猪瘟病毒N^(pro)基因的克隆表达

为了得到一个表达Npro蛋白的真核表达载体,从而为下一步研究不同时间段细胞主要组织相容性复合体(MHC)表达的变化情况,从分子水平上说明Npro与MHC之间的关系,本研究应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对猪瘟病毒石门毒株Npro基因进行了克隆和测序,结果得到了长度为592 bp的目的片段。用BamHⅠ和XhoⅠ限制性内切酶分别对重组克隆质粒和转移载体pcDNA3.0进行双酶切,回收目的基因DNA片段,将目的基因Npro亚克隆至真核转移载体pcDNA3.0中,经双酶切和序列测定鉴定插入基因和连接方向正确,得到含完整Npro基因的重组载体质粒P-Npro。构建成功的真核表达载体以脂质体介导的转染方法将此重组载体质粒转染PK-15细胞,转染24和48 h后检测表达情况。经Western-blot方法检测表明,此Npro蛋白在PK-15细胞中正确表达。

新疆南疆地区某规模牛场牛病毒性腹泻病毒检测及基因分型

为掌握新疆南疆某规模牛场牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染的基因型,将该规模牛场所采集的血清样本经BVDV抗原ELISA检测阳性后作为PCR检测样本,针对BVDV基因组中5′-UTR、N^(pro)基因设计特异性引物,进行RT-PCR扩增,然后将目的基因进行测序、BLAST比对和序列分析,并构建系统发育树。结果显示,该规模牛场4份样本皆为BVDV-1c型。本研究结果为南疆规模牛场制定科学合理的牛病毒性腹泻防控措施以及选择相应疫苗提供了理论参考。