IBV HH06株N基因原核表达及间接ELISA方法的建立

鸡传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis,IB)是由传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种急性、高度接触性传染病。试验根据NCBI发表的IBV基因序列设计引物,利用RT-PCR方法扩增病毒的N基因,并将其导入pET-30a(+)载体中,构建原核表达质粒。SDS-PAGE及Western-blot检测结果表明,重组蛋白得到表达并能与IBV阳性血清有很好的反应性。以纯化后的重组蛋白作为包被抗原,在包被量为2.5μg·mL-1、血清1??40倍稀释条件下,建立并优化间接ELISA检测方法。临床样品检测表明,该方法可高效检测出IBV抗体,并与IBV病毒作为包被抗原ELISA检测结果一致,为IB的快速诊断及流行病学研究奠定基础。