黄芩总黄酮对支气管哮喘大鼠的治疗作用及miR-133a-3p/NOX4/NLRP3信号轴表达的影响

目的黄芩总黄酮对支气管哮喘大鼠的治疗作用及miR-133a-3p/NOX4/NLRP3信号轴表达的影响。方法清洁级SD大鼠100只分为正常对照组、模型组、地塞米松组(200 mg/kg)、黄芩总黄酮低剂量组(100 mg/kg)、黄芩总黄酮高剂量组(200 mg/kg),每组20只。除正常对照组外,模型组、地塞米松组、黄芩总黄酮低高剂量组通过卵清蛋白(OVA)建立支气管哮喘模型,并予以相应药物干预。实验结束后,检测肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数,以及肺/体比值、肺损伤评分、动脉血氧分压(PaO_(2))水平;反逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹法检测肺支气管组织微小RNA-133a-3p(miR-133a-3p)、NADPH氧化酶4(NOX4)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)水平。结果与正常对照组比较,模型组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,以及支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平升高,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,地塞米松组、黄芩总黄酮低剂量组和黄芩总黄酮高剂量组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,以及支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平降低,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与地塞米松组比较,黄芩总黄酮低剂量组、黄芩总黄酮高剂量组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,以及支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平升高,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与黄芩总黄酮低剂量组比较,黄芩总黄酮高剂量组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平升高,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芩总黄酮对大鼠支气管哮喘具有明显治疗作用,其机制可能与黄芩总黄酮促进miR-133a-3p的表达进而抑制NOX4/NLRP3信号轴的激活相关。

NOX4在胃癌评价中的意义探索

目的:探究NADPH氧化酶4(NOX4)在胃癌中的表达、预后、信号通路的作用及与肿瘤组织中浸润的免疫细胞的关系。方法:从癌症基因图谱(TCGA)和基因表达数据库(GEO)下载数据,分析NOX4在胃癌组织和正常组织的表达、NOX4表达水平和患者临床病理因素的关系、信号通路的基因富集分析及免疫浸润分析。结果:NOX4表达量肿瘤组织较正常组织明显偏高,具有一定的诊断价值;NOX4是一个重要的预后因子,高表达组患者预后不良;NOX4的表达和患者临床病理分期相关;NOX4和WNT、转化生长因子-β(TGF-β)及细胞黏附分子(CAMs)信号通路相关;对于NOX4高表达组而言,主要影响肿瘤组织的因素为M2型巨噬细胞及浆细胞浸润。结论:在胃癌形成进展中,NOX4发挥着重要影响。

淫羊藿苷通过Cx32-Nox4信号通路改善高血压肾纤维化和损伤

目的:探讨淫羊藿苷通过Cx32-Nox4信号通路对高血压肾纤维化和损伤的影响。方法:在自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHRs)上建立高血压肾病(hypertensive nephropathy,HN)大鼠模型。实验分为4组:正常对照组(WKY大鼠)、模型组(SHR)、淫羊藿苷10 mg·kg^(-1)·d^(-1)组(每天灌胃淫羊藿苷一次)、淫羊藿苷30 mg·kg^(-1)·d^(-1)组(每天灌胃淫羊藿苷一次),每组10只。在体内检测纤维化相关蛋白的表达。选择暴露于血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的NRK-52E细胞来观察淫羊藿苷对肾损伤的影响。用蛋白质免疫印迹法和免疫组化检测细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的水平,包括α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ,Col-Ⅰ)和纤连蛋白(fibronectin,FN)的表达。试剂盒检测氧化应激标记物超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)表达的变化。结果:淫羊藿苷在体内显著降低SHR大鼠的肾脏纤维化。淫羊藿苷下调α-SMA、FN和Col-Ⅰ的表达(P<0.05),并保护高血压损伤的肾组织免受进行性纤维化的影响。淫羊藿苷可以显著提高SHR大鼠肾脏和血清中的总SOD活性,显著降低MDA水平(P<0.05)。此外,淫羊藿苷显著提高SHR大鼠肾脏中Cx32的表达,并显著减少Nox4的表达(P<0.05)。淫羊藿苷对AngⅡ介导的NRK-52E细胞损伤和纤维化具有保护作用。结论:淫羊藿苷可以改善肾小管间质纤维化并延缓HN的进展。肾脏保护可能归因于Cx32-Nox4信号通路介导的氧化应激的调节来实现。

基于ROCK/NOX4信号通路探究刺芒柄花素对2型糖尿病大鼠内质网应激损伤及肾功能的影响

目的基于RAS同源基因家族成员相关激酶(ROCK)/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)4信号通路探究刺芒柄花素对2型糖尿病大鼠内质网应激损伤及肾功能的影响。方法SPF级健康8周龄雄性C57BL/6大鼠60只,随机分为5组,各12只,健康组、模型组、刺芒柄花素低、中、高组,除健康组外均建立2型糖尿病大鼠模型,刺芒柄花素低组、刺芒柄花素中组、刺芒柄花素高组分别给予20、40、100 mg/kg刺芒柄花素灌胃,其余组别灌胃等体积生理盐水。采用自动生化分析仪测定肾功能指标。苏木素-伊红(HE)染色与Masson染色观察大鼠肾组织病形态。TUNEL检测肾小管上皮细胞凋亡。免疫组化检测RAS同源基因家族成员(Rho)A、NOX4、ROCK阳性表达。Western印迹检测内质网应激相关蛋白表达。结果HE染色结果显示:健康组肾脏组织结构正常;模型组肾小球有一定程度萎缩,组织结构排列不均匀,并且有肿胀、脱落现象、还存在空泡样变性、鲍曼囊腔扩,而经过刺芒柄花素干预后,上述情况有所改善,且呈现出明显的剂量依赖性。Masson染色结果显示:健康组肾组织正常;模型组肾小球、肾小管基底膜增厚,产生空泡样病变,肾间质胶原纤维沉积明显;在经过刺芒柄花素干预后上述状况明显改善,且呈现出明显的剂量依赖性。健康组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著低于模型组(P<0.05)。模型组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著高于刺芒柄花素低组(P<0.05)。刺芒柄花素低组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著高于刺芒柄花素中组(P<0.05)。刺芒柄花素中组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著高于刺芒柄花素高组(P<0.05)。结论刺芒柄花素可能是通过调控Rho/ROCK/NOX4信号通路抑制了2型糖尿病大鼠内质网应激,改善肾功能,对肾脏起保护作用。

NOX4介导的氧化应激参与垂体腺瘤出血性卒中的发生

目的探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶4(NOX4)在垂体腺瘤出血性卒中(PA)中的作用。方法取厦门大学附属中山医院神经外科垂体腺瘤手术剩余标本,根据术后病理分为出血卒中(PA)组和非卒中(non-PA)组,每组18例。苏木精-伊红(HE)染色明确是否出血;免疫组织化学染色检测NOX4阳性细胞百分数;Western blot检测NOX4蛋白表达量;DCFH-DA探针检测活性氧(ROS)平均荧光强度;TUNEL法检测细胞凋亡率。结果出血卒中组组织间大量红细胞渗出,非卒中组未见红细胞。出血卒中组表达的NOX4阳性细胞百分数为21.53%±4.25%,显著高于非卒中组的4.29%±1.71%(P<0.001)。出血卒中组NOX4蛋白表达水平显著高于非卒中组(P<0.001)。出血卒中组ROS平均荧光强度显著高于非卒中组(P<0.001)。出血卒中组细胞凋亡率为38.64%±12.46%,显著高于非卒中组的6.19%±2.40%(P<0.001)。结论NOX4参与垂体腺瘤出血性卒中的发生。NOX4介导的氧化应激调控细胞凋亡可能是垂体腺瘤出血性卒中的潜在机制。

右美托咪定抑制NOX4缓解急性应激致大鼠肾损伤

本研究拟探索右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)对大鼠急性应激致肾损伤的保护作用,并从氧化应激的角度探索DEX对大鼠肾的保护通路。本研究使用了急性束缚应激模型,其中,大鼠被迫游泳15 min,并束缚3 h。本试验采用生化检测、组织病理学切片观察以评估肾功能,然后测定了氧化应激以及氧化应激的相关通路蛋白。旷场试验证实成功建立了急性应激模型。急性应激引起的肾损伤增加了NOX4,降低了Nrf2/HO-1/NQO1表达水平。DEX可降低NOX4表达,同时升高Nrf2/HO-1/NQO1的表达水平。DEX治疗组与急性应激组相比的肾生化结果明显恢复正常,病理切片观察损伤显著降低。试验结果表明,DEX治疗急性应激可影响NOX4/Nrf2/HO-1/NQO1信号通路,并抑制氧化应激。因此,DEX对急性应激引起的肾损伤具有保护作用,并在应激综合征中具有潜在的临床应用。

NOX4/ROS/STAT3通路对肝星状细胞活化增殖的影响

目的 研究肝星状细胞活化及增殖过程中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)和信号转导与转录激活因子3(STAT3)表达的变化,并探讨NOX4抑制剂GKT137831是否可通过抑制NOX4,减少活性氧(ROS)的产生,抑制STAT3信号通路,抑制肝星状细胞活化与增殖。方法 将大鼠肝星状细胞-T6(HSC-T6)分为4组:对照组、TGF-β1组、TGF-β1+GKT137831组、GKT137831组。DCFH-DA荧光探针法检测HSC-T6细胞内ROS水平,CCK-8法检测细胞增殖,实时荧光定量PCR法检测NOX4、STAT3 mRNA的表达;细胞免疫荧光和蛋白印迹法检测NOX4、STAT3、p-STAT3及α-SMA蛋白的表达。结果 与对照组相比,TGF-β1组HSC-T6细胞中NOX4 mRNA和蛋白表达上调,细胞内ROS水平升高,p-STAT3蛋白表达增加,细胞活化增殖能力升高(P<0.05);给予GKT137831处理后,HSC-T6细胞中NOX4 mRNA和蛋白表达下调,细胞内ROS水平下降,STAT3蛋白磷酸化减少,细胞活化增殖能力下降(P<0.05)。结论 NOX4可能通过产生ROS,促进STAT3磷酸化,导致HSC-T6细胞活化与增殖;GKT137831通过抑制NOX4来减少ROS的产生,抑制STAT3磷酸化,从而抑制HSC-T6细胞活化与增殖。

Role of apigenin in high glucose-induced retinal microvascular endothelial cell dysfunction via regulating NOX4/p38 MAPK pathway in vitro

AIM:To investigate the retinoprotective role of Apigenin(Api)against high glucose(HG)-induced human retinal microvascular endothelial cells(HRMECs),and to explore its regulatory mechanism.METHODS:HRMECs were stimulated by HG for 48h to establish the in vitro cell model.Different concentrations of Api(2.5,5,and 10μmol/L)were applied for treatment.Cell counting kit-8(CCK-8),Transwell,and tube formation assays were performed to examine the effects of Api on the viability,migration,and angiogenesis in HG-induced HRMECs.Vascular permeability was evaluated by Evans blue dye.The inflammatory cytokines and oxidative stress-related factors were measured using their commercial kits.Protein expression of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate(NADPH)oxidase 4(NOX4)and p38 mitogen-activated protein kinase(MAPK)was measured by Western blot.RESULTS:Api prevented HG-induced HRMECs viability,migration,angiogenesis,and vascular permeability in a concentration-dependent manner.Meanwhile,Api also concentration-dependently inhibited inflammation and oxidative stress in HRMECs exposed to HG.In addition,HG caused an elevated expression of NOX4,which was retarded by Api treatment.HG stimulation facilitated the activation of p38 MAPK signaling in HRMECs,and Api could weaken this activation partly via downregulating NOX4 expression.Furthermore,overexpression of NOX4 or activation of p38 MAPK signaling greatly weakened the protective role of Api against HG-stimulated HRMECs.CONCLUSION:Api might exert a beneficial role in HGstimulated HRMECs through regulating NOX4/p38 MAPK pathway.

乳果糖调控NOX4/NLRP3通路对类风湿性关节炎大鼠的保护作用

目的:探讨乳果糖调控烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)/核苷酸结合域样受体蛋白3(NLRP3)通路对类风湿性关节炎(RA)大鼠的保护作用。方法:将50只大鼠随机分为对照组、RA组、乳果糖(0.25 g/kg)组、乳果糖+NOX4抑制剂GKT137831(10 mg/kg)组、甲氨蝶呤(0.35 mg/kg)组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠通过尾根处皮内注射胶原乳液建立RA大鼠模型。造模完成后各组灌胃给予相应药物处理。灌胃结束次日进行关节炎评分,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测到大鼠粪便肠道菌群所占比例,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平。苏木精—伊红(HE)染色观察踝关节组织病理学变化。蛋白印迹(western blotting)法检测NOX4、NLRP3蛋白表达。结果:与对照组相比,RA组大鼠出现炎性浸润、少量纤维蛋白沉积以及滑膜出血等病理现象,粪便中拟杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌所占比例显著降低,而放线菌所占比例、平均关节炎评分,血清TNF-α、IL-6水平及关节组织中NOX4、NLRP3蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。与RA组相比,乳果糖组、甲氨蝶呤组病理现象得到改善,大鼠粪便中拟杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌所占比例显著增高,放线菌所占比例、平均关节炎评分,血清中TNF-α、IL-6水平,关节组织中NOX4、NLRP3蛋白表达显著降低(均P<0.05)。乳果糖组与甲氨蝶呤组上述指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。与乳果糖组相比,乳果糖+GKT137831组病理损伤得到进一步改善,大鼠粪便中拟杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌所占比例显著增高,放线菌所占比例、平均关节炎评分,血清中TNF-α、IL-6水平,关节组织中NOX4、NLRP3蛋白表达水平显著降低(均P<0.05)。结论:乳果糖可减轻RA大鼠炎性反应,其机制可能与抑制NOX4/NLRP3通路有关。

间歇有氧运动对大鼠心肌NOX4、ROS表达及血清相关氧化因子的影响

目的:探讨间歇有氧运动对大鼠心肌NOX4、ROS表达及血清相关氧化因子的影响.方法:选取雄性SD大鼠20只,随机分为对照组(C组)和间歇有氧运动组(CE组),每组10只.C组大鼠正常喂养,CE组大鼠进行为期4周跑台运动.训练结束后HE染色观察心肌组织形态结构,血流动力学测定各组大鼠心功能,紫外分光光度法测定血清MDA含量和SOD活性,微量酶标法测定血清LDH活性,DHE法检测心肌活性氧(ROS)水平,Western Blot检测心肌NOX4表达.结果:与C组比较,CE组大鼠心肌形态结构显著改善,LVEDP显著降低(P<0.01),LVSP和±dp/dtmax显著升高(P<0.01),血清MDA含量、LDH活性均显著降低(P<0.01),SOD活性显著增强(P<0.01),ROS水平均显著降低(P<0.01)心肌NOX4的表达显著降低(P<0.01).结论:间歇有氧运动可显著改善大鼠心脏形态结构,提升大鼠心功能;间歇有氧运动可使大鼠血清MDA、LDH的含量显著降低,SOD活性显著增强,心肌NOX4和ROS表达显著降低,进而降低大鼠心脏氧化应激水平,改善大鼠心功能.

NOX4的表达与非小细胞肺癌预后的关系

目的探索烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)的表达与非小细胞肺癌预后的关系。方法收集经病理确诊为肺原位癌和不典型增生患者的石蜡包埋标本作为癌前病变组(20例),选取经病理确诊的非小细胞肺癌患者石蜡包埋的手术标本作为肺癌组(40例),以及经病理确诊为肺癌转移性胸腔积液沉渣的石蜡包埋标本作为肺转移癌组(17例),采用免疫组织化学的方法分别检测各组肺组织标本NOX4的表达情况。分析NOX4蛋白的表达与非小细胞肺癌临床参数,即年龄、性别、吸烟史、肿瘤类型、肿瘤分期、分化程度及淋巴结转移的相关性,并分析NOX4蛋白的表达与患者预后生存的关系。结果NOX4主要表达部位为细胞胞浆及胞核,在癌前病变组、肺癌组及肺转移癌组中NOX4表达的平均光密度值分别为10.06±2.32、19.47±4.71和18.44±3.62,3组比较差异具有统计学意义(P<0.05),肺癌组及转移癌组比癌前病变组表达升高(P<0.05),而肺癌组及转移癌组中NOX4表达差异无统计学意义(P>0.05);在非小细胞肺癌组织中,NOX4的表达与肿瘤分化程度密切相关(P<0.05),并且Kaplan-Meier曲线显示高NOX4表达的患者总体生存率明显低于NOX4低表达或阴性的患者(P<0.05),COX生存分析显示NOX4是影响非小细胞肺癌患者预后的独立危险因素。结论非小细胞肺癌肿瘤组织及转移灶内存在NOX4高表达,NOX4的阳性表达与非小细胞肺癌患者预后密切相关,NOX4可能通过氧化-抗氧化的信号途径参与肿瘤侵袭转移的过程,因此NOX4可能是一个良好的预后标志物。

两色金鸡菊对糖尿病大鼠肾脏纤维化RhoA/ROCK/Nox4信号通路的影响

目的观察两色金鸡菊对糖尿病大鼠肾功能损伤及肾脏纤维化的影响,探讨其作用机制。方法 SD大鼠以高脂高糖饲料联合小剂量链脲佐菌素诱导建立糖尿病大鼠模型。将60只大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组和两色金鸡菊高、中、低剂量组,每组10只。各给药组给予相应剂量药物灌胃4周。Masson染色观察大鼠肾脏纤维物质沉积的变化;放射免疫法检测大鼠早期肾损伤各指标的水平;免疫组化检测大鼠肾组织RhoA、p-MYPT、Nox4、平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)的蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肾脏纤维物质沉积、尿微量白蛋白、α1-微球蛋白(α1-MG)、β2-巨球蛋白(β2-MG)水平显著升高,RhoA、p-MYPT、Nox4、α-SMA蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,两色金鸡菊高、中、低剂量组均不同程度地改善大鼠肾脏纤维物质的沉积,抑制尿液微量白蛋白、α1-MG、β2-MG表达水平,肾组织RhoA、p-MYPT、Nox4、α-SMA蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论两色金鸡菊乙酸乙酯提取物可能通过RhoA/ROCK/Nox4信号通路抑制模型大鼠肾组织α-SMA的表达、肾脏纤维物质沉积,进而减轻模型大鼠早期肾脏损伤。

TGF-β1通过激活NOX4/ROS通路促进宫颈癌细胞的侵袭和迁移

目的探讨转化生长因子β1/尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶/活性氧(TGF-β1/NOX4/ROS)信号通路在宫颈癌细胞侵袭和迁移中的作用。方法采用5 ng/mL TGF-β1处理培养的SiHa、 CaSki、 HeLa、 C4-I和C33A宫颈癌细胞4 h或8 h, 2′, 7′-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色结合流式细胞术检测处理前后SiHa、 CaSki、 HeLa、 C4-I和C33A宫颈癌细胞ROS水平;转染NOX4小干扰RNA(NOX4-siRNA)或加入NOX4信号通路抑制剂二亚苯基碘氯化物(DPI), Western blot法检测宫颈癌HeLa细胞NOX4蛋白水平, Transwell^(TM)侵袭和迁移实验检测TGF-β1对宫颈癌细胞侵袭和迁移能力的影响。结果 TGF-β1显著上调HPV阳性SiHa、 CaSki、 HeLa和C4-I宫颈癌细胞NOX4蛋白表达,促进ROS产生,并增强宫颈癌细胞的侵袭和迁移性;敲低NOX4基因或使用NOX4通路抑制剂DPI可逆转这种作用。结论 TGF-β1激活NOX4/ROS信号通路增强宫颈癌细胞的侵袭和迁移能力。

瑞舒伐他汀抑制同型半胱氨酸诱导的内皮祖细胞凋亡涉及Nox4氧化应激途径

目的研究瑞舒伐他汀(Rosu)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的内皮祖细胞(EPCs)活性氧(ROS)产生以及凋亡的影响。方法从外周血中分离EPCs与Hcy共孵育,或经Rosu、不同的应激信号通路抑制剂甲羟戊酸(100μmol/L)、乙酰半胱氨酸(NAC,10μmol/L)、NADPH氧化酶(Nox)抑制剂(DPI,10μmol/L)、内皮一氧化氮合成酶抑制剂(LNMA,1 mmol/L)预培养后再加入Hcy共孵育。采用流式法检测细胞凋亡率,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐法(H2DCF-DA)检测细胞内ROS水平,光泽精化学发光法检测Nox活性,RT-PCR检测Nox4 mRNA的表达。结果 Rosu显著抑制了Hcy诱导的ROS蓄积和EPCs凋亡,拮抗了Hcy诱导的Nox激活以及Nox4 mRNA表达。Nox4 siRNA转染EPCs可以产生相似的效果。结论 Rosu对EPCs的保护作用可能是通过Nox4途径抑制Hcy诱导的Nox激活、ROS蓄积和EPCs凋亡来实现。

GLP-1通过NOX4信号通路拮抗AGE诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤

【目的】探讨NOX4信号通路在胰高血糖素样肽-1(GLP-1)拮抗糖基化终末产物(AGE)诱导的内皮细胞氧化损伤的作用机制。【方法】实验组分为对照组、AGE组、AGE+GLP-1组、AGE+NOX4 si RNA组及AGE+阴性si RNA组,RTPCR检测NOX4 m RNA表达,Western Blotting技术检测NOX4蛋白表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率、ROS生成水平。【结果】与对照组相比,AGE可诱导细胞NOX4蛋白表达(P=0.001)及NOX4 m RNA表达(P<0.05)明显增高;加入GLP-1后,增高的NOX4蛋白(P=0.003)及NOX4 m RNA(P<0.05)明显下降。与AGE组相比,NOX4 si RNA可抑制AGE诱导的ROS生成(P=0.011)、细胞凋亡(P<0.05);阴性si RNA对AGE诱导的ROS生成(P=0.958)、细胞凋亡(P=0.169)无明显影响。【结论】GLP-1至少部分通过抑制NOX4蛋白表达拮抗AGE诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤。

泽泻汤加味方通过AT1R通路抑制高盐和AngⅡ诱导HBZY-1中NOX4表达的研究

目的探讨泽泻汤加味方通过AT1R通路抑制高盐和AngⅡ诱导的肾小球系膜细胞(HBZY-1)中NOX4表达并初探其作用机制。方法将HBZY-1细胞随机分为正常组,高盐和AngⅡ诱导模型组,缬沙坦组,泽泻汤加味方中药高、中、低剂量组。造模结束后,缬沙坦组采用缬沙坦(1μmol/L)刺激,中药组分别用泽泻汤加味方中药高(2mg/L)、中(1mg/L)、低(0.5mg/L)剂量组刺激,正常组正常培养。24 h后收集样本,RT-qPCR方法检测细胞中AT1R、NOX4的mRNA表达水平,MTT法测定细胞活性,Western blot方法检测细胞中AT1R、NOX4的蛋白质表达水平,采用AT1R抑制剂验证中药下调NOX4具体作用通路。结果与正常组比较,各给药组细胞生长受到明显抑制,RT-qPCR及Western blot结果显示,AT1R、NOX4的mRNA与蛋白表达水平显著降低(P<0.05),中药组与AT1R抑制剂组NOX4表达均下调。结论泽泻汤加味方可通过下调AT1R、NOX4 mRNA及AT1R、NOX4蛋白水平来保护盐敏感性高血压肾损伤,进而达到延缓肾纤维化的作用,具体作用机制是通过抑制AT1R信号通路进而下调NOX4蛋白表达水平。

邓老冠心方对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块NOX4的影响

【目的】探讨邓老冠心方防治动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块发生发展的可能作用机制。【方法】以高脂饲料喂养雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))鼠12周,复制AS小鼠模型。将AS小鼠随机分成模型组,中药高剂量组、低剂量组,辛伐他汀组,每组10只。另设C57BL/6J小鼠10只作为正常对照组。中药高剂量组、低剂量组给予邓老冠心方(剂量分别为3 500、700mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,辛伐他汀组给予辛伐他汀(剂量为0.005 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,共给药12周。采用苏木素—伊红(HE)染色法观察小鼠胸主动脉组织病理学变化,采用实时定量PCR(qPCR)法检测各组小鼠胸主动脉组织尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶4(NOX4)mRNA的表达。【结果】与模型组比较,中药高、低剂量组及辛伐他汀组的斑块面积/管腔面积比值呈不同程度降低(P <0.05或P <0.01)。与正常对照组比较,模型组小鼠胸主动脉组织NOX4 mRNA表达水平明显升高(P <0.001);各药物处理组小鼠胸主动脉组织NOX4 mRNA表达水平较模型组均显著降低(P <0.01),其中中药高剂量组下降最明显,与辛伐他汀组、中药低剂量组比较,差异均有统计学意义(P <0.05)。【结论】邓老冠心方可增加斑块的稳定性,并具有剂量依赖性,其机制可能与降低AS小鼠胸主动脉组织中NOX4 mRNA的表达有关。

NADPH氧化酶Nox4调控非诺贝特的抗高血压心肌肥大效应

目的拟阐明NADPH氧化酶Nox4与非诺贝特抗高血压心肌肥大效应的关系。方法构建腹主动脉缩窄(abdominal aorta coarctation,AAC)诱导的高血压大鼠模型,观察非诺贝特对高血压大鼠左心室肥大的影响。结果非诺贝特可显著抑制AAC高血压大鼠左心室肥大。与假手术组比较,AAC组左心室中NADPH氧化酶Nox4蛋白和mRNA水平均显著增加;与AAC组比较,非诺贝特剂量依赖性降低AAC高血压大鼠左心室中NADPH氧化酶Nox4蛋白和mRNA水平。结论降低NADPH氧化酶Nox4表达可能是非诺贝特发挥抗高血压心肌肥大效应的重要机制。

从NOX4与炎性因子角度探讨清热、活血组分联用治疗缺血性脑卒中火毒证大鼠脑组织损伤的机制

目的从NOX4与炎性因子角度探讨清热、活血组分联用治疗缺血性脑卒中火毒证大鼠脑组织损伤的机制。方法采用腹腔注射角叉菜胶复合线栓致大脑中动脉闭塞复制大鼠缺血性脑卒中火毒证模型。将SD大鼠随机分为8组:空白对照组(N组)、假手术组(S组)、模型组(缺血1.5 h再灌注24 h,M组)、清热组分苦碟子注射液3.6 mL/kg组(A组)、活血组分血栓通注射液40 mg/kg组(B组)、苦碟子注射液1.8 mL/kg+血栓通注射液20 mg/kg组(C组)、苦碟子注射液1.8 mL/kg+血栓通注射液80 mg/kg组(D组)、苦碟子注射液7.2 mL/kg+血栓通注射液20 mg/kg组(E组)。Longa5级评分法进行大鼠神经功能评分;TTC染色法检测大鼠脑梗死面积百分比;免疫组化法检测梗死侧大脑皮层中IL-1β、TNF-α的阳性细胞表达;Western Blot法检测梗死侧大脑皮层中NOX4蛋白表达情况。结果神经功能评分示:S组未见神经功能缺损,M组神经功能缺损最重;与M组相比,A组、B组神经功能损伤减轻(P<0.05);与A组、B组相比,C组、E组神经功能缺损减轻,但差异无统计学意义(P>0.05),D组神经功能缺损减轻最为明显,差异有统计学意义(P<0.05)。TTC染色示:S组未见白色梗死灶,M组白色梗死区域明显;与M组相比,A组、B组白色梗死区域减少,梗死体积百分比减小(P<0.05,P<0.01);与A组、B组相比,C组、E组白色梗死区域减少,梗死体积百分比减小(P<0.05),D组脑梗死体积百分比最小(P<0.01)。免疫组化示:与S组相比,M组大脑皮层IL-1β及TNF-α阳性细胞数增多,黄色深染,凋亡细胞增多(P<0.01);与M组相比,A组、B组IL-1β及TNF-α阳性细胞数减少,颜色变浅;与A组、B组相比,C组、D组IL-1β阳性细胞表达量不同程度减少(P<0.01),E组无明显差异(P>0.05);与A组、B组相比,C组、D组、E组TNF-α阳性细胞表达量均不同程度减少(P<0.01)。Western Blot示:与S组相比,M组大鼠缺血侧大脑皮层中NOX4蛋白表达量显著增多(P<0.01);与M组相比,A组、B组NOX4蛋白表达量均显著下降(P<0.05,P<0.01);与A组、B组相比,C组、D组、E组NOX4的蛋白表达量均不同程度下降(P<0.05)。结论清热、活血组分联用可通过调节NOX4及炎性因子(IL-1β、TNF-α)的表达治疗缺血性脑卒中火毒证产生的脑组织损伤。

NOX1和NOX4在小鼠非酒精性脂肪性肝炎发病中的作用

目的探讨NOX1和NOX4在小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)发病中的作用。方法给予C57BL小鼠高脂饮食及脂多糖建立非酒精性脂肪肝模型,同时设立正常饮食组作为对照。观察各组小鼠血清ALT、AST值,HE染色评定脂肪性肝炎程度,实时荧光定量反转录-聚合酶链反应检测NOX1、NOX4mRNA的表达水平。结果非酒精性脂肪性肝炎模型建立成功,NASH模型组小鼠ALT、AST及肝指数明显高于高脂(HF)组(P<0.05),HF组NOX1、NOX4mRNA表达高于正常对照组(P<0.05),NASH组的NOX1、NOX4mRNA表达明显高于正常对照组和HF组(P<0.01)。结论本实验初步认为,NOX1和NOX4参与胰岛素抵抗的形成,可能是影响NASH发生和发展的重要因素。