探讨Keap1/Nrf-2信号通路在胃癌发展和治疗中的作用

胃癌是目前最常见的恶性肿瘤之一,其死亡率一直居高不下。我国作为胃癌患病的高发国家,其发病率及死亡率均居世界前列[1]。由于早期胃癌症状的隐匿性,使得确诊胃癌经常发生在晚期阶段,为治疗带来难题。晚期胃癌的传统治疗手段包括手术,放、化疗,疗效不理想,不良反应大,而新兴的生物免疫学治疗又缺乏临床应用[2]。随着分子靶向治疗成为研究热点,相关信号通路对于胃癌的作用研究有望成为胃癌治疗的突破口。

百里醌通过Nrf-2/HO-1通路对PD模型小鼠神经元ferroptosis的保护机制研究

目的:研究中药百里醌(Thymoquinone,TQ)对MPTP诱导的帕金森病(Parkinson Disease,PD)小鼠模型神经元损伤的保护作用,并探讨其可能机制。方法:以MPTP构建PD小鼠模型,分别给予以百里醌10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg给药7d,采用透射电镜观察神经元线粒体形态变化,ELISA法检测氧化应激指标硝基酪氨酸(Nitrotyrosine,NT)、8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG)、GSH,western bloting检测Nrf-2/HO-1通路及ferroptosis通路相关蛋白表达。结果:透射电镜结果显示模型组线粒体严重肿胀,空泡化,腔内出现周边不清絮状物,嵴断裂、减少;TQ 10mg组线粒体肿胀,大部分局部空泡化,嵴断裂、减少;TQ 20mg组线粒体中重度肿胀,大部分局部空泡化,嵴断裂、减少;TQ 40mg组线粒体轻微肿胀、部分嵴断裂,少数中重度肿胀,局部空泡化。ELISA检测结果显示,与正常组比较MPTP可显著增加PD模型小鼠脑内NT、8-OHdG含量,减少GSH含量,同时引起FT、FTR的蓄积,TQ治疗可剂量依赖性降低PD模型小鼠脑内NT、8-OHdG含量,升高GSH含量,同时减少FT、FTR的蓄积。western bloting结果显示,PD模型小鼠较正常组小鼠脑内Nrf-2、HO-1、NQO-1、FTH-1蛋白表达显著降低,Keap-1含量最高,百里醌可剂量依赖性上调PD模型小鼠脑内Nrf2、HO-1、NQO-1、FTH-1蛋白表达,抑制Keap-1蛋白的表达。结论:百里醌可以通过激活Nrf-2/HO-1通路抑制ferroptosis,调控氧化应激损伤,进而发挥神经保护作用,延缓PD的进程。

芒果苷通过Nrf-2/HO-1/HMGB1/NF-κB通路减轻链脲佐菌素诱导的大鼠视网膜病变的机制探讨

目的:探讨芒果苷对链脲佐菌素(STZ)诱导的大鼠视网膜病变的影响。方法:采用1%STZ腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。采用酶联免疫吸附法检测血清和视网膜组织细胞因子水平,并采用试剂盒测量口服葡萄糖耐量(OGTT),以及血清和视网膜组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。采用苏木精伊红染色法(HE)染色评价视网膜组织病理变化。Western blot检测糖尿病大鼠视网膜组织核因子相关因子2(Nrf-2)及其下游信号通路的变化。结果:芒果苷可显著改善糖尿病大鼠OGTT,增加血清和视网膜组织中的SOD,降低MDA水平。芒果苷还可显著降低糖尿病大鼠的血清和视网膜组织细胞因子水平,调节视网膜组织中Nrf-2、血红素加氧酶-1(HO-1)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)和核转录因子-κB(NF-κB)蛋白的表达。结论:芒果苷可能通过Nrf-2/HO-1/HMGB1/NF-κB通路改善STZ诱导的大鼠视网膜组织视网膜病变、氧化应激和炎性反应。

大黄素对急性有机磷农药中毒致肺损伤大鼠肺组织Nrf-2/ARE信号通路的影响

目的探讨大黄素对急性有机磷农药中毒(AOPP)大鼠肺损伤的影响,及其对肺组织核因子相关因子2/抗氧化反应元件(Nrf-2/ARE)信号通路的作用。方法取36只健康雄性SD大鼠构建急性有机磷农药中毒致肺损伤模型,随机分为急性有机磷农药中毒模型组(AOPP组)和大黄素干预组(大黄素组),18只/组,另取18只健康雄性SD大鼠作为健康对照组。分批处死大鼠,通过HE染色观察大鼠肺组织病理改变;测量肺组织湿干质量比(W/D);采用比色法检测肺组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;采用Western blot检测肺组织Nrf-2,血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白表达。结果氧乐果染毒后AOPP组大鼠肺组织湿干质量比显著增加,大黄素组在24 h、72 h时肺组织湿干质量比显著低于AOPP组(P<0.05);AOPP组各时间点MDA水平较健康对照组明显升高(P<0.05),大黄素组各时间点MDA水平较AOPP组显著降低(P<0.05),在72 h时与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),AOPP组和大黄素组肺组织SOD、GSH-Px活力在各时间点较健康对照组显著降低(P<0.05),大黄素组各时间点SOD、GSH-Px活力明显高于AOPP组(P<0.05);AOPP组和大黄素组24 h、72 h时Nrf-2和HO-1蛋白表达上调,与AOPP组比较,大黄素组24 h、2h时Nrf-2和HO-1蛋白表达上调(P<0.05)。结论大黄素可能通过调节Nrf-2/ARE信号通路促进HO-1蛋白表达,降低有机磷中毒大鼠MDA生成,并提高SOD、GSH-Px活力发挥保护肺损伤作用。

红景天苷通过Nrf-2/HO-1信号通路促进脊髓损伤大鼠神经修复

目的:研究红景天苷(Sal)对大鼠脊髓损伤(SCI)的修复作用及分子机制。方法:36只成年雄性SD大鼠分为3组:分别是假手术组(Sham)、脊髓损伤组(SCI)和红景天苷治疗组(SCI+Sal),利用撞击法制备大鼠SCI模型,SCI+Sal组大鼠通过腹腔注射红景天苷治疗7 d,利用BBB评分检测各组大鼠的脊髓功能,利用商品化试剂盒检测脊髓组织中过氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)的含量,利用Western Blot检测脊髓组织中Nrf-2和HO-1的表达。结果:SCI组大鼠脊髓功能受损明显,损伤脊髓组织中SOD活性下降,MDA水平增加,Nrf-2和HO-1蛋白表达增加;经过Sal治疗,SCI大鼠脊髓组织SOD活性增加,MDA降低,同时,Nrf-2和HO-1蛋白表达进一步增加。结论:Sal通过Nrf-2/HO-1信号通路降低SCI大鼠脊髓部位氧化应激,促进损伤修复。

柚皮素通过增强NRF-2/HO-1信号活性减轻实验性妊娠高血压模型大鼠的肾损伤

目的探讨柚皮素(naringenin,Nar)对妊娠高血压综合征(pregnancy-induced hypertension syndrome,PIH)肾损伤的影响,并分析其相关的机制。方法在妊娠第8—20 d每天腹腔注射50mg/kg L-NAME,诱导PIH模型;在妊娠第8—20 d,每天口服200 mg/kg Nar作为Nar对照,每天腹腔注射50 mg/kg L-NAME的同时口服200 mg/kg Nar作为PIH的Nar治疗。在妊娠第1、8、12、14、16、18和20 d监测大鼠收缩压。ELISA法检测妊娠第20 d的尿白蛋白和肌酐含量,并计算尿白蛋白排泄率和肌酐清除率。在妊娠第21 d,处死大鼠并收集肾组织,用HE、PAS和Masson染色观察肾组织病理学,评估组织学损伤、肾小球硬化和肾小管间质纤维化严重程度,生化法测定肾组织中MDA、CAT和GSH含量,TUNEL染色以及Cleaved Caspase-3、Bcl-2和Bax免疫组织化学染色评估肾组织凋亡情况;免疫组织化学染色评估肾组织中NRF-2和HO-1表达。结果在PIH大鼠,Nar虽不影响收缩压,但能降低尿白蛋白排泄率和增加肌酐清除率,抑制肾小管上皮细胞凋亡,改善肾小球硬化和肾小管间质纤维化,降低氧化应激水平,并增强肾组织中NRF-2/HO-1活性。结论柚皮素可能通过降低氧化应激水平抑制PIH大鼠的肾损伤。

褪黑素通过Nrf-2途径抑制高铁诱导成骨细胞的凋亡

目的探讨Nrf-2途径在褪黑素抑制高铁诱导成骨细胞凋亡中的作用。方法用细胞贴壁法培养成骨细胞(h FOB1.19)后,将枸橼酸铁铵(400μmol/L)和褪黑素(100μmol/L)加入细胞培养基,培养24 h后,Annexin V-FITC/PI流式细胞学检测细胞凋亡水平;DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS水平;Western blot检测凋亡相关蛋白线粒体内Bax和caspase-3,以及Nrf-2途径相关蛋白Nrf-2和HO-1。结果高浓度枸橼酸铁铵干预成骨细胞后,与对照组相比,细胞内ROS水平增高,枸橼酸铁铵处理后凋亡增加,凋亡相关蛋白,线粒体内Bax表达增加,caspase-3表达增加,同时,Nrf-2途径相关蛋白Nrf-2及HO-1表达增加。而褪黑素可以进一步增加细胞内的Nrf-2及HO-1水平,同时降低细胞内ROS水平,细胞凋亡率和凋亡相关蛋白表达明显降低。结论褪黑素可以通过Nrf-2途径抑制成骨细胞的氧化应激水平,从而降低高铁引起的成骨细胞凋亡。

咖啡酸苯乙酯通过Nrf-2途径抑制地塞米松诱导的成骨细胞凋亡

目的探讨Nrf-2途径在咖啡酸苯乙酯(CAPE)抑制地塞米松(DEX)诱导成骨细胞凋亡中的作用。方法用细胞贴壁法培养小鼠颅顶前骨细胞(MC3T3-E1),采用10μmol/L DEX建立细胞损伤模型,以不同浓度CAPE(0.05、0.25、1μmol/L)预处理细胞2 h后加入地塞米松共孵育24 h;细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活性;依据CCK-8检测结果确定药物浓度后将实验分为对照组、咖啡酸苯乙酯组(CAPE组)、地塞米松组(DEX组),咖啡酸苯乙酯+地塞米松组(CAPE+DEX组);DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3酶活性,Western blot法检测Nrf-2途径相关蛋白Nrf-2和血红素氧合酶1(heme oxygenase,HO-1)蛋白表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 10μmol/L DEX作用下细胞形态发生明显变化,损伤作用明显。与对照组相比,DEX组内细胞存活率显著下降(P<0.01),而细胞内ROS水平、细胞凋亡率及Caspase-3酶活性显著增加(P<0.01);同时,Nrf-2途径相关蛋白Nrf-2及HO-1表达量减少,差异有统计学意义(P<0.01)。与DEX组相比,CAPE+DEX组细胞存活率显著上升(P<0.01),Nrf-2途径相关蛋白Nrf-2及HO-1表达明显增加(P<0.01);此外,CAPE+DEX组细胞内ROS水平、细胞凋亡率及Caspase-3酶活显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论咖啡酸苯乙酯可以通过Nrf-2途径降低细胞内ROS水平进而减轻地塞米松诱导的氧化应激所致细胞损伤及凋亡。

川芎嗪通过AMPK/NF-κB和Nrf-2/HO-1途径减轻过敏性气道炎症和氧化应激的实验研究

目的本研究旨在探讨川芎嗪对过敏性炎症反应和氧化应激的影响,并探讨其机制是否与AMPK/NF-κB和Nrf-2/HO-1信号通路有关。方法用组织化学染色来观察小鼠肺组织病理学改变;小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中炎症细胞数量用Diff-quik染色法检测;用ELISA法检测BALF中各种细胞因子和IgE的含量以及SOD,CAT活性和MDA表达水平;免疫荧光法检测p-AMPK和NF-κBp65在肺组织中表达水平;免疫组化法检测Nrf-2和HO-1在肺组织中表达水平;肺中的AMPK、p-AMPK、NF-κBp65、Nrf-2和HO-1蛋白进行定量分析采用Westernblot方法。结果哮喘小鼠模型中,川芎嗪可减少炎症细胞的渗出和浸润,抑制杯状细胞增生。川芎嗪治疗后,哮喘小鼠BALF中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-13和IgE等蛋白表达水平明显降低,而干扰素-γ(IFN-γ)的表达增高。川芎嗪治疗后可使哮喘小鼠BALF中SOD和CAT活性升高,而MDA表达水平降低。川芎嗪也可降低OVA诱导哮喘小鼠NF-κBp65的表达,增加p-AMPK、Nrf-2和HO-1的表达。结论川芎嗪可以改善哮喘小鼠气道炎症反应和氧化应激,其机制可能与AMPK/NF-κB和Nrf-2/HO-1信号通路有关。

蒙古黄芪多糖对NAFLD大鼠肝脏Nrf-2-ARE信号通路的调控作用研究

本研究旨在探究蒙古黄芪多糖(Mongolian astragalus polysaccharides,mAPS)对大鼠(Rattus norregicus)非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的改善作用及其机制。将50只雄性SD大鼠随机分为5组,即空白对照组(Ctrl组)、蒙古黄芪多糖对照组(mAPS组)、高脂饮食模型组(HFD组)、蒙古黄芪多糖治疗组(HFD+mAPS组)和黄连素阳性药物组(HFD+BER组),构建NAFLD大鼠模型;检测NAFLD大鼠血清血脂相关指标和转氨酶指标;HE染色观察NAFLD大鼠肝脏组织病理学表现;RT-qPCR和Western blot检测NAFLD大鼠肝脏及结肠的Nrf-2-ARE信号通路相关基因的mRNA和蛋白水平。结果表明,mAPS能显著降低NAFLD大鼠血清中三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的水平(P<0.05或P<0.01)。与Ctrl组相比,HFD组大鼠的肝脏出现脂肪空泡和炎性细胞聚集等现象,mAPS可以改善高脂饮食诱导的NAFLD大鼠肝脏损伤。通过RT-qPCR对NAFLD大鼠肝脏核因子E2相关因子2-抗氧化反应元件(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2-antioxidant response element,Nrf-2-ARE)信号通路相关基因进行检测发现,与Ctrl组相比,核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf-2)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate cysteine ligase catalytic subunit,GCLC)的mRNA表达在HFD组中显著下降(P<0.01),mAPS治疗后,以上基因的mRNA水平明显增高(P<0.05或P<0.01)。对NAFLD大鼠肝脏和结肠的Nrf-2-ARE信号通路相关基因在蛋白水平进行检测,发现其同mRNA水平结果一致。研究结果说明mAPS可以改善NAFLD大鼠的脂质代谢异常,对NAFLD大鼠的肝脏起到保护作用并改善肝脏组织病理学表现,也可能通过Nrf-2-ARE信号减轻NAFLD大鼠的肝脏和结肠的氧化应激。。

缺血性脑卒中基于Nrf-2/HO-1上调Mfsd2a表达缓解BCFB损伤研究

目的 探究Nrf-2/HO-1信号通路调节的Mfsd2a表达在缺血性脑卒中(IS)引起的血-脑脊液屏障(BCFB)破坏中的作用。方法 45只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组,脑缺血组,脑缺血+BARD组。取非假手术组大鼠,参考Longa法构建IS模型,取脑缺血+BARD组大鼠立即尾静脉注射2.0mg·kg^(-1) BARD。24 h后开展神经功能评估,之后分别检测大鼠脑梗死体积,BCFB通透性,脑水肿程度,最后采用免疫荧光和Western blot检测各个蛋白表达。结果 IS造成大鼠神经功能评分增加,脑组织出现梗死区域,BCFB通透性与脑水肿程度增加。与脑缺血组相比,BARD下调了大鼠神经功能评分,减少了梗死体积,降低了BCFB通透性与脑水肿程度。分子水平上,BARD治疗进一步激活了Nrf-2/HO-1信号通路,增加了Mfsd2a表达。与此同时,BARD干预逆转了IS造成的BCFB紧密连接蛋白Claudin-5、ZO-1与VEcadherin表达降低。结论 Nrf-2/HO-1信号通路激活介导Mfsd2a表达增加,促进了BCFB修复,减轻了脑水肿与脑梗死,改善了IS大鼠神经功能损伤。

AFB1抑制NrF2信号通路诱导牛乳腺上皮细胞抗氧化应激

利用不同浓度的黄曲霉毒素B1(aflatoxinB1,AFB1)作用于牛乳腺上皮细胞(MAC-T)培养24 h后,通过相关检测试剂盒检测细胞内氧化损伤标志物活性氧(reacive oxygen species,ROS)、总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、总抗氧化能力(total antioxidation capability,T-AOC)的活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerasechain reaction,RT-qPCR)方法检测核因子E2相关因子(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,NrF2)、血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和NAD(P)H醌氧化还原酶(NAD(P)H quinone oxidoreductase 1,NQO-1)的mRNA相对表达水平;利用蛋白免疫印迹(Western blot)试验检测NrF-2、HO-1和NQO-1的蛋白相对表达水平。结果显示,与0μmol/L相比,10,20μmol/L AFB1处理组显著升高MAC-T细胞内ROS和MDA的含量,降低SOD、T-AOC和GSH-Px的活性。RT-qPCR结果显示,与0μmol/L组相比,不同浓度AFB1组显著下调MAC-T细胞中NrF2、HO-1、NQO-1的mRNA表达水平。Western blot结果显示,10μmol/L AFB1组MAC-T细胞中NrF2、HO-1、NQO-1的蛋白表达水平显著低于0μmol/L组。结果表明,AFB1通过抑制NrF2信号通路诱导牛乳腺上皮(MAC-T)细胞发生氧化应激性损伤。

三七皂苷R1调控AMPK/Nrf-2/HO-1信号通路缓解冠心病大鼠心肌损伤的研究

目的研究三七皂苷R1对冠心病模型大鼠心肌损伤的作用及机制。方法将大鼠随机分为对照组,模型组,三七皂苷R1低、中、高剂量组,每组9只;采用饲喂高脂饲料联合垂体后叶注射液腹腔注射的方法建立冠心病大鼠模型;三七皂苷R1低、中、高剂量组分别灌胃给予50,100和200 mg·kg^-1的三七皂苷R1,每天给药1次,连续4周。HE染色观察心肌损伤,Western blotting检测活化的半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、半胱氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的表达水平,测定平均动脉压、心率和左室收缩压水平,ELISA检测心损标记肌红蛋白(myoglobin,Mb)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isozyme,CK-MB)和肌钙蛋白(cardiac troponin,cTnI)表达水平及炎症因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)含量,试剂盒检测心肌细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)表达水平,Western blotting检测腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activeted protein kinase,AMPK)的磷酸化及转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)、血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)表达水平。结果三七皂苷R1能降低冠心病大鼠心肌损伤程度,抑制心肌凋亡蛋白caspase-3、caspase-9的活化(P<0.05),上调心脏功能指标平均动脉压、心率和左室收缩压水平(P<0.05),抑制心损标记物CK-MB、cTnI和Mb高表达(P<0.05),降低氧化应激指标SOD、GSH、LDH和MDA的含量(P<0.05),抑制炎症因子IL-6、IL-1β、iNOS和TNF-α含量表达上调(P<0.05),上调AMPK/Nrf-2/HO-1信号通路蛋白的表达(P<0.05)。结论三七皂苷R1能改善冠心病大鼠心肌损伤,抑制心肌细胞凋亡、氧化应激、炎症反应,这与调控AMPK/Nrf-2/HO-1信号通路激活有关。

补肾活血方对脊髓损伤大鼠脊髓的修复作用及其机制研究

目的探讨补肾活血方对脊髓损伤大鼠脊髓的修复作用及其机制。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组和补肾活血方低、高剂量组(6、18 g/kg)。采用Allen’s法制备脊髓损伤大鼠,造模第2天给药组灌胃给予相应剂量药液,假手术组和模型组灌胃给予纯水,连续28 d。于术后不同时间点观察大鼠后肢运动功能并进行BBB评分,并在术后第14、28天进行大鼠足印实验;术后第14天使用相应试剂盒检测脊髓组织SOD活性与MDA水平,Western blot法检测脊髓组织Nrf2、NQO-1、HO-1、Bcl-2、Bax蛋白表达;术后第28天采用HE染色和Nissl染色观察脊髓组织的变化,采用免疫荧光染色检测NeuN、GFAP的表达。结果与模型组比较,补肾活血方高剂量组大鼠后肢功能、脊髓组织形态学均有改善(P<0.05),脊髓组织SOD活性、NeuN荧光强度和Bcl-2、NQO1、HO-1、Nrf2蛋白表达升高(P<0.05),MDA水平、GFAP荧光强度和Bax蛋白表达降低(P<0.05)。结论补肾活血方可以有效减轻脊髓损伤大鼠早期的脊髓损伤,其机制一方面可能是通过抑制Nrf2/HO-1/NQO1信号通路抑制脊髓组织氧化应激反应,减少神经细胞凋亡;另一方面通过抑制星形胶质细胞的活性,解除胶质瘢痕引发的屏障,提高神经再生能力,使脊髓组织的修复能力增加。

芒果苷对心肌梗死后慢性心衰大鼠的保护作用及对Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的探讨芒果苷对心肌梗死后慢性心衰大鼠炎症反应和氧化应激的影响及对Nrf-2/HO-1信号通路的影响。方法50只大鼠随机分为假手术组(sham)、心肌梗死后慢性心衰大鼠模型组(MI)、芒果苷低剂量组(MFL)、芒果苷中剂量组(MFM)及芒果苷高剂量组(MFH),每组10只。采用结扎大鼠冠状动脉导致急性心肌梗死制备慢性心衰大鼠模型,利用超声检测各组大鼠心功能;HE染色检测心肌组织病理学改变;ELISA检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫荧光检测心肌组织ROS水平;检测大鼠心肌组织中超过氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;Western blot检测Nrf-2/HO-1信号通路相关蛋白Nrf-2及HO-1表达情况。结果芒果苷中、高剂量组大鼠心功能明显改善;心肌组织结构改善;IL-6、IL-1β及TNF-α水平降低;ROS水平降低,SOD活性明显升高,而MDA含量显著降低;同时,Nrf-2及HO-1蛋白表达进一步增加(P<0.05)。结论芒果苷能够降低心肌梗死后慢性心衰大鼠炎症反应及氧化应激,可能与激活Nrf-2/HO-1信号通路有关。

三七总皂苷对冠心病大鼠心肌的保护作用

目的 观察三七总皂苷(PNS)对冠心病(CHD)大鼠心肌损伤的保护作用,探究其作用机制。方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、PNS组、PNS+ML-385(Nrf-2抑制剂)组和ML-385组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠用高脂饲料喂养联合垂体后叶注射液腹腔注射建立CHD模型。连续给药治疗4周后,观察心肌组织损伤,检测血脂水平、心肌损伤指标、炎性因子及氧化应激因子的水平,RT-qPCR检测心肌半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA水平,Western blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf-2)和血红素加氧酶-1(HO-1)表达情况的改变。结果 与对照组比较,模型组大鼠心肌损伤明显,血脂水平异常,血清心肌损伤指标及炎性因子水平显著升高,氧化应激反应加重,心肌组织Caspase-3和Bax mRNA表达增加,Bcl-2 mRNA表达降低,Nrf2和HO-1蛋白表达水平降低(P<0.05)。与模型组比较,PNS可减轻CHD大鼠心肌损伤,调整血脂水平,减轻炎症和氧化应激反应,心肌组织Caspase-3和Bax mRNA表达降低,Bcl-2 mRNA表达增加,Nrf2和HO-1蛋白表达水平增加,而Nrf-2抑制剂ML-385可显著减弱PNS对CHD的治疗作用,抑制Nrf-2/HO-1信号通路的激活(P<0.05)。结论 PNS能够改善CHD大鼠心肌损伤,其机制可能与调控Nrf-2/HO-1信号通路的激活有关。

木犀草素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的神经保护作用

目的:探究木犀草素(Lut)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠是否具有神经保护作用及其作用机制。方法:将7日龄新生大鼠分为假手术组、模型组(HIBD组)和Lut治疗组(HIBD+Lut组)。用Rice-Vannucci法建立新生大鼠HIBD模型。HIBD+Lut组在造模后即刻通过腹腔注射给予50 mg/kg Lut,连续3 d,模型组和假手术组同时腹腔注射等体积生理盐水。3 d后,用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评估脑梗死范围;用干/湿重脑含水量法评估缺血脑半球的脑水肿情况;用苏木精-伊红(HE)染色以及原位末端转移酶标记(TUNEL)和神经元核抗原(NeuN)荧光双标共定位法观察缺血脑半球海马和皮质中神经元损伤情况;用商用试剂盒检测缺血脑半球中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)水平;用Western blot法检测缺血脑半球的海马和皮质中核因子E2相关因子2(NRF-2)和血红素加氧酶1(HO-1)的蛋白表达水平。取35日龄大鼠,用水迷宫实验评估大鼠的认知功能情况。结果:与假手术组比较,HIBD组大鼠脑梗死、脑水肿、海马和皮质中神经元损伤均显著增加(P<0.05或P<0.01);而Lut治疗显著改善了HIBD大鼠的上述情况(P<0.05或P<0.01)。同时,Lut逆转了HIBD导致的缺血脑半球中SOD、CAT和GSH-Px活性降低和MDA水平升高(P<0.05或P<0.01)。Western blot结果显示,与假手术组比较,HIBD组缺血半球脑海马和皮质中NRF-2和HO-1的蛋白表达水平均增加(P<0.05或P<0.01);Lut治疗进一步增加了HIBD大鼠缺血半球海马和皮质中NRF-2和HO-1的蛋白表达水平(P<0.01)。结论:Lut可能通过抗氧化作用减轻HIBD新生大鼠脑梗死、脑水肿及皮质和海马CA1区神经元损伤,改善后期的认知功能。

虫草素对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用

本文探究蛹虫草活性成分虫草素对四氯化碳(CCl4)造成的小鼠急性肝损伤的保护作用及其分子机制。首先建立四氯化碳致小鼠急性肝损伤的动物模型,通过检测血清生化指标、肝功指标的变化及HE染色观察组织切片病理的病变情况,评价虫草素的保肝效果,进一步通过Western blot检测虫草素能否通过激活Nrf-2/Keap1信号通路及其下游抗氧化因子(HO-1、NQO-1)的表达来提高机体抗氧化损伤能力以及抑制炎症因子(TNFα、TNFβ、IL-6、IL-10)的表达。对比模型组结果显示,虫草素能极显著降低(P<0.01)小鼠血清中ALT、AST及肝脏中MDA水平,并能极显著提高肝脏中SOD水平(P<0.01);HE染色结果显示虫草素能有效降低改善受损肝组织中的炎细胞浸润及纤维组织增生;Western blot结果表明虫草素能够通过激活Nrf-2信号通路,促进下游抗氧化因子及抗炎因子的表达,从而降低炎症反应。虫草素对CCl4致小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用,其机制与Nrf-2信号通路相关,实验结果为后续蛹虫草及虫草素的开发应用奠定基础。

松果菊苷在肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用及机制研究

目的探讨松果菊苷预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法SD大鼠40只随机分为假手术组、模型组、松果菊苷低、高浓度治疗组,模型组、松果菊苷低、高浓度治疗组采用阻断部分肝血供的方法建立肝脏缺血再灌注损伤模型。HE染色观察肝组织病理学变化;试剂盒测定丙二醛(MDA)活性及超氧化物歧化酶(SOD)水平;酶联免疫吸附实验分析丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量;免疫印迹法分析HO-1、Nrf-2蛋白的表达含量。结果HE结果显示,松果菊苷低、高浓度组肝损伤程度较模型组明显改善;与模型组比较,松果菊苷低、高浓度组大鼠肝脏组织中MDA含量下降,SOD活性升高,差异均有统计学意义(P<0.05);松果菊苷低、高浓度组大鼠ALT及AST活性下降,差异均有统计学意义(P<0.05);免疫印迹法结果显示,松果菊苷治疗组HO-1、Nrf-2蛋白的表达升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论松果菊苷可以通过激活Nrf-2信号通路减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤。

丹酚酸B对APP/PS1小鼠学习记忆及氧化应激的作用及可能机制

目的探讨丹酚酸B对APP/PS1转基因小鼠学习记忆能力、氧化应激水平及Nrf-2/HO-1信号通路的影响。方法将7月龄的APP/PS1小鼠随机分为模型组、丹酚酸B低剂量组(30 mg/kg)及丹酚酸B高剂量组(60 mg/kg),并取同龄C57BL/6小鼠作为对照组,每组10只,连续灌胃给药8周。Morris水迷宫观察各组小鼠学习与记忆能力;TUNEL染色检测小鼠海马区域细胞凋亡情况;试剂盒检测小鼠海马区域SOD、GSH-Px活性及MDA含量;Western Blot检测Nrf-2/HO-1信号通路相关蛋白Nrf-2、Keap-1及HO-1表达情况。结果丹酚酸B低、高剂量均能改善小鼠的学习与记忆能力,表现为小鼠逃避潜伏期明显缩短,目标象限停留时间延长,穿越平台次数相应增加,海马区域细胞凋亡数量显著降低(P<0.05),提高SOD及GSH-Px活性,降低MDA含量,上调细胞核中Nrf-2及HO-1蛋白表达,下调Keap-1蛋白表达(P<0.05)。结论丹酚酸B改善APP/PS1小鼠学习与记忆能力,降低氧化应激水平,与激活Nrf-2/HO-1信号通路相关。