水牛Novel-miR-57对Bcap-37和BMECs细胞DOK4基因的调控作用

【目的】筛选Novel-miR-57调控靶基因,并明确其对靶基因的调控作用及生物功能,为揭示水牛乳腺上皮细胞(BMECs)的分化机理提供科学依据。【方法】利用MiRscan预测Novel-miR-57二级结构;以自编软件Ensembl(v80)注释的水牛mRNA截取3'-非翻译区(3'-UTR)作为预测数据库,采用Miranda(v3.3a)对Novel-miR-57进行靶基因预测;运用实时荧光定量PCR筛选重点靶基因。以化学合成的Novel-miR-57模拟物Mimics和抑制剂Inhibitor,分别转染人类乳腺癌细胞(Bcap-37)及BMECs细胞,以验证Novel-miR-57与靶基因的表达相关性。【结果】Novel-miR-57前体序列形成7个茎环结构,成熟序列位于第1、2和3个茎环结构间,其结合自由能为-53.70 kcal/mol。以结合自由能低于-20.00 kcal/mol为标准,最终筛选出34个可能的靶基因,共与42条KEGG信号通路存在关联,其富集的信号通路主要有代谢通路(ID:bta01100)、PI3K-Akt信号通路(ID:bta04151)、MAPK信号通路(ID:bta04010)和细胞因子—细胞因子受体相互作用(ID:bta04060)等;经实时荧光定量PCR检测分析发现DLX3、CANCNG3、DOK4、NFKBID、C17orf53、RTN1和FBXO10等7个靶基因在非泌乳期的相对表达量极显著高于泌乳期(P<0.01),二者间相差100.0倍以上,且与NovelmiR-57的相对表达量呈负相关。7个靶基因中仅DOK4基因与Novel-miR-57的表达具相关性,以200 nmol/L Inhibitor转染B-cap37细胞能显著提高DOK4基因表达(P<0.05,下同),添加100 nmol/L Mimics则显著抑制DOK4基因表达。以100 nmol/L Mimics转染BMECs细胞,Novel-miR-57和DOK4基因的相对表达量显著提高;而以200 nmol/L Inhibitor转染BMECs细胞,Novel-miR-57和DOK4基因的表达均受到显著抑制。【结论】Novel-miR-57含有7个茎环结构,且其成熟序列位于第1~3个茎环上。Novel-miR-57过表达可下调Bcap-37细胞DOK4基因表达或上调BMECs细胞DOK4基因表达,即Novel-miR-57对靶基因的调控作用因乳腺细胞生理状态不同而存在差异。

外周血CD8+CD28-CD57+T淋巴细胞对老年脓毒症患者预后的预测价值

目的 探讨外周血CD8+CD28-CD57+T淋巴细胞对老年脓毒症患者预后的预测价值。方法 采用回顾性队列研究,选取2015年2月—2016年8月西安交通大学第二附属医院重症医学科住院的年龄≥60岁的脓毒症患者75例,依据ICU结局分为存活组(n=54)及死亡组(n=21)。收集患者一般资料,诊断脓毒症当天进行急性生理和慢性健康评分Ⅱ(APACHEⅡ)评分及序贯器官衰竭(SOFA)评分,检测外周血液标本TNF-a、IL-10及CD8+CD28-CD57+T淋巴细胞。结果 死亡组平均年龄大于存活组(P<0.05)。死亡组较存活组有更高的APACHEⅡ评分、SOFA评分及休克比例,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡组外周血CD8+CD28-CD57+T淋巴细胞、TNF-a、IL-10较存活组更高(P<0.05)。存活组的耐药菌感染比例低于死亡组,但差异无统计学意义(P>0.05)。无论单因素还是对一系列协变量进行调整的多因素Logistic回归分析均显示,较高的外周血CD8+CD28-CD57+T淋巴细胞比例与高的ICU死亡率相关(OR, 1.21;95%CI, 1.10~1.33)(OR, 1.30;95%CI, 1.07~1.58);APACHEⅡ评分预后预测的AUC为0.78(95%CI 0.67~0.90),将最适诊断界点22.5分作为预测死亡可能的临界点,敏感性和特异性分别为61.9%和75.2%。SOFA评分预后预测的AUC为0.80(95%CI,0.68~0.92),将最适诊断界点9.5分作为预测死亡可能的临界点,敏感性和特异性分别为71.4%和77.8%。外周血CD8+CD28-CD57+T淋巴细胞预后预测的AUC为0.91(95%CI,0.83~0.99),将最适诊断界点60.2%作为预测死亡可能的临界点,敏感性和特异性分别为81.0%和92.6%。结论 老年脓毒症患者外周血高CD8+CD28-CD57+T淋巴细胞比例与ICU死亡率增加相关,一定程度上可用于评估此类人群的病情严重程度及预测预后。

C57BL/6小鼠微小三毛滴虫的观察与种系发育分析

为鉴定从某外单位引进的C57BL/6小鼠粪样检测中发现的虫体种类,本试验对虫体进行形态学观察,并进行种系发育分析。取C57BL/6小鼠粪样涂片和瑞士染色后进行显微镜观察,提取粪样总DNA,根据三毛滴虫的16S rRNA进行PCR扩增后测序,运用MEGA11进行种系发育分析。显微镜观察发现,虫体符合微小三毛滴虫的形态学特征,测序发现微小三毛滴虫的基因序列与鼠三毛滴虫高度同源。

小麦条锈病胁迫下冬小麦品种天选57号产量方程的构建

小麦条锈病一直以来都是小麦植保工作的重中之重,进一步明确小麦条锈病在甘肃陇南地区发病程度与冬小麦产量之间的相关性,为制定天水地区小麦条锈病防控指标提供科学依据。选取当地主栽冬小麦品种天选57号为研究对象,在人工接种诱发后,通过田间喷施20%三唑酮乳油135 g/hm^(2)兑水450 kg防控1~2次,并造成一定的病情梯度,实地调查田间病情并测产,得到冬小麦品种天选57号的小麦条锈病最终病情(x)与平均折合产量(y产量)间的回归方程为:y_(产量)=-8.5714x^(2)-488.57x+7512(R^(2)=0.9872)。同时通过理论折合产量计算出冬小麦品种天选57号使用20%三唑酮乳油防控1次时,产量损失率为20.13%~29.71%,挽回产量损失4.79~14.37个百分点。防控2次时产量损失率为7.35%~12.14%,挽回产量损失为22.36~27.15个百分点。得到冬小麦品种天选57号采用20%三唑酮乳油防控1次和防控2次后的植保贡献率分别为6.82%~18.00%、25.45%~29.31%。

枸杞多糖对C57BL/6J骨质疏松症小鼠的早期防治

目的探讨枸杞多糖(LBP)对C57BL/6J骨质疏松症小鼠的早期防治作用。方法选用12周C57BL/6J雌鼠,采用双侧卵巢完全切除术制备骨质疏松症模型,假手术组切除卵巢周围脂肪组织,术后1周,选取手术成功的小鼠分为假手术组、模型组和LBP组。LBP组给予灌胃LBP 0.1 g·kg^(-1),1次/d,连续12周,假手术组和模型组灌胃等量蒸馏水。酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠血清中雌二醇(E_(2))含量;生物化学方法检测血清氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;Micro CT扫描胫骨微观结构,观察骨小梁厚度(Tb·Th)、骨表面积和骨体积之比(BS/BV)、骨小梁分离度(Tb·Sp)、骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨体积(BV)的变化。结果与假手术组小鼠比较,模型组小鼠的体质量增长率升高、子宫脏器系数明显减小、血清E_(2)含量下降、血清氧化应激指标MDA含量增高、SOD活力降低(P均<0.01);与模型组小鼠比较,LBP组小鼠子宫脏器系数、血清E_(2)含量差异均无统计学意义(P均>0.05),但体质量增长率下降、血清MDA含量降低、SOD活力增加(P均<0.01),骨组织BMD、BV升高(P均<0.05),Tb·Th及BV/TV均显著升高(P均<0.01)。胫骨三维重建图显示,模型组骨皮质变薄,呈现骨质疏松改变,骨小梁数量减少,排列紊乱,髓腔明显扩大;LBP组较模型组骨小梁数量增加。结论LBP可能通过调控早期骨质疏松症小鼠的氧化应激反应,发挥改善骨质疏松的作用。

C57BL/6N小鼠早期视网膜变性及小胶质细胞活化状态研究

目的:观察C57BL/6N(Crb1 rd8/rd8)小鼠早期视网膜变性以及小胶质细胞的活化情况。方法:取雄性SPF级C57BL/6N小鼠15只、C57BL/6J小鼠15只,正常饲养。分别在入组时,入组4、8、12 wk,使用Micron-Ⅲ小动物视网膜影像系统进行双眼彩色眼底照相检查计算病变数量、病变面积。观察结束后处死小鼠,摘取右侧眼球制备视网膜组织切片,进行HE染色后光镜下观察视网膜组织形态;采用免疫组织化学染色分析两组小鼠视网膜CX3CR1的表达水平及位置。摘取左侧眼球分离视网膜,使用Western-Blot检测CD86、CD206的表达情况,使用电化学发光法测定视网膜中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-4、IL-10炎性因子含量水平。结果:眼底彩照结果显示在入组4、8、12 wk,C57BL/6N组眼底病变数量均较入组时显著增加,与C57BL/6J组同时间点变化量比较均有差异(均P<0.05);眼底病变面积变化量两组间入组12 wk有差异(P<0.05),各组内变化量比较均无差异(均P>0.05);视网膜组织HE染色示:C57BL/6N组视网膜结构异常,细胞排列疏松、紊乱,光感受器层向视网膜内侧明显的玻璃膜疣样凸起,C57BL/6J组视网膜结构清晰,细胞排列有序,无明显异常;免疫组化结果示:C57BL/6N组视网膜中CX3CR1高表达于神经节细胞层、内外丛状层、感光细胞层及病灶处位置,平均光密度为0.285±0.056,C57BL/6J组为0.189±0.084(P<0.05);Western-Blot结果显示:与C57BL/6J组相比,C57BL/6N组视网膜CD86、CD206蛋白有不同程度升高,两组CD86蛋白表达有差异(P<0.05);细胞因子检测结果显示:C57BL/6N组IL-1β、TNF-α水平显著高于C57BL/6J组,而IL-10含量则明显较低(均P<0.05)。结论:C57BL/6N(Crb1 rd8/rd8)小鼠视网膜变性进展缓慢,随年龄呈进行性加重,病灶部位视网膜结构紊乱,伴有以M1型极化为主的小胶质细胞浸润。

姜黄联合山楂对C57肥胖小鼠的减肥作用及机制研究

目的:评价姜黄联合山楂的减肥作用并探索其减肥机制。方法:32只C57BL/6J小鼠随机分为四组:正常组、正常干预组、高脂组、高脂干预组,每组8只。每天定时灌胃相应药物,每周定时检测小鼠脂肪率、瘦肉率、摄食和饮水量变化,每隔两周同一时间测定小鼠的随机血糖,12周后脱颈椎处死小鼠采集标本。检测血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST),通过附睾脂肪和肝脏HE染色,观察脂肪和肝脏组织形态变化。实时荧光PCR法检测肝脏组织中胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)、脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FAS)、肝X受体α(Liver X Receptorα,LXRα)、固醇调节元件结合蛋白2(Sterol Regulatory Element Binding Protein,SREBP2)、固醇调节元件结合蛋白1C(Sterol Regulatory Element Binding Protein,SREBP1C)、硬脂酰辅酶A去饱和酶(Steary-coenzyme A dehydro-synthase-1,SCD1)mRNA的相对表达水平。结果:相比高脂组,高脂干预组小鼠体质量、脂肪率、TG、TC、LDL-C显著降低,瘦肉率、HDL-C显著升高(P<0.05),摄食、饮水量无显著差异;抑制了脂肪细胞肥大,使得脂肪沉积减少;改善了肝脏细胞空泡化、炎症浸润;肝脏组织中CYP7A1 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),LXRα、SREBP1C、SCD、FAS mRNA表达水平极显著降低(P<0.01),SREBP2 mRNA表达水平无显著变化。结论:姜黄-山楂具有良好的减肥作用,其减肥机制与调节相关基因中mRNA表达水平有关。

C57BL/6小鼠炎症性肠病模型的建立与指标评价

【目的】通过葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)或脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激构建小鼠炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)模型,为IBD研究提供高效经济的模型参考,并为IBD抗炎药物筛选与药效评价提供可靠的方法支撑。【方法】本试验以C57BL/6雄性小鼠为研究对象,分别暴露于不同浓度的DSS(3%、4%和5%)7 d或LPS(5、10和20 mg/kg)4 h。通过测量小鼠结肠长度,HE染色观察肠道形态结构及实时荧光定量PCR检测肠道炎性因子的mRNA表达等对模型进行评价。【结果】DSS诱导小鼠结肠变短、病理出血、腺体萎缩、结构排列絮乱、炎性细胞浸润以及结肠中炎性因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)的mRNA表达显著上升(P<0.05),4%DSS即可高效建立IBD模型。同时,LPS引起小鼠肠系膜出血、肠道肿胀和充血,肠绒毛高度降低,隐窝深度升高,小肠中IL-10和IL-1βmRNA水平升高、IL-6 mRNA水平下降,十二指肠和回肠TNF-αmRNA水平上升,空肠TNF-αmRNA水平降低,且以5 mg/kg LPS综合影响最为显著。【结论】4%DSS和5 mg/kg LPS是C57BL/6小鼠IBD模型建立的最适浓度,肠道病理形态改变、肠道炎性细胞浸润及炎性因子IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α的mRNA表达异常是评价IBD模型的重要指标。

孕期低剂量镉暴露对C57BL/6母鼠肾脏组织的毒性损伤作用

为研究孕期低剂量镉暴露对母鼠肾脏的毒性效应,基于前期构建的孕期低剂量镉暴露小鼠模型,通过组织显微切片技术对镉暴露母鼠的肾脏组织结构进行观察,并通过实时定量PCR法和蛋白质免疫印迹法对肾脏中炎症相关基因和凋亡调控基因的mRNA和蛋白质表达水平进行检测。实验结果显示:孕期低剂量镉暴露可导致肾脏结构出现一定程度的病变,如肾小球内细胞数目增多,肾小囊变窄,肾小球略微肿胀等;与对照组相比,镉暴露母鼠肾脏中凋亡功能调控基因Bax的mRNA和蛋白质表达水平显著升高。综上所述,孕期低剂量镉暴露可导致母体肾脏结构发生损伤,该毒性作用可能与凋亡调控基因Bax的表达水平升高相关。研究结果旨在阐明孕期低剂量镉暴露对母体器官的毒性效应机制,为镉暴露下家畜的母胎健康风险评估和环境管理提供基础数据支持。

滇牡丹PdMYB57基因克隆及功能验证

【目的】滇牡丹作为牡丹育种材料,具有丰富的花色资源,研究其MYB转录因子对花色的调控作用可为牡丹花色分子育种工作提供帮助。【方法】以黄色及红色滇牡丹花部组织为材料进行徒手切片,并以其转录组数据为基础进行序列比对,得到1个MYB转录因子编码基因PdMYB57。经基因克隆、系统进化树构建、定量逆转录聚合酶链式反应(qPCR)、瞬时表达及高效液相色谱(HPLC)等验证该基因功能。【结果】PdMYB57基因有1个798 bp的完整开放阅读框,编码265个氨基酸,为亲水性不稳定蛋白;与拟南芥SG6亚族及卵叶牡丹PqMYB113、牡丹PsMYB57/PsMYB58及葡萄VvMYBA1/VvMYBA2等MYB转录因子聚为一簇,具有R2R3保守结构域[R/K]Px[P/A/R]xx[F/Y]基序;其在红色花滇牡丹萼片及黄色花滇牡丹叶片中高表达;其瞬时表达后能使烟草叶片产生紫色,HPLC表明其瞬时表达的烟草叶片中含有矢车菊素3-O-芸香糖苷(Cy3R)。【结论】PdMYB57基因编码1个R2R3-MYB转录因子,其表达具有组织特异性,并能促进植物花青素合成。

C57BL/6J小鼠与昆明小鼠NIAAA法酒精性肝病造模效果的比较

为了对比C57BL/6J小鼠和昆明小鼠酒精性肝病模型建造效果及建模完成后续肝脏生化指标变化情况,为酒精性肝病的治疗研究提供基础依据,试验选择雌性C57BL/6J小鼠和昆明小鼠各36只,随机分为对照组(液体饲料+麦芽糊精)、建模16 d组与建模19 d组(液体饲料+酒精,n=12)。利用NIAAA法建造酒精性肝病小鼠模型,并分别于建模第16 d、建模第19 d取其血清及肝组织进行生化指标检测及病理切片观察。结果显示,C57BL/6J小鼠建模16 d组和建模19 d组与昆明小鼠建模16 d组的小鼠血清ALT、AST含量,肝脏MDA、TG含量均分别显著高于其对照组小鼠(P<0.05);而血清ALB含量、肝脏SOD活力显著低于其对照组小鼠(P<0.05)。C57BL/6J建模16 d组和建模19 d组小鼠的肝脏GSH含量和肝脏系数显著高于其对照组小鼠(P<0.05),但昆明小鼠建模19 d组除了肝脏SOD活力显著低于其对照组小鼠(P<0.05),其他指标均与其对照组小鼠无显著差异。病理切片结果表明,与对照组相比,建模16 d组2种小鼠肝细胞排列紊乱,肝细胞索断裂,肝细胞出现炎性浸润和脂肪液滴。C57BL/6J小鼠建模19 d组肝组织仍呈现病变,而昆明小鼠建模19 d组肝细胞已逐渐恢复正常排列。与昆明小鼠相比,C57BL/6J小鼠对于酒精的肝脏氧化应激损伤更严重,酒精性肝病模型更稳定。

BAF57在结直肠癌组织中的表达及其对患者预后的影响

目的:探讨Brahma相关基因1相关因子57(BAF57)在结直肠癌(CRC)组织中的表达及其对患者预后的影响。方法:选择2016年1月—2018年1月河北省衡水市人民医院收治的110例CRC患者的癌组织和癌旁组织作为研究对象,分别采用荧光定量PCR(qPCR)和Western blot方法检测癌及癌旁组织中BAF57的mRNA和蛋白表达,分析CRC癌组织中BAF57表达水平与临床病理指标的关系;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析BAF57表达水平诊断CRC的价值,以癌组织中BAF57表达水平均值为基准,将患者分为高低表达组。采用Kaplan-Meier和Log-rank检验进行BAF57高、低表达水平组间的生存分析。结果:CRC癌组织中BAF57 mRNA和蛋白的表达水平均显著高于癌旁组织(P<0.05),且其表达水平与患者的TNM分期均呈正相关(r分别为0.913和0.925,均为P<0.01),与癌组织分化程度呈负相关(r分别为-0.781和-0.888,均为P<0.01);与淋巴结转移呈正相关性(r分别为0.744和0.743,均为P<0.01)。ROC分析显示,BAF57 mRNA和蛋白诊断CRC的曲线下面积分别为0.976和0.915。生存分析表明,BAF57 mRNA和蛋白高表达组的中位生存时间均明显短于低表达组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论:BAF57在CRC组织中高表达,且与患者恶性进展及不良预后呈正相关,BAF57有望成为CRC患者预后不良的预测指标。

C57BL/6J小鼠背景的CD19嵌合抗原受体T细胞的制备及优化

目的:探索C57BL/6J小鼠CD3^(+)T细胞体外刺激条件、最佳培养和感染时间,以期提高CD19嵌合抗原受体T细胞(m CD19 CAR-T)的感染效率。方法:将纯化的C57BL/6J小鼠CD3^(+)T细胞在包被CD3/CD28抗体(anti-CD3/CD28 coated)、包被CD3抗体+可溶性CD28抗体(anti-CD3 coated+soluble anti-CD28)和包被CD3抗体(anti-CD3 coated)3种不同条件下分别刺激12 h和24 h,后续培养24 h、48 h和72 h并记录细胞克隆数。在上述3种条件下分别刺激C57BL/6J小鼠CD3^(+)T细胞12、24和36 h,然后加入白介素(IL)-2(100 U/ml),镜下记录培养24 h、48 h和72 h的细胞克隆数;此条件下取刺激24 h的CD3^(+)T细胞,感染m CD19 CAR-T逆转录病毒,制备m CD19 CAR-T细胞,流式检测48 h时3组中GFP+CAR-T细胞的百分率。结果:利用获得BALB/c小鼠m CD19 CAR-T细胞的最优化条件,制备C57BL/6J小鼠的m CD19 CAR-T细胞感染效率仅5.23%;anti-CD3^(+)soluble anti-CD28 coated刺激C57BL/6J小鼠CD3^(+)T细胞24 h,终止刺激继续培养至48 h时细胞克隆数最高;在上述条件刺激24 h后加入IL-2培养48 h,anti-CD3^(+)soluble anti-CD28 coated组T细胞增殖克隆数量显著增加,且CAR-T细胞感染效率为17.63%±4.17%。结论:C57BL/6J小鼠来源T细胞制备CAR-T细胞的最佳条件与BABL/c小鼠不同;anti-CD3^(+)soluble anti-CD28 coated+IL-2刺激条件下诱导的T细胞感染逆转录病毒后可获得最高效率的m CD19 CAR-T细胞。

顺铂诱导肾损伤模型在C57BL/6小鼠J和N亚型中的差异性研究

目的探讨C57BL/6 J和N亚型小鼠在顺铂诱导肾损伤模型中的易感性差异,为选择药物肾损伤模型提供理论依据。方法雄性C57BL/6小鼠J和N两种亚型,各随机分为正常组(Control)、模型组(cisplatin,CDDP)。模型组腹腔注射顺铂(3.33 mg·kg^(-1)),隔天给药,持续2周,记录小鼠体重变化、存活率;检测Scr、BUN和β2-MG评价肾功能;HE、Masson和PAS染色法观察肾皮质病理改变。IL-6、IL-1β和IL-18等炎症因子检测顺铂导致的肾脏炎症反应。结果与Control组相比,CDDP组两种亚系小鼠Scr、BUN和β2-MG均明显升高;组织学结果显示肾小管损伤,胶原纤维化和糖原沉积均增加;IL-6、IL-1β和IL-18炎症因子含量和肾皮质蛋白表达均明显升高。C57BL/6N与C57BL/6J系小鼠比较,C57BL/6N系小鼠肾功能指标Scr和BUN均值明显偏高(P<0.01),组织学评分各病理损伤较C57BL/6J亚系小鼠明显偏高,反映纤维化的Masson染色差异具有统计学意义(P<0.01);IL-6、IL-1β和IL-18均值明显偏高,但差异无统计学意义。结论C57BL/6 J和N亚型小鼠均可使用顺铂诱导成功肾损伤模型,相比于C57BL/6J小鼠,C57BL/6N亚系小鼠在肾功能、组织学以及炎症因子等方面损伤明显,提示C57BL/6N亚系小鼠更适于作为药物或者其他肾功能损伤模型的建立。

符合VITA57标准的国内外连接器对比分析

介绍了VITA57系列标准,对VITA57标准接口连接器的规定展开了说明。结合该连接器在国内外的应用和研发情况,对国内外产品进行了产品结构、接触方式、锡块安装方式、性能指标、使用方法等方面的对比分析研究。对VITA57标准及其标准接口连接器在国内的发展前景进行了展望。

蝴蝶兰WRKY57基因的克隆、亚细胞定位及响应脱落酸功能分析

WRKY转录因子是植物生长发育及胁迫反应的重要调节因子,然而关于蝴蝶兰(Phalaenopsis aphrodite)WRKY家族的功能知之甚少。以蝴蝶兰品种满天红为试验材料,分析蝴蝶兰转录因子PaWRKY57的理化特性、亚细胞定位、组织表达及在脱落酸(ABA)处理下的响应机制,结果表明,从P.aphrodite克隆得到的PaWRKY57长度为2049 bp,编码682个氨基酸,为不稳定的亲水蛋白,亚细胞定位显示PaWRKY57位于细胞核内。结构域分析和同源性比较表明,PaWRKY57蛋白具有WRKYGQK结构域,属于WRKY家族Ⅲ型亚家族;系统发育分析表明,PaWRKY57与水稻OsWRKY47亲缘关系最近。qRT-PCR分析显示,PaWRKY57在叶片中表达水平最高,在ABA处理下表现出“升—降—升—降”的表达模式。与野生型品系(WT)相比,PaWRKY57过表达植株的抑生植物激素(ABA、GAs)含量增加,叶绿素与促生植物激素(BR、IAA)含量降低,从而导致叶片黄化明显、植株衰老加快;在此基础上喷施ABA后,上述现象进一步加剧。综上,PaWRKY57是一个响应ABA信号的转录因子,受ABA信号介导调控蝴蝶兰的衰老过程。

17β-雌二醇抗BALB/c与C57BL/6小鼠视网膜光照损伤的比较

目的:通过建立BALB/c与C57BL/6小鼠视网膜光损伤模型,研究17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)的视网膜神经保护作用,为成功构建E2抗视网膜光损伤模型提供实验数据。方法:成年雌性BALB/c、C57BL/6小鼠各40~45只,实验分组如下:正常对照组,去势手术对照组,去势光照组(小鼠去势手术14d后进行持续10000lx白光光照刺激4、8、12、16、24h组),玻璃体腔注射假手术组,生理盐水组和E2预处理组(去势手术14d后暗适应24h后分别行玻璃体腔注射2μL生理盐水或10-5 mol/L E2),每组各6只。通过石蜡切片HE染色、TUNEL染色、视网膜电图检测视网膜形态及功能变化。结果:去势光损组视网膜内核层/外核层厚度从白光10000lx光照4h组开始显著减小;玻璃体腔注射E2预处理可显著抑制两种品系小鼠视网膜各层细胞的凋亡(P<0.01)以及C57BL/6小鼠视网膜电图检测中最大混合反应a波和b波波幅的下降(P<0.05)。结论:相同光照条件对两种品系小鼠光损敏感性存在差异;E2对BALB/c小鼠无论是视网膜形态学及功能学上都产生了保护作用,而对C57BL/6小鼠功能学保护作用显著。

枸杞多糖对去势C57BL/6J小鼠小脑的神经保护作用

目的观察枸杞多糖对去势C57BL/6J小鼠小脑的神经保护和认知功能改善作用。方法选用12周龄C57BL/6J雌鼠,随机分为假手术组、模型组和枸杞多糖(LBP)干预组。12周龄雌鼠去势后1周,LBP干预组给予灌胃枸杞多糖0.1 g·kg^(-1),每天1次,连续12周,假手术组和模型组灌胃服用等量蒸馏水。应用旷场实验、新物体识别实验、Morris水迷宫实验检测小鼠焦虑及学习记忆能力;酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠血清中雌二醇(E2)含量;生物化学方法检测血清及小脑半球氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;蛋白免疫印迹法检测小脑半球胆碱乙酰转移酶(ChAT)及炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的相对表达量。结果去势小鼠LBP干预12周后,与假手术组小鼠比较,模型组小鼠的体质量增加、子宫系数下降、学习记忆能力减弱、血清E2含量下降、血清及小脑半球氧化应激指标MDA含量增高,SOD和GSH-Px活力降低,小脑半球ChAT的表达量下调以及炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量上调(P均<0.05)。与模型组小鼠比较,LBP干预组小鼠的体质量、子宫系数及血清E2含量差异无统计学意义(P均>0.05),学习记忆能力、氧化应激指标MDA含量,SOD和GSH-Px活力、小脑半球ChAT及炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的相对表达量均有所改善(P均<0.05)。结论LBP干预可以改善去势C57BL/6J小鼠的认知功能,可能与其对小脑的抗氧化、抗炎及提高ChAT的表达有关。

马铃薯StWRKY57基因的生物信息学分析及亚细胞定位

WRKY转录因子对于植物抗逆境胁迫具有重要作用,根据先前进行的转录组测序分析,发现StWRKY57在干旱和盐胁迫条件下被诱导上调表达。以马铃薯StWRKY57为研究对象,进行生物信息学分析、表达分析和亚细胞定位,利用qRT-PCR技术分析其组织特异性和非生物胁迫下的表达情况。StWRKY57基因位于马铃薯第8号染色体上,CDS区长762 bp,属于疏水性非跨膜蛋白;同源性分析显示该蛋白与潘那利番茄SpWRKY40的同源性最高;其启动子区包含光响应元件、胚乳表达、参与昼夜节律和激素响应等相关的顺式作用元件;qRT-PCR分析显示该基因在叶中表达量最高,在200 mmol/L NaCl、20%PEG 6000和100μmol/L脱落酸(Abscisic acid,ABA)处理下,均上调表达;亚细胞定位显示该蛋白定位于细胞核中。该研究为马铃薯StWRKY57基因之后的试验提供了理论依据。

钎焊间隙对B-Ti57CuZrNi钎料钎焊TC4钛合金接头组织和高温力学性能的影响

采用B-Ti57CuZrNi钎料对TC4钛合金进行了930℃,30 min不同钎焊间隙下的对焊钎焊,研究了钎焊间隙对接头微观组织和高温力学性能的影响。结果表明,随钎焊间隙增大,接头缺陷增加,钎焊间隙<0.1 mm时焊缝填充较好,接头宏观无明显缺陷。0.06~0.30 mm间隙的钎缝组织为铸态组织,原基体界面存在一个大于30μm的扩散层,得到了有效的冶金结合。随钎焊间隙增大,钎缝整体宽度增加,钎缝铸态组织更明显,高温拉伸强度降低。钎焊间隙>0.1 mm时钎焊接头高温拉伸断裂均出现在焊缝,高温拉伸强度低于基体的,断裂形式为脆性断裂,而钎焊间隙<0.1mm时高温拉伸强度则高于基体的。从获得钎焊接头优良的400℃拉伸性能来考虑,钎焊间隙应<0.1 mm。