家蚕miRNA Novel-31＊上调溶血素基因的表达

【目的】Novel-31*是在家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus,Bm CPV)感染的家蚕中发现的一个差异表达miRNA。本研究旨在验证Novel-31*对其靶基因表达的调控作用,以便进一步研究miRNA及其靶基因在昆虫免疫调节中的作用。【方法】用生物信息学方法预测Novel-31*的靶基因,荧光定量PCR分析Novel-31*及其靶基因在家蚕感染Bm CPV后不同时间点的表达变化;构建miRNA慢病毒表达载体和靶基因慢病毒表达载体,转染293T细胞,同时合成Novel-31*mimics转染家蚕培养细胞Bm N,使用荧光定量PCR检测Novel-31*对靶基因表达的调控作用。【结果】生物信息学方法预测发现,溶血素基因是Novel-31*的靶基因,其结合位点位于溶血素基因的5'UTR区域。荧光定量PCR分析表明,Novel-31*及溶血素基因在感染Bm CPV的家蚕血淋巴细胞中呈现明显的上调表达。荧光定量PCR检测表明,在Novel-31*慢病毒表达载体和溶血素基因5'UTR慢病毒表达载体转染的293T细胞中和在转染Novel-31*mimics的家蚕Bm N细胞中,溶血素基因都上调表达。【结论】溶血素基因是miRNA Novel-31*的靶基因,Novel-31*与溶血素基因5'UTR结合,上调溶血素基因的表达。

人类白细胞抗原新等位基因HLA—A＊31：22的序列分析及确认

目的序列分析及确认一例中国人群中的人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）新等位基因。方法应用基于Luminex平台的聚合酶链反应一序列特异性寡核苷酸探针（PCR—SSOP）基因分型法、PCR产物测序法和组特异性引物测序法，通过软件分析该样本DNA基因序列及与最相近HLA等位基因序列的差异。结果PCR-SSOP结果显示该样本HLA．A基因座的反应格局与已知HLA—A等位基因均不一致；DNA序列分析显示，在所检测的第2—4外显子中，该样本HLA．A基因座序列与所有已知HLA-A等位基因序列均不一致，与同源性最高的等位基因A＊31：01：02的差异只在外显子2区域中产生了nt245A-c-个碱基取代，并导致相应的82位密码子由GAG—GCG，编码的氨基酸由谷氨酸（Glu）变为丙氨酸（Ala）。结论该基因为HLA新等位基因，被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA—A$31：22。