NRAMP1基因D543N多态性与汉族脊柱结核的易感性

目的研究人类自然抵抗相关巨噬细胞蛋白1(NRAMP1)基因D543N多态性与汉族脊柱结核易感性的关系。方法选取汉族脊柱结核患者54例,正常对照60例,用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)的方法对NRAMP1基因D543N进行基因分型,根据基因型对样本分组,经统计学处理,研究D543N多态性与脊柱结核易感性的关系。结果在脊柱结核病患者中G/G基因型有32例(59.3%),G/A基因型有21例(38.9%),A/A基因型有1例(1.8%);健康对照组的G/G基因型为48例(80.0%),G/A基因型为11例(18.3%),A/A基因型有1例(1.7%)。两组间比较,具有显著性差异(P<0.05)。杂合子(G/A)等位基因在脊柱结核患者组高于健康对照组。结论NRAMP1基因D543N多态性可能是脊柱结核的遗传易感因素。

荷斯坦牛Nramp1基因遗传多态性及其与乳房炎相关性的研究

利用PCR-SSCP技术检测了344头中国荷斯坦牛Nramp1基因exon 11的基因多态性,并分析了其不同基因型与乳房炎及产奶量性状的关系。结果表明:实验群体发现3种基因型AA、AB、BB,其中A等位基因为优势等位基因,等位基因频率为0.767,而B等位基因频率则为0.233。经X^2适合性检验,群体处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。测序结果显示:扩增片段分别在200 bp(C/G)和254 bp(T/G)存在碱基突变,并导致了氨基酸改变,分别为丙氨酸替换为脯氨酸(A1a356Pro)、亮氨基酸替换为蛋氨酸(Leu374Met)。通过构建最小二乘线性模型,进行Nramp1基因多态性与产奶量、体细胞评分(SCS)的相关性分析表明,AA型个体的SCS最小二乘均值显著低于BB、AB型(P<0.05),而AA型、AB个体的产奶量最小二乘均值显著高于BB型(P<0.01,P<0.05),AA基因型可作为乳房炎抗性的优良基因型。因此,可将Nramp1作为奶牛乳房炎候选基因应用于分子标记辅助选择育种。

BCL10、Nramp1基因多态性与大白仔猪断奶前腹泻关联分析

为研究大白猪BCL10基因和Nramp1基因的单核苷酸多态性,并寻找与大白仔猪断奶前腹泻相关的分子标记,构建490头大白仔猪群体,对仔猪断奶前腹泻情况进行统计,利用PCR-RFLP法检测BCL10基因3′端1149T/C位点和Nramp1基因第六内含子NdeⅠ酶切位点多态性,同时与腹泻频率、腹泻指数和部分生长性状进行关联分析。结果显示:大白仔猪断奶前腹泻率为32.0%,重度腹泻个体的21日龄平均断奶重比正常个体低13.0%,日增重低16.2%,而且大白仔猪在7~11日龄和17~21日龄存在2个断奶前腹泻小高峰。仔猪腹泻粪便病原检测结果表明,22.5%的样本检出为沙门氏菌感染,17.5%的样本检出为致病性大肠杆菌感染。关联分析结果表明:BCL10基因多态性与初生重相关联(P<0.05),TT型个体初生重大于TC型个体,差异显著(P<0.05);BCL10基因多态性与腹泻频率、腹泻指数相关联,差异极显著(P<0.01),个体腹泻频率、腹泻指数均表现为TT>TC>CC,CC与TC之间差异显著(P<0.05),CC与TT之间差异极显著(P<0.01);Nramp1基因多态性与腹泻频率、腹泻指数相关联,差异极显著(P<0.01),个体腹泻频率、腹泻指数均为AA、AB型大于BB型,且AA型与BB型差异显著(P<0.05),AB型与BB型差异极显著(P<0.01)。研究结果表明,BCL10基因和Nramp1基因不同基因型对大白仔猪断奶前腹泻有显著影响,Nramp1基因与猪沙门氏菌感染导致的腹泻有关,BCL10基因3′端1149T/C位点和Nramp1基因第六内含子NdeⅠ酶切位点可以作为大白仔猪断奶前抗腹泻育种分子标记。

Association of polymorphisms of Nramp1 gene with immune function and production performance of large white pig

The present research was designed to study the association of polymorphism of natural resistance-associated macrophage proteinl （Nrampl） with some immune function and the production performance in Large White pig. The PCR-RFLP technique was applied to analyze the correlation between the polymorphisms of Nrampl gene and immune function [value of Polymorphonuclear Leukocytes （PMN） obtained by Nitroblue Tetrazolium （NBT） Reduction and effect of Cytotoxin in Monocyte] and production performance in 165 Large White pigs. The results showed that there was one Nde I restriction locus in Large White pig, and both values of PMN by NBT Reduction and effect of Cytotoxin in Monocyte in genotype BB were higher than those in genotype AB （P〈0.05）. Simultaneously, the weight of 180-day-old pigs with genotype BB was higher than that with genotype AB （P〈0.05）. The results indicated that there was a significant correlation between different genotypes of Nrampl gene and Immune function and production performance, and it can be regarded as a candidate gene of disease resistance. All these results provide valuable reference to further studies of pig disease resistance.

家兔组织器官中Nramp1基因表达差异研究

本研究旨在检测家兔Nramp1基因mRNA在不同组织中的表达水平,为进一步阐明家兔Nramp1基因的生物学功能提供有用的方法和信息。根据GenBank中家兔Nramp1基因序列设计引物,采用基于SYBR GreenⅠ的Real-time PCR对家兔心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、盲肠、回肠、淋巴结、肌肉、脂肪和大脑中Nramp1表达水平进行了定量分析。结果表明,Nramp1基因在肺脏组织中表达量最高,胃组织中最低,而在肌肉和盲肠组织中不表达。研究结果说明家兔Nramp1表达具有一定组织器官特异性。

4猪种Nramp1基因第6内含子多态性研究

天然抗性巨噬蛋白(Nramp)基因是与人、鼠的一些病原微生物的易感性和抗性有关的重要候选基因。为了研究猪Nramp1基因的多态性,利用PCR-RFLP技术检测了杜洛克、大白猪、长白猪和合作猪共270头个体Nramp1基因第6内含子NdeⅠ酶切位点多态性。结果表明,4个猪种群共检测到3种基因型(AA、AB和BB),其中AB基因型为杜洛克、大白猪和长白猪的优势基因型;AA基因型为合作猪的优势基因型。经卡方适合性检测,杜洛克、合作猪和长白猪处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),大白猪处于Hardy-Weinberg不平衡状态。多态信息含量分析显示,Nramp1基因的第6内含子NdeⅠ酶切位点在各猪种表现出中度多态性。

大肠杆菌刺激猪肠上皮细胞后Nramp1基因的表达变化分析

猪天然抗性相关巨噬细胞蛋白基因1(Naturalresistance-associated Marophage Protein 1,Nramp1)作为影响抗病力的重要候选基因之一,在机体的免疫过程中发挥着重要的调控作用。为了在细胞水平上探讨Nramp1基因与引起仔猪腹泻的致病性大肠杆菌的关系及其在大肠杆菌感染过程中发挥的免疫调控作用,本研究利用F18ab、F18ac和K88ac等3种致病性大肠杆菌刺激体外培养的猪肠上皮细胞IPEC-J2,并利用实时荧光定量PCR检测3种菌体刺激IPEC-J2后Nramp1基因的表达变化情况。结果表明:F18ab、F18ac和K88ac 3种大肠杆菌刺激IPEC-J2后,Nramp1基因的表达均发生极显著(P<0.01)上调,差异倍数分别为10、8、11倍,且F18ab和K88ac 2种菌体刺激后Nramp1基因的表达上调程度均极显著高于F18ac。本研究结果提示,Nramp1基因的表达与大肠杆菌的侵染有很大的相关性,其在大肠杆菌侵袭猪肠道中发挥了重要的免疫调控作用。本研究在细胞水平分析探讨了Nramp1基因的表达与3种致病性大肠杆菌侵袭的关系,为Nramp1基因在大肠杆菌侵染机体的过程中发挥的免疫调控作用研究提供了参考依据。

NRAMP1基因3′UTR多态现象与汉族结核病易感性的研究

目的 研究人类自然抵抗相关巨噬细胞蛋白 (NRAMP1)基因 3′UTR多态现象与汉族结核病易感性的关系。方法 选取汉族活动性结核病患者 14 7例 ,正常对照 14 5人 ,用聚合酶链反应 限制性片断长度多态性 (PCR RFLP)的方法对NRAMP1基因 3′UTR进行基因分型 ,根据基因型对样本分组 ,经统计学处理 ,研究 3′UTR多态现象与结核病易感性的关系。结果 在活动性结核病患者中 3′UTRTGTG/TGTG基因型 95例 (6 4 6 % ) ,TGTG/TGTG缺失基因型 5 0例 (34 0 % ) ,TGTG缺失 /TGTG缺失基因型 2例 (1 4 % ) ;正常对照TGTG/TGTG基因型则为 115例 (79 3% ) ,TGTG/TGTG缺失基因型 2 9例 (2 0 .0 % ) ,TGTG缺失 /TGTG缺失基因型 1例 (0 7% )。正常对照组TGTG/TGTG基因型明显高于结核病患者 (χ2 =7 79;P <0 0 1)。研究发现TGTG的等位基因频率为 0 85 ,TGTG缺失的等位基因频率为 0 15。结论 NRAMP1基因 3′UTR多态现象与结核病易感性相关 ,汉族 3′UTRTGTG缺失等位基因频率明显高于白种人 ,可部分解释汉族比白种人更易患结核病。

矽肺患者结核易感相关基因的多态性分析

目的探讨矽肺患者结核易感相关基因的多态性,研究结核易感相关基因对矽肺患者结核发生的影响。方法选择矽肺患者20例,矽肺合并结核患者20例,单纯肺结核患者10例,另选10位健康人作为对照,PCR扩增目的基因,用限制性内切酶对NRAMPl基因3’UTR多态性位点和VDR基因Fok I位点、Taq I多态性位点进行基因分型,各基因型与结核易感性关系用单因素分析和多因素logistic回归分析。结果多因素logistic回归分析表明NRAMP1基因3’UTR和VDR基因Fok I和Taq I位点的多态性与矽肺患者结核发生具有相关性。矽肺合并结核组NRAMP1 3’UTR中TGTG+-/++基因型的频率、TGTG--/++基因型的频率、VDR Fok I和VDR Taq I基因型频率与其它三组相比均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论矽肺合并结核患者的NRAMP1基因3’UTR和VDR基因Fok I和Taq I位点的多态性与结核感染存在相关性,NRAMP1基因3’UTR和VDR基因在矽肺合并结核患者的肺结核发病中所起的真正作用以及与其它易感基因或与环境之间的交互作用还需进一步研究确定。

大豆镉运输相关GmNramp1基因的克隆与表达

土壤主要污染物中的重金属镉(Cd)已被列为优先关注污染物以及人类致癌物之一,会影响农作物的生长发育,并且可以通过食物链进入人体,影响人类健康。已有研究表明,在模式植物拟南芥和水稻中,Nramp蛋白家族在重金属镉吸收转运和调控过程中起到了关键作用,但在大豆中尚未有该基因参与重金属镉吸收和转运的报道。通过大豆数据库的分析,发现了一个Nramp家族基因,命名为Gm Nramp1(Glyma07g02680)。RT-PCR分析结果表明,在不同时间75μmol·L-1Cd Cl2处理的大豆根、子叶、胚轴和叶中Gm Nramp1基因均下调表达,而且在Cd处理的根系转录组测序分析中也得到了相似的结果。这些结果说明,Gm Nramp1基因可能在大豆中参与Cd吸收或转运过程。该研究为大豆抗重金属育种提供理论基础和基因资源。