急性左心衰患者NPPA基因多态性与NT-proBNP相关性研究

目的探讨急性左心衰患者心房利钠肽前体A(NPPA)基因多态性及N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)间的关联性。方法选自2016年5月~2017年10月间,于东莞市虎门医院心内科治疗的急性左心衰患者53例(观察组),同期选择我院体检的健康人群53例(对照组),比较两组NPPA基因多态性及NT-proBNP的表达情况。结果两组比较发现,观察组中患者rs5063基因型和rs5065基因型中的AA基因型及AG基因型患者例数远高于对照组,P<0.05;两组rs5063基因型和rs5065基因型患者的NT-proBNP水平相比无显著差异(P>0.05),但AA+GA基因型患者的NT-proBNP远低于GG基因型患者,P<0.05。结论急性左心衰患者体内的NPPA基因多态性与NT-proBNP间有较强关联性,其中AA+GA基因型患者的NT-proBNP增高更为明显,临床中应予以重视。

NPPA rs198358基因多态性与持续不卧床腹膜透析患者容量状况的相关研究

目的探讨NPPA基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与持续不卧床腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis,CAPD)患者容量状况的相关性。方法选取2017年1月至2019年1月在广西医科大学第二附属医院肾内科规律随访的CAPD患者,收集相关临床资料。DNA直接测序法得到基因型结果。分析NPPA rs198358 SNP与CAPD容量指标的关系。结果60例资料完整CAPD患者中,年龄(43.40±13.78)岁,腹透龄(20.10±17.79)个月。NPPA rs198358基因型及等位基因频率在高血压组和非高血压组比较差异有统计学意义,AA型有更高舒张压、BMI和血脑钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP)水平,AA型的腹膜转运类型以高平均转运为主。rs198358 AA型携带与舒张压、BMI、NT-proBNP水平相关。结论NPPA rs198358 AA型CAPD患者更容易有高血压及高平均转运的腹膜类型,NPPA rs198358与CAPD患者舒张压、BMI及NT-proBNP水平相关,NPPA基因多态性与CAPD容量评估指标有一定相关性。

NPPA基因多态性与相关易感疾病的研究进展

人类心房钠尿肽前体A基因(NPPA)位于1号染色体,可编码钠尿肽前体(ANP),其基因多态性被发现与原发性高血压、房颤、中风等多种疾病的易感性存在关联。近年来大量学者对NPPA基因多态性与多种疾病的易感性发生开展相关研究,并深入分析了其作用机理,本文拟对此做一综述。

长链非编码RNA NPPA-AS1通过靶向miR-372-3p调控结直肠癌SW480细胞的增殖和凋亡

目的探讨长链非编码RNA NPPA-AS1(lncRNA NPPA-AS1)对结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法选取南方医科大学附属花都医院和湖北医药学院附属人民医院2017年1月至2019年1月期间的30对结直肠癌组织及匹配的癌旁组织;将结直肠癌细胞(SW480细胞)进行体外培养并单独或者联合转染pcDNA-3.1载体(pcDNA)、miRNA抑制剂阴性对照(anti-miR-NC)、NPPA-AS1过表达载体(pcDNA-NPPA-AS1)、miR-372-3p抑制剂(anti-miR-372-3p)、miRNA模拟物阴性对照(miR-NC)和miR-372-3模拟物(miR-372-3p)以构建pcDNA组、pcDNA-NPPA-AS1组、anti-miR-NC组、anti-miR-372-3p组、pcDNA-NPPA-AS1+miR-NC组和pcDNA-NPPA-AS1+miR-372-3p组;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证lncRNA NPPA-AS1和miR-372-3p的表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)比较细胞活力;蛋白质印迹法比较蛋白表达;流式细胞术比较凋亡情况。结果结直肠癌的lncRNA NPPA-AS1对比癌旁组织表达更低,但miR-372-3p对比癌旁组织表达更高(P<0.05);过表达lncRNA NPPA-AS1显著降低SW480细胞的活力,使细胞的凋亡率增加,并降低了B淋巴细胞瘤/白血病-2(B-cell lymphoma-2;Bcl-2)和cyclinD1的表达,提高了B淋巴细胞瘤/白血病2相关X蛋白(BCL2-associated x protein;Bax)和p21的表达(P<0.05)。lncRNA NPPA-AS1靶向调控miR-372-3p表达。抑制miR-372-3p显著降低SW480细胞的活力,使细胞的凋亡率增加,并降低了Bcl-2和cyclinD1的表达,提高了Bax和p21的表达(P<0.05)。上调miR-372-3p表达逆转了过表达lncRNA NPPA-AS1对SW480细胞的影响。结论过表达lncRNA NPPA-AS1通过靶向下调miR-372-3p表达调控结直肠癌SW480细胞的增殖及凋亡。

NPPA rs5067多态性在冠心病介入治疗后医院感染中的作用

目的探讨NPPA rs5067多态性在冠心病介入治疗(PCI)后医院感染发生中的作用。方法前瞻性纳入2020年3月-2022年3月哈励逊国际和平医院心血管内科收治的接受PCI治疗的冠心病患者863例作为研究对象,根据其治疗后是否发生医院感染分为感染组(n=56)和非感染组(n=807),分析感染组患者的感染部位和病原菌分布情况,并通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测感染组患者NPPA rs5067基因位点多态性,通过单因素和多因素分析影响冠心病患者介入治疗后发生医院感染的相关因素。结果本研究中56例冠心病患者术后发生感染,感染率为6.49%,感染类型以上、下呼吸道感染为主。感染病原菌以革兰阴性菌为主,其中肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和鲍氏不动杆菌是主要的革兰阴性菌类型。感染组NPPA基因rs5067位点TT基因型频率和T等位基因频率均较非感染组高(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,年龄偏高、合并糖尿病、心功能≥Ⅲ级、住院时间较长及携带TT基因型和T等位基因等因素均是影响冠心病患者介入治疗后发生感染的独立危险因素(P<0.05)。TT组hsmiR-205、YKL-40、HMBG1水平均较CC/CT组高(P<0.05)。结论接受介入治疗后的冠心病患者发生医院感染的风险较高,风险因素较多,其中存在NPPA rs5067基因突变的冠心病患者发生感染的风险较大。

转录因子Tbx5a与Nkx2.5结合共激活nppa启动子的初步分析

心脏是脊椎动物发育过程中最早形成的重要器官之一,而先天性心脏病(先心病)是常见的先天性畸形类疾病。其中,转录因子Tbx5突变是导致先心病心手综合征的重要原因,Nkx2.5与瓣膜缺失性先心病密切相关。本研究通过启动子构建探究心脏发育重要因子tbx5a与nkx2.5对下游基因nppa的调控作用。本研究通过PCR分别克隆了斑马鱼tbx5a与nkx2.5基因的全长序列1491 bp和957 bp,成功构建了pMEV-2×HA-tbx5a和pcDNA3.1-myc-nkx2.5表达载体。同时合成了斑马鱼nppa基因2014 bp的启动子序列,并构建了荧光素酶报告基因表达载体pGL3-nppa-luc。双荧光素酶报告基因检测(Luciferase)实验结果显示,转染pGL3-nppa-luc载体的293T细胞具有较空载组6.3倍的荧光素酶活性(p<0.001),表明该2014 bp的nppa序列具备其启动子活性。本研究进一步通过与nppa启动子分别转染tbx5a、nkx2.5及两者共转染的Luciferase实验发现,斑马鱼Tbx5a和Nkx2.5可以协同作用并激活基因nppa的表达12倍(p<0.001),表明Tbx5a与Nkx2.5结合对下游nppa具备显著上调作用。本研究为进一步揭示转录因子Tbx5a与Nkx2.5对nppa的调控及其在心脏发育中的作用奠定了基础。同时,本研究成功构建具备活性的斑马鱼nppa启动子,对研究其心脏发育相关信号通路的调控机制具有重要意义。

PCBP2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生中的作用

目的 探讨PCBP2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生过程中的作用.方法 选取8～10周龄的雄性C57BL/6小鼠20只,体重23～28 g,随机分为2组,每组各10只,分别施以主动脉缩窄术（TAC组）和假手术（Sham组）.术后4周应用超声心动图评价小鼠的心脏功能,应用心脏重量与体重之比（HW/BW）定量评价心肌肥厚程度.Real-time PCR检测心肌肥厚标志物Nppa、β-MHC （Myh7）的mRNA水平,同时检测PCBP2 mRNA水平.Western blot方法检测Nppa、β-MHC及PCBP2的蛋白水平.比较分析两组之间的差异.结果 与Sham组相比,TAC组小鼠的心肌肥厚程度明显增加[TAC组（8.23±1.88）mg/g比Sham组（4.89±0.68）mg/g],左心室射血分数[TAC组（41.38±2.22）％比Sham组（59.15±3.58）％]及短轴收缩率[TAC组（33.61±0.92）％比Sham组（43.87±1.37）％]明显降低（P＜0.05）.TAC组的心肌肥厚标志物Nppa、β-MHC的mRNA水平及蛋白水平均明显高于Sham组（P＜0.05）.然而,TAC组PCBP2mRNA水平及蛋白水平却明显低于Sham组（P＜0.05）,与心肌标志物Nppa、β-MHC的变化趋势相反.结论 PCBP2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生过程中起着负性调节作用,上调PCBP2表达可能会抑制心肌肥厚的发展.

Meis1在心肌肥厚中的负性作用

目的通过检测来自肥厚型心肌病患者、小鼠心肌肥厚模型和体外诱导心肌细胞肥大的标本,探讨Meis1在心肌肥厚发生过程中的作用.方法2015年1月至2018年6月,分别获取肥厚型心肌病患者、小鼠心肌肥厚模型和体外诱导心肌的标本,以室壁瘤患者、小鼠假手术组和加入生理盐水培养的心肌细胞为对照组,通过Real-time PCR检测心肌肥厚标志物Nppa和β-MHC(Myh7) mRNA水平,同时检测Meis1mRNA水平.Western blot方法检测Nppa、β-MHC及Meis1的蛋白水平.比较分析与对照组之间的差异.结果三种模型来源的标本中Nppa和Myh7的mRNA和蛋白表达均明显增加(P<0.05),同时Meis1的mRNA和蛋白水平则低于对照组(P<0.05).Meis1与Nppa、Myh7表达的变化呈相反趋势,表明Meis1在心肌肥厚的发生过程中起着负性调节作用.结论 Meis1在心肌肥厚发生过程中起着负性调节作用,上调Meis1表达可能会抑制心肌肥厚的发展.

经典Wnt/β-catenin/TCF7L2信号通路在1型糖尿病心肌病中的作用

目的 探讨Wnt/β-catenin/TCF7L2信号通路在1型糖尿病小鼠心肌病中的作用。方法利用7~8周龄♂C57BL/6小鼠腹腔注射链脲佐菌素,建立1型糖尿病模型,糖尿病小鼠成模4周后,随机分为糖尿病组、β-catenin通路抑制剂iCRT14(2.5、5 mg·kg^-1)组。连续腹腔给药8周后,HE染色检测心脏细胞形态;免疫组化及Western blot检测β-catenin、TCF7L2蛋白表达;荧光定量PCR检测β-catenin、Tcf7l2、Nppa、c-Myc mRNA表达。结果糖尿病组心肌细胞排列相对紊乱、细胞核大小不规则;Western blot和免疫组化结果显示,糖尿病组小鼠心脏β-catenin、TCF7L2表达升高,心肌细胞核内β-catenin、TCF7L2表达明显增多;qPCR显示,β-catenin/TCF7L2通路下游基因c-Myc、心肌肥大基因Nppa表达上调。iCRT14组小鼠心肌细胞排列相对规则,形态趋于正常;β-catenin、TCF7L2蛋白表达降低,核内表达减少;肥大基因Nppa、下游基因c-Myc mRNA表达明显减低。结论 Wnt/β-catenin/TCF7L2通路活化在糖尿病心肌病发生、发展中发挥重要作用,β-catenin抑制剂能明显减缓1型糖尿病小鼠心肌病的进程。