirus GⅡ.2,NoV GⅡ.2)通过牡蛎等生食海鲜感染人群,引发急性胃肠炎,并在全球广泛传播。为实现NoV感染的现场诊断和快速疫情响应,亟需建立快速便捷的NoV GⅡ.2亚型核酸检测方法。本研究通过设计引物、crRNA,经优化反应条件后,建立了NoV GⅡ.2亚型RTRPA-CRISPR/Cas12a检测方法。结果显示:利用引物NoV-GⅡ.2-F1B和NoV-GⅡ.2-R1对NoV GⅡ.2标准RNA进行RT-RPA扩增,结合crRNA1介导的CRISPR/Cas12a报告体系,能在40 min内完成NoV GⅡ.2核酸检测;该方法检测灵敏度为10 copies/μL,且与轮状病毒、腺病毒、星形病毒、人副肠孤病毒、博卡病毒和札如病毒无交叉反应;应用该方法和qRT-PCR法,分别对30份临床模拟样本进行检测,发现总符合率达96.67%。结果表明,本研究建立的NoV GⅡ.2亚型RT-RPA-CRISPR/Cas12a检测方法无需依赖昂贵设备,具有灵敏度高、特异性强、操作便捷快速等特点,为NoV GⅡ.2感染的现场检测和防控提供了新方法。

Cyr61、CTGF、NOV、WISP-1基因在肾癌中的表达

目的探讨肾癌组织CCN蛋白中Cyr61、CTGF、NOV和WISP-1基因的蛋白表达水平及意义。方法采用Western blot半定量方法检测31例肾癌组织和18例癌旁正常肾组织中Cyr61、CTGF、NOV、WISP-1基因的蛋白表达。结果Cyr61、CTGF、NOV、WISP-1蛋白在肾癌组织中的表达水平均低于癌旁正常组织(P<0.05),其中乳头状肾癌的NOV和WISP-1表达水平高于透明细胞癌(P<0.05),G1级肿瘤NOV表达水平高于G2,3肿瘤(P<0.05)。结论Cyr61、CTGF、NOV和WISP-1在肾癌中低表达,CCN基因在肾癌的发生和发展中可能起抑制作用。

大鼠学习记忆能力与nov基因表达的关系

采用主动回避法进行大鼠学习记忆训练 ,选出学习成绩好和差的大鼠 ,用原位杂交、免疫细胞化学结合图像分析方法观察nov基因表达的差异。结果显示 ,novmRNA和NOV蛋白阳性神经元主要分布于海马、扣带皮质和联合皮质锥体层、基底神经节和下丘脑等脑区。好成绩组NOV蛋白免疫反应最强 ,阳性细胞最多 ,差成绩组nov基因的表达比假性条件反射组的表达稍强。novmRNA的表达在各组之间无明显的差异。以上结果提示 ,nov基因可能参与学习记忆的调控过程 ,这种调控发生在NOV蛋白翻译水平。

NOV蛋白免疫反应阳性神经元在鲢、鸡和几种哺乳动物脑的比较发育

目的：研究鲢、鸡、牛、犬和大鼠脑肾母细胞瘤过度表达基因（ｎｏｖ）蛋白免疫反应阳性神经元的比较发育。方法：免疫组织化学技术。结果：低等脊椎动物鲢脑仅有少量ＮＯＶ蛋白免疫反应阳性神经元，分布于延髓的一些核团、丘脑前核、丘脑后核、下丘脑背侧核、下丘脑外侧核。鸡脑ＮＯＶ蛋白免疫反应阳性神经元除广泛分布于脑干外，小脑、间脑和大脑纹状体的多数脑区阳性神经元亦较多。哺乳动物牛、犬和大鼠脑ＮＯＶ蛋白免疫反应阳性神经元广泛分布，脑干、小脑、间脑和大脑都检测到强烈阳性信号。结论：ｎｏｖ基因在从低等脊椎动物到高等脊椎动物的进化过程中非常保守，提示它在脑神经元生长。

Actinoplanes sichuanensis sp.nov I03A-00723发酵产物的分离纯化、结构鉴定与生物活性研究

目的分离、鉴别游动放线菌(Actinoplanes sichuanensis sp.nov)I03A-00723菌株产生的活性组分。方法对I03A-00723菌株进行发酵,采用硅胶柱层析和HPLC等方法进行分离纯化,对获得的组分进行理化性质、UV、MS、1H-NMR、13C-NMR等数据分析及活性测定。结果通过分离纯化,从I03A-00723发酵产物中分离到8个单一组分,其中,组分95-2,135已分别被鉴定为大豆苷元和染料木素,其它几个具有抗VRE和PDF酶活性的小组分的结构有待鉴定。结论在Actinoplanes sichuanensis sp.nov I03A-00723的发酵产物中发现抗VRE和抑制PDF酶的活性物质;首次从游动放线菌中分离得到大豆苷元和染料木素。

NOV对大鼠神经干细胞增殖和分化的影响

目的 探讨NOV基因和蛋白对大鼠神经干细胞 (NSCs)增殖和分化的影响。方法 NOV基因重组质粒转染COS 7细胞和NSCs ,收集COS 7细胞和NOV基因修饰COS 7细胞的条件培养液 (简称COS CM和NOV CM ) ,作用于培养的NSCs ,3H TdR掺入检测NSCs的增殖 ,免疫细胞化学和流式细胞仪检测NSCs的分化。结果 ①NOV CM能明显促进NSCs对3H TdR的摄入 ,说明NOV CM能明显促进细胞的增殖 ,另外NOV CM的促细胞增殖作用具有一定的量效关系 ;②免疫细胞化学和流式细胞仪结果显示 ,NOV CM促进NSCs向神经元方向分化 ;③NOV基因修饰NSCs分化时 ,神经元的比例增高。

中国林蛙属(无尾目:蛙科)一新种——寒露林蛙Rana hanluica sp . nov .

本文报道两栖纲蛙科一新种,新种具林蛙属(Rana)特征,与昭觉林蛙种组(费梁,1999)相近,但与该组成员又有明显区别,被命名为寒露林蛙Rana hanluica sp.nov.。新种有系列特征与峨眉林蛙(R.omeimonts)、昭觉林蛙(R.chaochiaoensis)相似,但又明显不同于后者,如:1)无雄性线;2)蝌蚪唇齿式为Ⅰ:3+3/1+1:Ⅲ;3)股部背侧黑褐色横斑窄,通常整齐、数目较多;4)繁殖季节在农历寒露节前后。这些特征可以与峨眉林蛙、昭觉林蛙准确区别。新种标本采自湖南省双牌县阳明山,模式标本保存在湖南师范大学动物标本馆及中国科学院成都生物研究所。

NOV基因修饰神经干细胞移植对损伤大鼠脊髓功能恢复的影响

目的 观察NOV基因修饰神经干细胞 (NSCs)移植对损伤大鼠脊髓功能的治疗作用。方法 40只Wistar大鼠随机分为对照组 (A组 )、损伤组 (B组 )、NSCs组 (C组 )和NOV NSCs组 (D组 ) ,每组 10只 ;将NSCs悬液注入C组切断脊髓处 ,D组注入等量的NOV基因修饰NSCs悬液 ,B组注射等量的生理盐水。术后 2个月 ,采用BBB评分和皮层体感诱发电位 (CSEP)观察大鼠脊髓功能的恢复程度。结果 ①术后 2月BBB评分B、C、D组大鼠有所恢复 ,但都未达到正常水平 ;C组和D组的大鼠恢复较好 ,评分较高 ,与B组有显著性差异 ;其中D组比C组恢复要好。②脊髓损伤后 ,各组的CSEP波均消失 ,术后 2月除B组外C组和D组的波形均有不同程度的恢复 ,但潜伏期延长 ,其中C组比D组更长 ,两者之间有显著性差异。

昆明地区早寒武世三叶形虫新属——PanlongiaLiu et Luo gen.nov.

简述早寒武世关山动物群的研究现状及重要意义。重点描述该动物群中一三叶形虫新属PanlongiaLiuetLuogen.nov.及其两个新种:即个体小、拥有等大的头甲和尾甲、边缘没有明显突出刺状物的PanlongiatetranodusaLiuetLuogen.etsp.nov.及头甲后侧和尾缘具刺的PanlongiaspinosaLiuetLuogen.etsp.nov.。三叶形虫在关山动物群中的首次发现为寒武纪生命大爆发以及古地理、古板块恢复的研究提供了有益的证据。

Cyr61、CTGF和Nov基因在孤立性大肝癌中的表达及其意义

目的探讨CCN家族成员的Cyr61、CTGF和Nov基因在孤立性大肝癌、结节性肝癌、小肝癌中的表达差异及其临床意义。方法比较孤立性大肝癌、结节性肝癌、小肝癌的临床病理特征,采用半定量的RT-PCR方法分析各组肝癌组织中Cyr61、CTGF和Nov基因的表达,并分析其表达临床病理特征的关系。结果83.3%(10/12)的结节性肝癌有静脉浸润,明显高于孤立性大肝癌和小肝癌(P<0.05),结节性肝癌的分化程序和肝硬化程度也明显较孤立性大肝癌和小肝癌差(P<0.05),孤立性大肝癌和小肝癌间的病理指标比较无显著性差异(P>0.05)。孤立性大肝癌中Cyr61和CTGF基因表达量均较结节性肝癌低,差异有显著性意义(P<0.01)。结论孤立性大肝癌的临床病理特征较好,且Cyr61、CTGF基因在孤立性大肝癌中的表达明显低于结节性肝癌,提示孤立性大肝癌有相对较好的肿瘤生物学行为。

南海珊瑚内生细菌Pelomonas puraquae sp.nov(B-2)中环二肽类次生代谢产物研究

为了研究珊瑚内生细菌Pelomonas puraquae sp.nov(B-2)次生代谢产物,采用现代分离纯化方法对其发酵液和菌丝体的次生代谢产物进行分离、纯化,得到8个单体化合物。通过现代波谱分析(1D NMR和MS等)和物理常数对照等方法对其进行结构鉴定,均为环二肽类物质,依次为:环(羟脯-苯丙)二肽(1)、环(脯-酪)二肽(2)、环(苯丙-甘)二肽(3)、环(苯丙-丙)二肽(4)、环(丙-酪)二肽(5)、环(亮-甘)二肽(6)、环(甘-缬)二肽(7)、环(丙-缬)二肽(8)。所有化合物均首次从该细菌中分离得到。

nov基因的表达与脑的种系发育分化平行相关

用地高辛标记的cRNA探针原位杂交组织化学方法研究了鲢、鸡、牛、犬和猫脑肾母细胞瘤过度表达基因阳性神经元的比较发育。结果显示 ,低等脊椎动物鲢脑仅有少量novmRNA阳性神经元 ,分布于延髓的迷走神经背核、三叉神经背核、丘脑前核、丘脑后核、下丘脑背侧核、下丘脑外侧核。鸡脑阳性神经元除广泛分布于脑干外 ,小脑、丘脑的多数核团、下丘脑的背侧核、腹侧核和后核以及大脑纹状体等多数脑区也有一定分布。哺乳动物牛、犬和猫脑中novmRNA阳性神经元广泛分布 ,在脑干、小脑、间脑和大脑都检测到强烈阳性信号。以上结果表明 ,在从低等脊椎动物到高等脊椎动物的进化过程中nov基因的表达也从低级中枢向高级中枢扩展 ,提示该基因的表达与脑的种系发育、脑功能的分化平行相关。

日本对虾(Penaeus japonicus)虾苗杀虾微杆菌(Microbacterium shrimpcida sp.nov.)感染及病原菌检验

用平板划线分离方法,从呈群体死亡的日本对虾溞状幼体中分离到同种细菌,经对从分离做纯培养的6株菌(HL010406-1至HL010406-6)进行形态特征、理化特性、代表菌株(HL010406-1)的16S rRNA基因序列测定及系统发育学等方面的鉴定,初步表明其为微杆菌属(Microbacterium Orla-Jensen 1919)细菌的一个新种;选择代表菌株(HL010406-1)送中国典型培养物保藏中心(CCTCC)进行了复核鉴定,将其暂定名为杀虾微杆菌(Microbacterium shrimpcida sp.nov.)。根据用HL010406-1为代表菌株对健康虾及牙鲆做感染试验,初步认为该菌可能是造成所检虾苗死亡的病原菌。经用37种抗菌类药物对3株菌所做的药敏试验,结果发现对供试的青霉素G等30种药物呈敏感或高度敏感、对诺氟沙星低度敏感、对苯唑青霉素等6种具有耐药性。

反义nov基因对培养神经元神经递质分泌的影响

目的 研究 nov基因在神经元功能分化和神经递质分泌中的作用。 方法 利用反义核酸技术构建成反义 nov基因真核表达载体 p BK- nov。采用脂质体转染技术 ,将反义表达载体导入培养的大鼠大脑皮质神经元和纹状体神经元 ,经 G418筛选出被转染的神经元继续培养。RT- PCR检测转染后 nov m RNA的表达量。采用高效氨基酸分析仪和高效液相色谱仪 ,检测抑制 nov基因表达后氨基酸类递质和多巴胺类递质的变化。 结果 谷氨酸和肾上腺素的分泌量明显下降 ,γ-氨基丁酸上升 ,而对多巴胺的分泌没有显著的影响。 结论 以上结果提示 ,nov基因在中枢神经系统神经递质的生成释放和代谢中起作用 ,可能籍此调节神经系统的功能。

NOV及BNIP3基因在小鼠粒单核细胞白血病中的表达及其意义

本研究探讨NOV及BNIP3基因在小鼠粒单核细胞白血病中的表达及意义。给小鼠经尾静脉接种小鼠粒单核细胞白血病细胞株WEHI-3,随机将小鼠分成化疗组和对照组,然后在接种后不同时间点取2组小鼠骨髓组织,采用qRT-PCR方法动态检测NOV、BNIP3 mRNA的表达情况,分析其表达与白血病发生及发展的关系。结果表明:对照组小鼠NOV、BNIP3 mRNA表达水平在接种后2周开始逐渐增高,死亡时达到高峰,分别由接种前的1.85E-05与3.44E-03,升高至濒死时的3.57E-02与3.48E-02(p<0.05)。化疗组小鼠2种基因的表达率则在化疗后迅速降至2.51E-05与1.58E-03(p<0.05),与接种前水平相近(p>0.05),复发时再次升高,死亡时2基因表达率与对照组无明显差异(p>0.05)。结论:NOV及BNIP3基因在白血病小鼠中表达明显增高,其表达异常可能参与了小鼠白血病的发生与发展;2种基因表达率与疗效密切相关,因此NOV和BNIP3表达水平在疗效评估及MRD检测中具有重要价值。

中国肥螈属(两栖纲:蝾螈科)一新种——弓斑肥螈Pachytriton archospotus sp. nov.

本文记述两栖纲蝾螈目蝾螈科一新种,新种具肥螈属(Pachytriton)系列特征,与肥螈属已知2种比较有明显区别。如1)本新种与黑斑肥螈(Pachytriton brevipes)相似,体表具黑色小圆斑,但新种具额鳞弓、上鳃骨直而与后者不同;无斑肥螈(Pachytrition labiatus)(地模标本)虽具额鳞弓,但上鳃骨明显弯曲,体表无黑色小圆斑;2)新种吻短,吻长小于眼间距,黑斑肥螈吻长大于眼间距,无斑肥螈吻长大于或等于眼间距,它们的头型明显不同,虽然三者头长均大于头宽,但头长、吻长、眼间距差异显著;3)繁殖期新种雄体肛区不明显肿胀,肛裂周边中、后部生殖乳突长,而且多,十分醒目;黑斑肥螈和无斑肥螈繁殖期肛区明显肿胀膨大,生殖乳突较短、且稀。经统计分析三种肥螈的头体长、头长、头宽、吻长和眼间距存在显著差异。

NOV对人神经干细胞增殖和分化的影响

目的 探讨NOV蛋白对人神经干细胞 (HNSCs)增殖和分化的影响。 方法 NOV基因重组质粒转染COS 7细胞 ,收集COS 7细胞和NOV基因修饰COS 7细胞的条件培养液 (COS CM和NOV CM ) ,作用于培养的HNSCs,3H TdR掺入液闪检测HNSCs的增殖 ,免疫细胞化学和流式细胞仪检测HNSCs的分化。 结果 (1)NOV CM能明显促进HNSCs对3H TdR的摄入 ,说明NOV CM能明显促进HNSCs的增殖 ,另外NOV CM的促细胞增殖作用具有一定的量效关系 ;(2 )免疫细胞化学和流式细胞仪结果显示 ,NOV CM促进HNSCs向神经元方向分化。结论 NOV蛋白可能具有促进HNSCs增殖和分化的作用。

我国内蒙古大兴安岭北麓泡状肝包虫种类的研究 III.苏俄棘球绦虫(Echinococcus russicensis sp.nov.)

在我国内蒙古大兴安岭北麓草场流行有与在前苏联广泛分布的泡状棘球蚴其成虫具球形子宫相似的病原,过去称之为苏俄的多房棘球绦虫。我们在比较研究了它与欧洲的多房棘球绦虫的全程生活史的发育规律,及成虫和幼虫期的结构之后,发现两者之间有极大差异,认为不能再用多房棘球绦虫称呼之。最近,我们用内蒙古的苏俄型泡状棘球蚴人工感染4只羊羔,全部阴性不能发育,说明内蒙古的本虫种不同于所谓幼虫期可以在牛羊发育的"哈萨克亚种"。为了纪念前苏联学者最早发现和叙述本种成虫,兹暂定名为苏俄棘球绦虫新种(Echinococcus russicensis sp.nov.)。

海绵共附生放线菌Saccharopolyspora sp.nov中抗肿瘤活性成分的研究

羽毛山海绵(My ca le p lum ose)来源的糖多孢菌(S accharop oly sp ora sp.nov SP 2-10)具有诱导肿瘤细胞坏死的活性。本文对其发酵产物的活性部位乙酸乙酯层进行活性追踪分离,共得到7个化合物;利用理化性质和波谱学方法鉴定它们的结构分别为胆甾醇、邻苯二甲酸二异丁酯、4(2,4-二羟基苯甲酰氨基)苯甲酸、苯丙胺酸、脱氧鸟苷、鸟苷和N-乙酰酪胺;并初步评价上述化合物的抗肿瘤活性,结果表明,邻苯二甲酸二异丁酯显示细胞毒活性。