Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制和促凋亡作用

目的探讨Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制和促凋亡作用。方法利用脂质体将真核表达载体pIRES2-EGFP-Noxa瞬时转染至乳腺癌MCF-7细胞,通过RT-PCR检测转染后Noxa基因mRNA的表达,Western blot检测转染后蛋白的表达,MTT比色法测定细胞增殖的抑制,流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期的变化,Hoechst33342染色检测细胞的凋亡情况。结果 Noxa基因转染后在乳腺癌MCF-7细胞中成功表达。转染后mRNA及蛋白表达持续上升,其转染后24h、48h、72hmRNA的相对灰度值分别为(0.347±0.031)、(0.703±0.041)、(1.044±0.033),差异具有统计学意义(P<0.05)。转染24h、48h、72h后蛋白表达的相对灰度值为(1.171±0.086)、(1.013±0.088)、(0.886±0.063),差异具有统计学意义(P<0.05)。Noxa基因的表达使得乳腺癌MCF-7细胞出现增殖抑制,其24h、48h、72h抑制率分别为(23.9±4.2)%、(36.6±3.0)%、(47.0±3.3)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测显示MCF-7细胞DNA合成受到抑制,细胞周期主要抑制在G0/G1期。其转染24h、48h、72h的G0/G1期分别为(68.1±2.5)%、(72.6±1.5)%、(75.6±0.9)%,与阴性对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);其24h、48h、72h凋亡率分别为(11.5±0.9)%、(19.6±0.8)%、(25.4±0.7)%,组间差异有统计学意义(P<0.05)。Hoechst33342染色显示Noxa基因转染后细胞出现凋亡,其24h、48h、72h凋亡率分别为(7.3±4.1)%、(16.8±3.3)%、(23.8±2.3)%,与阴性对照组相比,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞后能够抑制细胞增殖并促进其凋亡。

细胞凋亡反应中NOXA基因启动子发挥增强子功能调节BCL2基因表达

真核生物基因的转录受到近端启动子和远端增强子的共同调控,部分基因的启动子可兼具有增强子的活性。NOXA与BCL2分别是BCL2蛋白家族促凋亡和抗凋亡成员。本课题组前期研究发现,NOXA基因启动子与BCL2基因启动子在染色质三维空间结构上存在相互作用,且NOXA基因启动子区兼有启动子和增强子特征性的组蛋白修饰标记。为进一步探究NOXA启动子是否具有增强子活性、能否在细胞凋亡过程中作为增强子调控BCL2基因表达,本研究利用染色质构象捕获(chromosome conformation capture,3C)、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和荧光素酶报告基因等检测技术在喜树碱诱导的MCF-7细胞凋亡模型中证实,NOXA启动子兼具增强子活性,并可通过形成染色质环结构远程调控BCL2基因表达。NOXA启动子的调控属性与凋亡信号强弱密切相关,在较弱凋亡信号刺激下(1μmol/L喜树碱处理),NOXA启动子主要发挥增强子功能;随着凋亡刺激信号的加强(10μmol/L喜树碱处理),NOXA启动子活性增强,主要调控其基因自身的表达,促进细胞凋亡。染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)证实NOXA启动子区启动子活性和增强子活性的动态变化与其组蛋白修饰标志一致。本研究为进一步探讨BCL2家族成员对细胞凋亡刺激做出协同反应的机制提供了新的线索。

新型16SrRNA基因芯片在新生儿败血症病原检测中的价值研究

目的探讨新型16S rRNA基因芯片在新生儿败血症病原检测中的价值。方法选择2015年1月至2017年12月北京大学深圳医院新生儿科收治的疑似败血症新生儿为研究对象，对所有新生儿抽取静脉血分别用血培养和基因芯片法进行病原检测，比较两种方法检测的阳性率、检测所需时间和检测所需血量。结果共纳入306例疑似败血症新生儿，其中血培养阳性34例（11.1%），基因芯片法阳性54例（17.6%）；98例诊断为新生儿败血症，其中血培养阳性34例（34.7%），基因芯片法阳性52例（53.1%），基因芯片法阳性率均高于血培养（P〈0.05）；基因芯片法对新生儿败血症5种常见病原的检出率高于血培养。血培养报阳时间为（14.6±5.5）h，鉴定病原时间为（72.9±19.0） h，基因芯片法报阳时间和鉴定病原时间均为3 h，基因芯片法检测病原所需时间明显短于血培养（P〈0.001）。血培养耗血量1～2 ml，基因芯片法耗血量0.5 ml，基因芯片法耗血量少于血培养。结论与传统血培养相比，基因芯片法能快速检测血中病原菌，有较高的阳性率，并可减少采血量，通过不断改进与完善，在新生儿败血症诊断中有较大的应用价值。