五味子乙素调节Noxa/Hsp27/NF-κB信号通路对哮喘大鼠气道炎症和气道重塑的影响

目的:探讨五味子乙素(Sch B)调节Noxa/热休克蛋白27(Hsp27)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对哮喘大鼠气道炎症和气道重塑的影响。方法:将SD雄性大鼠随机分为对照组(正常饲养)、哮喘组、Sch B-L组(40 mg/kg)、Sch B-H组(80 mg/kg)、阳性对照组(0.5 mg/kg地塞米松)、Vector组(尾静脉注射空载质粒^(+)80 mg/kg Sch B)、Noxa组(尾静脉注射Noxa过表达质粒^(+)80 mg/kg Sch B),每组6只。除对照组外,其余6组大鼠均采用卵清蛋白致敏和激发构建哮喘大鼠模型,给予药物干预,每天1次,干预4周。RT-qPCR检测肺组织Noxa表达;对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行白细胞分类计数;ELISA测定血清IL-4、TNF-α、IL-13、IL-5水平;HE染色评估肺组织病理变化;Western blot测定肺组织Noxa蛋白表达及Hsp27、NF-κB磷酸化水平。结果:相较于Vector组,Noxa组大鼠左肺组织Noxa表达明显增加;与对照组相比,哮喘组大鼠右肺组织结构明显受损,气管管道明显出现狭窄现象,间质大量炎性浸润,支气管平滑肌厚度,基底膜厚度和基底膜周径显著增加,BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞明显增多,巨噬细胞明显减少,血清中TNF-α、IL-4、IL-5、IL-13的水平显著升高,左肺组织中Noxa、p-Hsp27/Hsp27、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达水平显著升高(P<0.05);与哮喘组比较,Sch B-L组和Sch B-H组和阳性对照组大鼠右肺组织管道狭窄现象明显改善,炎症浸润减少,支气管平滑肌厚度,基底膜厚度和基底膜周径明显降低,BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞显著减少,巨噬细胞明显增多,血清中TNF-α、IL-4、IL-5、IL-13的水平显著降低,左肺组织中Noxa、p-Hsp27/Hsp27、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达水平显著降低,且呈剂量依赖性(P<0.05);Noxa过表达后,减弱了Sch B对哮喘大鼠气道炎症和气道重塑的改善作用。结论:Sch B可通过调节Noxa/Hsp27/NF-κB信号通路有效改善哮喘大鼠的气道炎症和气道重塑。

hsp27基因对鼻咽癌细胞增殖的作用及其机制

目的探讨hsp27基因对鼻咽癌细胞增殖的影响及其机制。方法利用实时定量PCR检测NP460(正常鼻咽部上皮细胞株)、CNE2(低分化鼻咽癌细胞株)及S18(CNE2的高转移亚克隆)的hsp27转录水平,利用慢病毒转染技术在hsp27转录水平较低的CNE2中过表达hsp27,利用小干扰RNA技术抑制S18细胞内的hsp27,用MTT技术检测过表达或抑制hsp27后细胞增殖速率的变化,同时检测转录因子NF-κB的转录水平的变化,分析hsp27影响鼻咽癌细胞增殖速率的可能机制。结果 (1)三种细胞株中的内源性hsp27水平为S18>CNE2>NP460,差异具有统计学意义。(2)在CNE2细胞中过表达hsp27基因后,细胞的增殖速率明显加快,NF-κB转录水平明显上调。(3)抑制S18细胞内的hsp27基因后,细胞的增殖速率明显减缓,NF-κB转录水平明显下调。结论 hsp27基因可能通过调节NF-κB信号通路而对鼻咽癌细胞发挥明显的促增殖作用,可设计针对hsp27基因的抗鼻咽癌分子治疗策略。

脑死亡模型兔炎症因子表达和肺损伤性变化

背景:脑死亡供体器官质量是影响移植成功率的关键。对脑死亡诱发器官损伤的机制和保护方面的研究,将为临床上供体器官的合理利用提供实验依据。目的:观察兔脑死亡后不同时间点肺脏形态学和炎症因子的变化,探究脑死亡状态致肺损伤过程中的作用机制。方法:40只健康家兔,随机分成2组,假手术组(n=20):行气管、股动脉插管及颅骨钻孔术;脑死亡组(n=20):建立兔缓慢间断颅内加压脑死亡模型。各组在术后2,6及8 h记录动脉血压和心率变化,苏木精-伊红染色观察肺组织病理改变,RT-PCR检测各组肺脏热休克蛋白27的mRNA表达,免疫组织化学法检测肺组织核因子κB和细胞间黏附分子1的表达,并用ELISA法检测白细胞介素1β及白细胞介素6,8的水平。结果与结论:(1)脑死亡后2,6,8 h家兔动脉血压、心率差异无显著性意义(P>0.05);(2)血清中白细胞介素1β及白细胞介素6、8的水平随着脑死亡时间延长有上升趋势(P<0.05);(3)脑死亡组各时间点热休克蛋白27 mRNA水平较假手术组明显升高(P<0.05);(4)光镜下可见脑死亡后2 h肺泡腔完整,6 h时肺泡间隔增宽并有水肿,炎症细胞浸润增多,8 h损伤最为严重,炎症细胞几乎浸润整个肺脏组织,该形态学变化与脑死亡组炎症相关因子细胞间黏附分子1和核因子κB表达逐渐升高的趋势一致;(5)结果表明,脑死亡状态下肺脏出现损伤性变化且呈进行性加重,该表现与炎症因子的释放有关;脑死亡状态维持8 h以上,肺脏的形态和功能将发生明显改变。

鼻咽癌细胞株CNE-2及其亚克隆S-18裸鼠皮下移植生长速度比较

目的研究鼻咽癌细胞株CNE-2及其亚克隆S-18在体内的生长速度差异及其可能机制.方法体外培养CNE-2和S-18细胞,以6×105细胞/只移植到裸鼠背部皮下,移植后3、7、10、14 d观测肿瘤大小;移植后第14天处死小鼠,称取肿瘤重量并检测肿瘤组织内的HSP27和NF-ΚB转录水平.结果 (1)裸鼠皮下移植后7 d,S-18已明显成瘤,CNE-2尚未成瘤;移植后10 d和14 d,2种细胞均明显成瘤,但S-18肿瘤体积[(223.13±21.32)mm3,10 d;(420.25±24.52)mm3,14 d]明显大于CNE-2肿瘤体积[(113.70±11.70)mm3,10 d;(279.86±25.78)mm3,14 d],P<0.05;移植后14 d S-18所形成的肿瘤的重量(0.521±0.137)g明显高于CNE-2所形成的肿瘤重量(0.449±0.125)g,P<0.05;(2)S-18肿瘤内的HSP27、NF-ΚB的转录水平明显高于CNE-2肿瘤,P<0.05.结论鼻咽癌细胞株S-18在体内的生长速度明显快于CNE-2细胞,HSP27和NF-ΚB可能参与了鼻咽癌细胞生长速度的调节.