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肉鸡源传染性法氏囊病新型重排毒株的分离鉴定及遗传进化分析
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作者 左文博 蒲德粉 +3 位作者 王威威 王林果 韦平 何秀苗 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期890-896,共7页
[目的]明确云南某肉鸡场疑似传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染病例的病原类型及分子特征,以了解IBDV新型重排毒株在肉鸡中的流行情况、分子进化趋势,为制定有效的传染性法氏囊病(IBD)防控和疫苗选用策略提供参考依据。[方法]对疑似IBDV感... [目的]明确云南某肉鸡场疑似传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染病例的病原类型及分子特征,以了解IBDV新型重排毒株在肉鸡中的流行情况、分子进化趋势,为制定有效的传染性法氏囊病(IBD)防控和疫苗选用策略提供参考依据。[方法]对疑似IBDV感染的病鸡法氏囊进行研磨处理后,采用巢式RT-PCR进行检测,后将IBDV阳性的法氏囊组织悬液接种于9日龄SPF鸡胚并进行病毒分离,对病毒的vVP2和VP1-b基因扩增并进行遗传变异分析。[结果]成功分离出一株新型IBDV重排毒株(命名为YN-YX221110),接种9日龄SPF鸡胚后,胚体整体呈现弥漫性出血,头、颈以及背部皮肤有出血点。基于vVP2基因序列,分离株YN-YX221110与新型变异株(nvIBDV)参考株的核苷酸相似性最高,为93.2%~97.9%,分离株YN-YX221110的vVP2基因222A特征性氨基酸位点与UK661、HK46等超强毒株(vvIBDV)参考株相同,249K、256V、279N、284A、294L、299S等位点与新型变异株(nvIBDV)参考株中的SHG19相同;在基于vVP2基因的遗传进化树中,分离株YN-YX221110与GX-QZ191002、SHG19等nvIBDV参考株聚为一支,属于A2d分支。基于VP1-b基因序列,分离株YN-YX221110与参考株中的经典毒株(cIBDV)类似株核苷酸相似性最高,为97.8%~98.4%,分离株YN-YX221110的vVP2基因特征性氨基酸位点240D、242D、287T、390L和393E与致弱毒株(attIBDV)参考株中的B87、Gt相同;在基于VP1-b基因序列的系统发育进化树中,分离株YN-YX221110与参考株Gt、B87和CEF94等cIBDV类似株中的attIBDV聚为一支,属于B1a分支。分离株YN-YX221110基因型为A2dB1a。[结论]成功分离得到肉鸡源IBDV分离株YN-YX221110,其A片段来源于nvIBDV,B片段来源于cIBDV类似株中的attIBDV,为新型IBDV重排毒株。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒(IBDV) 新型变异株 分离鉴定 基因重排 分子遗传进化
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一株麻鸡传染性法氏囊病毒新型变异株的分离鉴定
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作者 王艳 孙文渊 +2 位作者 朱维 王峰升 孟德坤 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期83-88,共6页
近几年,鸡传染性法氏囊病毒新型变异株在我国广泛流行,主要发生于肉鸡,其致病力弱、隐蔽性强但能造成法氏囊严重萎缩。本研究从山东济宁地区临床出现法氏囊萎缩的发病麻鸡中采集法氏囊病料,接种SPF鸡胚进行病毒分离,通过RT-PCR方法进行... 近几年,鸡传染性法氏囊病毒新型变异株在我国广泛流行,主要发生于肉鸡,其致病力弱、隐蔽性强但能造成法氏囊严重萎缩。本研究从山东济宁地区临床出现法氏囊萎缩的发病麻鸡中采集法氏囊病料,接种SPF鸡胚进行病毒分离,通过RT-PCR方法进行病毒鉴定,将分离毒株回归SPF鸡进行致病性试验,同时对其主要抗原基因VP2进行进化分析。结果发现,该毒株能致死鸡胚;对其VP2基因进行测序比对和进化树分析发现,其与近几年的新型变异株基因序列的进化关系较近,同源性为96.1%~99.2%;人工感染SPF鸡第7 d法氏囊即出现较为明显的萎缩,第14 d萎缩更为明显,囊体比显著小于对照组(P<0.01)。本研究分离到的麻鸡源传染性法氏囊病毒JN22株属于新型变异株,能导致SPF鸡法氏囊显著萎缩。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病毒 新型变异株 麻鸡 法氏囊萎缩
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传染性法氏囊病病毒新型变异株VP2蛋白原核表达及免疫效果评价 被引量:2
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作者 马景霞 王常伟 +4 位作者 吴洪才 何吉鑫 牛晓赛 段志强 朱杰 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1876-1883,共8页
【目的】构建传染性法氏囊病病毒新型变异株(vaIBDV)VP2蛋白原核表达质粒,并明确VP2蛋白的免疫原性,为vaIBDV亚单位疫苗的开发提供技术支持。【方法】从IBDV新型变异株(BZ)中扩增VP2基因片段,亚克隆至pET-28a(+)载体上构建重组原核表达... 【目的】构建传染性法氏囊病病毒新型变异株(vaIBDV)VP2蛋白原核表达质粒,并明确VP2蛋白的免疫原性,为vaIBDV亚单位疫苗的开发提供技术支持。【方法】从IBDV新型变异株(BZ)中扩增VP2基因片段,亚克隆至pET-28a(+)载体上构建重组原核表达质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG诱导表达后通过SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定,并以vaIBDV阳性血清进行琼扩效价测定;经Ni-NTA亲和层析纯化及适当浓缩后,制备乳化疫苗并免疫21日龄SPF鸡,通过安全性检验、抗体效价测定及攻毒保护评价进一步验证融合蛋白VP2的免疫原性。【结果】在25℃下以IPTG进行诱导表达,获得的融合蛋白VP2主要呈可溶性表达,大小约40 kD,且表达上清液中的融合蛋白VP2能与vaIBDV阳性血清发生特异性反应,其琼扩效价可达1∶32;经Ni-NTA亲和层析纯化及适当浓缩后,融合蛋白VP2的琼扩效价高达1∶256。以融合蛋白VP2为抗原制备的亚单位疫苗稳定性好,安全性高,无免疫引起的不良反应,剖检也未发现接种部位有明显损伤、局部炎症或疫苗吸收不良等现象。免疫21 d后鸡血清琼扩效价平均值达1∶76.8,而血清抗体效价均在1∶20000以上,表明以融合蛋白VP2制备的疫苗可刺激机体产生强烈的体液免疫反应,抗体阳性率达100%;使用IBDV BZ株攻毒后7 d剖检观察鸡法氏囊病变情况,结果显示免疫组鸡只均未发病,其法氏囊也无明显萎缩现象,即免疫保护率达100%。【结论】通过原核表达系统能成功实现vaIBDV VP2蛋白的可溶性表达,且获得的融合蛋白VP2免疫原性良好,能对vaIBDV提供100%的免疫保护效果,为开发vaIBDV亚单位疫苗提供了技术支持。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒(IBDV) 新型变异株 VP2蛋白 亚单位疫苗 免疫效果
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一株鸡传染性法氏囊病毒变异株的鉴定与致病性 被引量:1
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作者 李娜 陈淑莲 +2 位作者 罗忠宝 黄宝钦 吴异健 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2023年第2期222-231,共10页
近日,在福建省南平市某鸡场发现一株新的鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)流行株,并将其命名为IBDV-FJ02.为了明晰IBDV-FJ02株遗传变异情况和临床致病特征,进行了A节段基因组序列和特征性氨基酸位点的分析、基于A节段和B节段的新型基因型分类... 近日,在福建省南平市某鸡场发现一株新的鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)流行株,并将其命名为IBDV-FJ02.为了明晰IBDV-FJ02株遗传变异情况和临床致病特征,进行了A节段基因组序列和特征性氨基酸位点的分析、基于A节段和B节段的新型基因型分类以及对无特定病原体(SPF)鸡致病性的研究,旨在为鸡传染性法氏囊病的防治提供依据.结果显示:IBDV-FJ02株A节段核苷酸序列与早期变异株E的同源性最高,达95.6%,与中国变异株SHG558在同一分支上;IBDV-FJ02株VP2-4-3蛋白氨基酸序列第222位氨基酸为T,第249位为K,第318位为D,参考变异株中仅GLS、E与其一致,位点N^(213)、T^(222)、K^(249)、 D^(318)、E^(323)均符合变异株的特征.根据新型基因型分类方案,显示IBDV-FJ02株属于A2dB1基因型,即IBDV新型变异株类群.致病性测定结果显示:IBDV-FJ02株感染3周龄SPF鸡并不会导致感染鸡只死亡,在感染后21 d内,主要引起鸡只法氏囊的严重萎缩和脾脏的轻微肿大.上述结果表明,IBDV-FJ02株是一种IBDV新型变异株,具有明显的IBDV变异株致病特点. 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 序列比对 新型基因型分类 致病性 新型变异株
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传染性法氏囊病病毒新型重排毒株GX-NN200111的分离鉴定及遗传进化分析 被引量:4
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作者 乔远征 王威威 +6 位作者 施俊 张燕 陈金南 项燕华 王致远 何秀苗 韦平 《中国家禽》 北大核心 2023年第5期39-47,共9页
为明确广西某养殖场疑似传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染鸡的病原类型及分子特征,试验通过病毒分离、基因扩增、序列测定、核苷酸同源性分析、系统进化树构建、氨基酸位点变异分析、重组及选择压力分析等方法进行病原研究。结果显示:成功... 为明确广西某养殖场疑似传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染鸡的病原类型及分子特征,试验通过病毒分离、基因扩增、序列测定、核苷酸同源性分析、系统进化树构建、氨基酸位点变异分析、重组及选择压力分析等方法进行病原研究。结果显示:成功分离一株IBDV新型重排毒株(命名为GX-NN200111),该毒株属最新发现A3B1b基因型;分离株GX-NN200111能够在鸡胚中很好地增殖,表现为鸡胚头、颈、背部皮肤出血;序列分析显示,分离株GX-NN200111 vVP2属于超强毒株分支A3,核苷酸相似性为93.7%~97.9%,具有超强毒株特征性氨基酸位点212N、222A、256I和294I;VP1-b属于中国新型变异株分支B1b,核苷酸相似性为95.8%~99.7%,具有中国新型变异株的特征性氨基酸位点240E;重组分析未见有证据证实分离株GX-NN200111存在明显的重组事件,选择压力分析发现分离株GX-NN200111在vVP2和VP1-b中分别存在3个(第205、222、249位)和2个(第331、426位)正选择位点;氨基酸置换熵值分析发现分离株GX-NN200111在vVP2和VP1-b中分别存在10个(第213、222、242、249、253、254、256、279、294、299位)和4个(第242、287、390、393位)易突变位点。研究证实,分离株GX-NN200111是首次发现的一种新的重排毒株(A3B1b),其A节段来源于超强毒株、B节段来源于中国新型变异株。 展开更多
关键词 IBDV 新型变异株 自然重排 遗传进化 重组 选择压力
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传染性法氏囊病病毒新型变异株的分离和鉴定 被引量:2
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作者 姜婷婷 焦晓丽 +7 位作者 吴村 刘东海 马坤 蔡梦雷 娄路平 李夫宏 刘彦威 崔国林 《动物医学进展》 北大核心 2023年第5期44-49,共6页
为调查我国部分地区规模化养鸡场传染性法氏囊病病毒(IBDV)新型变异株流行现状,参考IBDV VP2蛋白高变区序列设计Taqman-MGB探针和引物,建立IBDV快速检测方法,利用其检测来自河北邯郸、江西宜春、重庆7家大型育雏场送检法氏囊病料,并对... 为调查我国部分地区规模化养鸡场传染性法氏囊病病毒(IBDV)新型变异株流行现状,参考IBDV VP2蛋白高变区序列设计Taqman-MGB探针和引物,建立IBDV快速检测方法,利用其检测来自河北邯郸、江西宜春、重庆7家大型育雏场送检法氏囊病料,并对阳性病料进行病毒分离、测序和进化分析。成功建立了一种兼顾IBDV鉴定和测序分型的荧光定量PCR方法,该方法在10^(1)~10^(8)拷贝/μL范围内具有良好线性关系(相关系数为0.9963),扩增效率良好(扩增效率为109%),对其他常见病毒无扩增,最低检测限为1.25×10^(1)拷贝/μL;利用该方法检测邯郸地区4家育雏场送检样品均为阳性,测序均为IBDV新型变异株,采用鸡胚自阳性样品中分离到3株IBDV(T2021与T2022、J2021);对分离株A节段测序发现,3株IBDV分离株均属国内新型变异株,与国内新型变异株SHG19氨基酸同源性为100%,核苷酸同源性为98.0%~98.6%,T2021与T2022、J2021分属两个进化分支。建立了一种IBDV快速检测方法,发现IBDV国内新型变异株在我国部分地区仍存在。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 荧光定量PCR 鉴定 新型变异株
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PRRSV广东变异株分离及NSP2部分序列分析 被引量:6
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作者 黄元 禹思宇 +1 位作者 宣华 向华 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第3期26-31,共6页
2006年以来,高致病性猪繁殖与呼吸综合征在我国造成了巨大的经济损失。位于NSP2基因上的30个氨基酸的缺失已成为区分我国2006年以来的PRRSV高致病性毒株和2005年以前的经典流行毒株的特异性标记。本试验在广东省分离到一个新型的PRRSV毒... 2006年以来,高致病性猪繁殖与呼吸综合征在我国造成了巨大的经济损失。位于NSP2基因上的30个氨基酸的缺失已成为区分我国2006年以来的PRRSV高致病性毒株和2005年以前的经典流行毒株的特异性标记。本试验在广东省分离到一个新型的PRRSV毒株BL2,其NSP2基因540位-563位(相对于VR2332 ORF1a)发生24个氨基酸序列的缺失,该缺失位于高致病性株的缺失区域内,但缺失长度小于高致病性株。国内外文献未曾报道过类似的突变。以NSP2部分序列构建系统进化树表明,与该毒株同源性最高的是我国2005年分离的经典毒株SHB(91.5%),同时该毒株与我国2006年后流行的高致病性毒株也有较高的同源性(89.9%-91.3%)。动物回归试验表明,该毒株显示高致病性。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 新型变异株 NSP2 序列分析
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An improved scheme for infectious bursal disease virus genotype classification based on both genome-segments A and B 被引量:8
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作者 WANG Yu-long FAN Lin-jin +9 位作者 JIANG Nan GAO Li LI Kai GAO Yu-long LIU Chang-jun CUI Hong-yu PAN Qing ZHANG Yan-ping WANG Xiao-mei QI Xiao-le 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2021年第5期1372-1381,共10页
Infectious bursal disease(IBD)is caused by infectious bursal disease virus(IBDV),which has a genome consisting of two segments of double-stranded linear RNA.IBDVs have been traditionally divided into four phenotypes b... Infectious bursal disease(IBD)is caused by infectious bursal disease virus(IBDV),which has a genome consisting of two segments of double-stranded linear RNA.IBDVs have been traditionally divided into four phenotypes based on their pathogenicity and antigenicity,including classic,variant,very virulent,and attenuated IBDV.With the emergences of divergent molecular characteristics of novel strains produced by continuous mutations and recombination,it is increasingly difficult to define new IBDV strains using the traditional descriptive classification method.The most common classification scheme for IBDV with segmented genome is based solely on segment A,while the significance of segment B has been largely neglected.In this study,an improved scheme for IBDV genotype classification based on the molecular characteristics of both VP2(a viral capsid protein encoded by segment A)and VP1(an RNA-dependent RNA polymerase protein encoded by segment B)was proposed for the first time.In this scheme,IBDV was classified into nine genogroups of A and five genogroups of B,respectively;the genogroup A2 was further divided into four lineages.The commonly used phenotypic classifications of classic,variant,very virulent,and attenuated IBDVs correspond to the A1 B1,A2 B1,A3 B2,and A8 B1 genotypes of the proposed classification scheme.The novel variant IBDVs including the strains identified in this study were classified as belonging to genotype A2 d B1.The flexibility and versatility of this improved classification scheme will allow the unambiguous identification of existing and emerging IBDV strains,which will greatly facilitate molecular epidemiology studies of IBDV. 展开更多
关键词 infectious bursal disease virus GENOTYPE VP1 VP2 novel variant strain
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我国传染性法氏囊病病毒新型变异株分析研究 被引量:24
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作者 范林进 王雨龙 +13 位作者 吴甜甜 李凯 姜楠 高玉龙 高立 刘长军 崔红玉 潘青 张艳萍 刘玉凤 孙先本 刘俊启 王笑梅 祁小乐 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1164-1169,共6页
近期非典型传染性法氏囊病(IBD)给养禽业带来了新的威胁,本研究团队率先鉴定发现其病原为IBDV新型变异株。为了解该IBDV新型变异株流行规律和致病特点,本研究对2018年9月~2019年6月分离自黑龙江、辽宁、河北、山东、江苏、浙江、云南7... 近期非典型传染性法氏囊病(IBD)给养禽业带来了新的威胁,本研究团队率先鉴定发现其病原为IBDV新型变异株。为了解该IBDV新型变异株流行规律和致病特点,本研究对2018年9月~2019年6月分离自黑龙江、辽宁、河北、山东、江苏、浙江、云南7个省的32个IBDV代表株的VP2基因高变区进行了遗传演化分析,结果显示,IBDV新型变异株虽然属于变异株分支,但却不同于美国早期变异株,其形成了一个独立的亚群。动物回归试验结果显示,IBDV新型变异株不致死鸡,但造成其中枢免疫器官法氏囊严重萎缩,B淋巴细胞崩解坏死,复制出了非典型IBD的症状。本研究测定了IBDV新型变异株的最低致病剂量,并依据病毒自身特殊性状,首次提出用法氏囊半数萎缩量(BAD50)作为IBDV新型变异株的病毒效价单位。本研究为IBDV新型变异株的流行规律监测和综合防控提供了数据支撑。 展开更多
关键词 非典型传染性法氏囊病 传染性法氏囊病病毒 新型变异株 法氏囊半数萎缩量
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鸡传染性法氏囊病病毒新型变异株衣壳蛋白重组真核表达质粒的免疫原性分析 被引量:1
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作者 张文英 姜楠 +17 位作者 王雨龙 马广斌 牛鑫鑫 黄萌萌 王国栋 宋桂才 李凯琳 刘爱晶 王素艳 高立 崔红玉 刘长军 李凯 潘青 张艳萍 王笑梅 高玉龙 祁小乐 《中国家禽》 北大核心 2022年第6期31-35,共5页
为了研究针对传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株的特异性防控技术,试验通过RT-PCR方法扩增IBDV新型变异株代表毒株SHG19的衣壳蛋白VP2基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS上,获得重组质粒pCA-SHG19 V... 为了研究针对传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株的特异性防控技术,试验通过RT-PCR方法扩增IBDV新型变异株代表毒株SHG19的衣壳蛋白VP2基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS上,获得重组质粒pCA-SHG19 VP2,将重组质粒以100μg/只的剂量在聚乙烯亚胺(PEI)的作用下免疫4周龄BALB/c小鼠,用间接免疫荧光(IFA)和ELISA对血清抗体进行检测。结果表明:免疫鼠血清可特异性识别IBDV,ELISA抗体效价高达1∶16000以上,重组真核表达质粒pCA-SHG19 VP2的基因免疫在BALB/c小鼠模型上产生了良好的特异免疫应答。研究结果对IBD的综合防控研究具有参考意义。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 新型变异株 衣壳蛋白 基因免疫
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雪山草鸡感染传染性法氏囊病病毒新型变异株的鉴定 被引量:1
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作者 姜楠 王雨龙 +11 位作者 张文英 牛鑫鑫 刘长军 高玉龙 高立 崔红玉 李凯 潘青 张艳萍 刘爱晶 王笑梅 祁小乐 《中国动物检疫》 CAS 2021年第5期119-125,共7页
传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株正在我国广泛蔓延,给商品肉鸡群和蛋鸡群带来了新的威胁。本研究对一个疑似发生非典型传染性法氏囊病的地方品种雪山草鸡群进行了RT-PCR检测,并对分离的3株毒株进... 传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株正在我国广泛蔓延,给商品肉鸡群和蛋鸡群带来了新的威胁。本研究对一个疑似发生非典型传染性法氏囊病的地方品种雪山草鸡群进行了RT-PCR检测,并对分离的3株毒株进行了基因测序及序列分析。结果显示,引起该鸡群发病的病原是IBDV新型变异株,属于A2dB1基因型;这3个毒株的VP2高变区编码蛋白上含有IBDV变异株的特征性氨基酸,也具有IBDV新型变异株的独特氨基酸。结果提示,我国地方品种鸡群中也有IBDV新型变异株的流行,现有的部分商品化IBDV疫苗已不能有效预防IBDV新型变异株的流行。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 新型变异株 A2dB1基因型 雪山草鸡
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新型冠状病毒Delta变异株感染者166例中医证候特征及中医救治策略分析 被引量:2
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作者 罗纯 林琳 +4 位作者 傅晓霞 张俭 蔡彦 林路平 谭行华 《广东医学》 CAS 2022年第10期1200-1204,共5页
目的分析新型冠状病毒Delta变异株感染者中医证候特征及中医救治策略。方法收集166例新型冠状病毒Delta变异株感染患者的临床信息,对患者人口学特征、症状体征、中医辨证论治方案及预后等进行描述性分析。结果(1)166例病例中,男68例,女9... 目的分析新型冠状病毒Delta变异株感染者中医证候特征及中医救治策略。方法收集166例新型冠状病毒Delta变异株感染患者的临床信息,对患者人口学特征、症状体征、中医辨证论治方案及预后等进行描述性分析。结果(1)166例病例中,男68例,女98例;年龄1~92岁,平均(47.05±19.2)岁;临床分型以普通型为主,占72.3%,症状主要表现为发热(高热)、恶寒、头身痛、肌肉酸痛、咳痰、咽痛、咽干、乏力、腹胀、食欲不振、舌质红、舌苔黄腻以及脉浮、大、弦、滑、数等。(2)无症状感染者中医药参与率为71.4%,确诊患者中医药参与率为100%,核心病机是暑湿化热、疫毒侵肺、元气大虚,以“湿”“热”“毒”“虚”为主。(3)制定清暑化湿、宣肺解毒、通腑泄热、调肠治肺的治则治法,同时重视早期扶正、全程扶正。结论此次广州新型冠状病毒Delta变异株感染者以中老年女性居多,住院期间症状以呼吸道表现为主,中医药治疗全程参与,根据临床分型辨证施治,中西医并重,取得良好疗效。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 Delta变异株 中医证候特征 中医救治策略
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