茵陈蒿汤调控Nrf-2/HO-1通路对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道重塑的影响

目的:探讨茵陈蒿汤调控抗氧化相关转录因子核因子相关因子2(Nrf-2)/亚铁血红素氧化酶1(HO-1)通路对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道重塑的影响。方法:通过注射脂多糖联合烟熏制备COPD大鼠,造模后随机分为模型组、茵陈蒿汤(4.41 g/kg)组、氨茶碱(2.3 mg/kg)组、茵陈蒿汤+抑制剂(4.41 g/kg茵陈蒿汤+30 mg/kg ML385)组,并以正常大鼠为对照组,检测大鼠肺功能[呼气峰流量(PEF)、第一秒用力呼气容积(FEV1)/用力肺活量(FVC)];评估血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平及肺组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;检测肺组织病理学变化以及转化生长因子(TGF-β)、结缔组织生长因子(CTGF)阳性表达、金属基质蛋白酶(MMP)-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达、Nrf-2、HO-1蛋白表达。结果:模型组FEV1/FVC、PEF、肺组织SOD、GSH-Px水平、Nrf-2、HO-1蛋白表达较对照组降低,血清IL-1β、IL-6、病理评分、肺组织TGF-β、CTGF、MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达增加(均P<0.05);茵陈蒿汤或氨茶碱治疗后,FEV1/FVC、PEF、肺组织SOD、GSH-Px水平、Nrf-2、HO-1蛋白表达较模型组增加,血清IL-1β、IL-6、病理评分、肺组织TGF-β、CTGF、MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达显著降低(均P<0.05);茵陈蒿汤联合ML385治疗后,FEV1/FVC、PEF、肺组织SOD、GSH-Px水平、Nrf-2、HO-1蛋白表达较茵陈蒿汤组降低,血清IL-1β、IL-6、病理评分、肺组织TGF-β、CTGF、MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达增加(均P<0.05)。结论:茵陈蒿汤可通过调控Nrf-2/HO-1通路改善COPD大鼠气道重塑。

基于Nrf-2/HO-1探究甘草锌对黄褐斑小鼠的治疗作用

目的探讨甘草锌对黄褐斑的治疗作用。方法将36只BALB/c小鼠平均分为空白组、模型组、甘草锌低剂量组、甘草锌中剂量组、甘草锌高剂量组和氨甲环酸组,用100 mJ/cm^(2) UVB照射联合15 mg/kg黄体酮注射进行黄褐斑造模,后对小鼠进行氨甲环酸(0.065 g/kg)与甘草锌低(0.65 g/kg)/中(1.3 g/kg)/高(2.6 g/kg)剂量连续治疗14 d。取皮肤进行HE、Masson-Fontana染色;并检测皮肤和外周血中SOD、MDA、GSP-Px、TNF-α、IL-1β及IL-6含量;皮肤组织中浆蛋白Nrf-2、核蛋白Nrf-2、HO-1表达水平。结果与模型组相比较,高剂量甘草锌组黑色素细胞形成、胶原细胞坏死与炎性浸润减少(P<0.01),MDA、IL-6、IL-1β与TNF-α表达和浆蛋白Nrf-2表达降低(P<0.01),GSP-Px、SOD表达和核蛋白Nrf-2、HO-1表达增加(P<0.01)。结论甘草锌激活Nrf-2/HO-1通路启动HO-1、SOD和GSP-Px高表达抗氧化应激,从而减少黑色素形成。

芒果苷通过Nrf-2/HO-1/HMGB1/NF-κB通路减轻链脲佐菌素诱导的大鼠视网膜病变的机制探讨

目的:探讨芒果苷对链脲佐菌素(STZ)诱导的大鼠视网膜病变的影响。方法:采用1%STZ腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。采用酶联免疫吸附法检测血清和视网膜组织细胞因子水平,并采用试剂盒测量口服葡萄糖耐量(OGTT),以及血清和视网膜组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。采用苏木精伊红染色法(HE)染色评价视网膜组织病理变化。Western blot检测糖尿病大鼠视网膜组织核因子相关因子2(Nrf-2)及其下游信号通路的变化。结果:芒果苷可显著改善糖尿病大鼠OGTT,增加血清和视网膜组织中的SOD,降低MDA水平。芒果苷还可显著降低糖尿病大鼠的血清和视网膜组织细胞因子水平,调节视网膜组织中Nrf-2、血红素加氧酶-1(HO-1)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)和核转录因子-κB(NF-κB)蛋白的表达。结论:芒果苷可能通过Nrf-2/HO-1/HMGB1/NF-κB通路改善STZ诱导的大鼠视网膜组织视网膜病变、氧化应激和炎性反应。

百里醌通过Nrf-2/HO-1通路对PD模型小鼠神经元ferroptosis的保护机制研究

目的:研究中药百里醌(Thymoquinone,TQ)对MPTP诱导的帕金森病(Parkinson Disease,PD)小鼠模型神经元损伤的保护作用,并探讨其可能机制。方法:以MPTP构建PD小鼠模型,分别给予以百里醌10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg给药7d,采用透射电镜观察神经元线粒体形态变化,ELISA法检测氧化应激指标硝基酪氨酸(Nitrotyrosine,NT)、8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG)、GSH,western bloting检测Nrf-2/HO-1通路及ferroptosis通路相关蛋白表达。结果:透射电镜结果显示模型组线粒体严重肿胀,空泡化,腔内出现周边不清絮状物,嵴断裂、减少;TQ 10mg组线粒体肿胀,大部分局部空泡化,嵴断裂、减少;TQ 20mg组线粒体中重度肿胀,大部分局部空泡化,嵴断裂、减少;TQ 40mg组线粒体轻微肿胀、部分嵴断裂,少数中重度肿胀,局部空泡化。ELISA检测结果显示,与正常组比较MPTP可显著增加PD模型小鼠脑内NT、8-OHdG含量,减少GSH含量,同时引起FT、FTR的蓄积,TQ治疗可剂量依赖性降低PD模型小鼠脑内NT、8-OHdG含量,升高GSH含量,同时减少FT、FTR的蓄积。western bloting结果显示,PD模型小鼠较正常组小鼠脑内Nrf-2、HO-1、NQO-1、FTH-1蛋白表达显著降低,Keap-1含量最高,百里醌可剂量依赖性上调PD模型小鼠脑内Nrf2、HO-1、NQO-1、FTH-1蛋白表达,抑制Keap-1蛋白的表达。结论:百里醌可以通过激活Nrf-2/HO-1通路抑制ferroptosis,调控氧化应激损伤,进而发挥神经保护作用,延缓PD的进程。

miR-21对肝癌细胞Keap-1/Nrf2通路的调控作用分析

目的探讨miR-21对肝癌细胞Keap-1/Nrf2通路的调控作用。方法人肝癌细胞株HSMMC-7721随机分为三组,实验组、对照组分别转染miRNA-21模拟剂(mimics)、miRNA-21 NC,空白组不进行转染。采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪实验检测细胞周期,Transwell小室实验检测细胞侵袭,Western blot检测蛋白表达。结果转染后36 h与48 h,实验组的miRNA-21相对表达量显著高于空白组和对照组(P<0.05),实验组的细胞增殖率、侵袭率显著低于空白组和对照组(P<0.05);转染后48 h,实验组的S期与G2/M期比率显著高于空白组和对照组,(P<0.05),GO/G1期比率显著低于空白组和对照组,(P<0.05),空白组和对照组对比差异无统计学意义(P>0.05)。转染后36 h与48 h,与空白组和对照组相比,实验组的Keap-1、Nrf2蛋白相对表达量显著下降(P<0.05)。结论miRNA-21高表达能抑制Keap-1/Nrf2通路的激活,可调节肝癌细胞周期,从而抑制肝癌细胞的增殖与侵袭。

上调Keap-1抑制Nrf-2核转运和降低卵巢癌细胞Skov3/DPP对顺铂耐药

目的分析Keap-1/Nrf-2通路在耐顺铂(cis-pt)的卵巢癌细胞Skov3/DDP中的活化状态,及其对细胞耐药的影响。方法构建p Flag-CMV-Keap-1过表达载体。细胞分4组:空白、cis-pt、Keap-1过表达及cis-pt联合Keap-1过表达组;Western blot检测Keap-1和Nrf-2蛋白表达及亚细胞定位;流式细胞计量术分析细胞的凋亡;DHE探针检测胞内活性氧簇(ROS)积累效应。结果相比Skov3,Skov3/DDP细胞中Keap-1水平明显下调(P<0.05),Nrf-2在细胞核中含量增多(P<0.05);过表达Keap-1后,Keap-1水平明显增加(P<0.05);细胞核中Nrf-2含量明显减少(P<0.05);20 mg/L顺铂能够明显诱导凋亡,24及48 h的凋亡率分别为24.36%和53.81%,显著高于未过表达Keap-1组(P<0.05),并激活caspase-3及PARP;DHE过表达Keap-1联合顺铂能够明显诱导ROS在细胞内累积。结论 Nrf-2能够在药物刺激时降低ROS保护细胞,Skov3/DDP细胞中Keap-1表达下调导致Nrf-2活化入核,可能与药物作用时ROS的毒性作用降低及细胞耐药有关。

UHRF1高表达对膀胱癌细胞Keap-1/Nrf2通路的调控作用分析

目的探讨与分析泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)高表达对膀胱癌细胞Keap-1/Nrf2通路的调控作用。方法分别用针对UHRF1的mimic及对照mimic转染膀胱癌细胞系UMUC3,标记为A组、B组,同时以PBS代替转染试剂的为C组。MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭,qRT-PCR检测mRNA表达,Western blot检测Keap-1/Nrf2通路蛋白表达。结果转染后48 h与72 h,与B组与C组相比,A组UHRF1 mRNA表达量显著增加(P<0.05)。转染后48 h与72 h,与B组与C组相比,A组的细胞增殖抑制率、凋亡率显著降低,细胞侵袭数目显著增加(P<0.05)。转染后48 h,与B组与C组相比,A组的Keap-1、Nrf2相对表达量显著增加(P<0.05)。结论UHRF1高表达能激活膀胱癌细胞Keap-1/Nrf2通路,从而促进细胞增殖与侵袭,抑制细胞凋亡。

鲍鱼内脏多糖-蛋白质复合硒纳米颗粒对AML12细胞酒精性损伤的影响

目的:探讨鲍鱼内脏多糖-蛋白质复合硒纳米颗粒(Abalone Visceral Polysaccharide-protein Complex Selenium Nanoparticles,PSP-SeNPs)对AML12细胞酒精性损伤的保护作用及其机制。方法:本研究用不同浓度(0.1、0.2、0.3和0.4μg/mL)PSP-SeNPs对AML12细胞进行干预24 h,再换为酒精浓度300 mmol/L的完全培养基处理24 h,诱导建立酒精性损伤细胞模型。通过Hoechst染色法判断各组细胞损伤的情况,之后测定细胞氧化应激的相关生化指标,最后通过qRT-PCR法测定细胞内氧化应激相关基因的表达。结果:与正常对照组相比,酒精造模组细胞内的谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)酶活性显著性降低(P<0.05),丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)的水平显著升高(P<0.05)。这些变化在PSP-SeNPs的干预下发生显著逆转(P<0.05)。qRT-PCR结果表明,与对照组相比,酒精处理可显著降低AML12细胞中核因子E2相关因子2(Nrf2)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱氨酸连接酶调节亚基(GCLM)的mRNA表达水平(P<0.05),提高Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)的mRNA表达水平(P<0.05),并且PSP-SeNPs干预可显著逆转以上改变(P<0.05)。结论:PSPSeNPs可通过调节氧化应激相关基因的表达水平,从而调控抗氧化酶活性来缓解由酒精诱导的AML12细胞酒精性损伤。

红景天苷通过Nrf-2/HO-1信号通路促进脊髓损伤大鼠神经修复

目的:研究红景天苷(Sal)对大鼠脊髓损伤(SCI)的修复作用及分子机制。方法:36只成年雄性SD大鼠分为3组:分别是假手术组(Sham)、脊髓损伤组(SCI)和红景天苷治疗组(SCI+Sal),利用撞击法制备大鼠SCI模型,SCI+Sal组大鼠通过腹腔注射红景天苷治疗7 d,利用BBB评分检测各组大鼠的脊髓功能,利用商品化试剂盒检测脊髓组织中过氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)的含量,利用Western Blot检测脊髓组织中Nrf-2和HO-1的表达。结果:SCI组大鼠脊髓功能受损明显,损伤脊髓组织中SOD活性下降,MDA水平增加,Nrf-2和HO-1蛋白表达增加;经过Sal治疗,SCI大鼠脊髓组织SOD活性增加,MDA降低,同时,Nrf-2和HO-1蛋白表达进一步增加。结论:Sal通过Nrf-2/HO-1信号通路降低SCI大鼠脊髓部位氧化应激,促进损伤修复。

清脂化瘀颗粒调控Keap-1/Nrf2/ARE介导的氧化损伤抗动脉粥样硬化的作用及机制研究

目的:基于对动脉粥样硬化(AS)防治,观察清脂化瘀颗粒对动脉粥样硬化的防治作用及机制。方法:将30只载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组、清脂化瘀颗粒组。10只C57BL/6J雄性小鼠作为对照组。除对照组外,各组给予高脂饲料喂养8周复制AS模型,后各组小鼠分别给予对应药物干预4周。分离各组小鼠血清主动脉组织,苏木精-伊红(HE)染色观察主动脉斑块形成情况,比色法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和亚铁离子(Fe^(2+))水平情况,Western blot检测主动脉组织中核因子E_(2)相关因子(Nrf2)及Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap-1)表达情况。结果:与对照组比较,模型组小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)水平显著上升,高密度脂蛋白(HDL)水平显著下降,血清SOD、GSH水平显著降低,MDA水平显著升高,Keap-1水平显著升高;主动脉斑块有较大斑块形成。与模型组比较,经过干预后,各组小鼠血清TC、TG、LDL水平显著下降;血清SOD、GSH水平显著升高,MDA水平显著下降,Nrf2蛋白表达显著升高,Keap-1水平显著降低,主动脉斑块减少。与阿托伐他汀组相比,清脂化瘀颗粒组Fe^(2+)水平显著降低。结论:清脂化瘀颗粒组能减轻动脉粥样硬化斑块形成,其机制可能与调控Keap-1/Nrf2/ARE介导的抗氧化损伤机制有关。清脂化瘀颗粒能明显减轻AS的铁蓄积。

川芎嗪通过AMPK/NF-κB和Nrf-2/HO-1途径减轻过敏性气道炎症和氧化应激的实验研究

目的本研究旨在探讨川芎嗪对过敏性炎症反应和氧化应激的影响,并探讨其机制是否与AMPK/NF-κB和Nrf-2/HO-1信号通路有关。方法用组织化学染色来观察小鼠肺组织病理学改变;小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中炎症细胞数量用Diff-quik染色法检测;用ELISA法检测BALF中各种细胞因子和IgE的含量以及SOD,CAT活性和MDA表达水平;免疫荧光法检测p-AMPK和NF-κBp65在肺组织中表达水平;免疫组化法检测Nrf-2和HO-1在肺组织中表达水平;肺中的AMPK、p-AMPK、NF-κBp65、Nrf-2和HO-1蛋白进行定量分析采用Westernblot方法。结果哮喘小鼠模型中,川芎嗪可减少炎症细胞的渗出和浸润,抑制杯状细胞增生。川芎嗪治疗后,哮喘小鼠BALF中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-13和IgE等蛋白表达水平明显降低,而干扰素-γ(IFN-γ)的表达增高。川芎嗪治疗后可使哮喘小鼠BALF中SOD和CAT活性升高,而MDA表达水平降低。川芎嗪也可降低OVA诱导哮喘小鼠NF-κBp65的表达,增加p-AMPK、Nrf-2和HO-1的表达。结论川芎嗪可以改善哮喘小鼠气道炎症反应和氧化应激,其机制可能与AMPK/NF-κB和Nrf-2/HO-1信号通路有关。

健脾清热活血方介导keap-1-Nrf2信号调控claudin-2表达干预溃疡性结肠炎模型大鼠实验研究

目的通过观察keap-1-Nrf2通路调控claudin-2蛋白表达变化,探讨健脾清热活血方防治溃疡性结肠炎的效用机制。方法90只SPF级雄性SD大鼠随机分为6组,除外正常组,其余各组均采用TNBS灌肠法制备溃疡性结肠炎模型,自第7日起分组给药,模型组予等剂量生理盐水,中药低、中、高剂量组予不同剂量健脾清热活血方,西药组予美沙拉嗪灌胃,连续14d。末次给药后腹腔麻醉处死全部大鼠,截取病变部位肠段备测。HE染色检测结肠组织病理学变化;透射电镜检测结肠黏膜超微结构变化;免疫组化SP法检测结肠环氧氯丙烷结合蛋白1(keap-1)、Nrf2以及claudin-2蛋白表达变化。结果光镜提示模型组结肠黏膜表面出现缺损或脱落坏死,溃疡形成,隐窝结构消失、脓肿形成,固有层大量炎性细胞浸润,黏膜下层充血肿胀;治疗组较模型组有明显改善,见结肠黏膜尚完整,但存在黏膜缺损,隐窝脓肿,部分可见出血点,较多炎性细胞浸润固有层。电镜下见模型组结肠上皮细胞微绒毛稀疏,线粒体肿胀变大,细胞间紧密连接消失,可见细胞处于坏死期;中药组见上皮细胞体积明显变小、核固缩、凋亡小体形成,局灶可见坏死。模型组结肠keap-1、Nrf2蛋白表达下降,claudin-2蛋白表达上升;治疗后,中药组结肠keap-1、Nrf2蛋白表达上升,claudin-2蛋白表达下降;经比较,差异有统计学意义(P<0.05);但是中药组之间不存在组间差异(P>0.05)。结论健脾清热活血方通过上调Keap-1、Nrf2表达,下调claudin-2表达而发挥防治溃疡性结肠炎的效用。

柚皮素通过增强NRF-2/HO-1信号活性减轻实验性妊娠高血压模型大鼠的肾损伤

目的探讨柚皮素(naringenin,Nar)对妊娠高血压综合征(pregnancy-induced hypertension syndrome,PIH)肾损伤的影响,并分析其相关的机制。方法在妊娠第8—20 d每天腹腔注射50mg/kg L-NAME,诱导PIH模型;在妊娠第8—20 d,每天口服200 mg/kg Nar作为Nar对照,每天腹腔注射50 mg/kg L-NAME的同时口服200 mg/kg Nar作为PIH的Nar治疗。在妊娠第1、8、12、14、16、18和20 d监测大鼠收缩压。ELISA法检测妊娠第20 d的尿白蛋白和肌酐含量,并计算尿白蛋白排泄率和肌酐清除率。在妊娠第21 d,处死大鼠并收集肾组织,用HE、PAS和Masson染色观察肾组织病理学,评估组织学损伤、肾小球硬化和肾小管间质纤维化严重程度,生化法测定肾组织中MDA、CAT和GSH含量,TUNEL染色以及Cleaved Caspase-3、Bcl-2和Bax免疫组织化学染色评估肾组织凋亡情况;免疫组织化学染色评估肾组织中NRF-2和HO-1表达。结果在PIH大鼠,Nar虽不影响收缩压,但能降低尿白蛋白排泄率和增加肌酐清除率,抑制肾小管上皮细胞凋亡,改善肾小球硬化和肾小管间质纤维化,降低氧化应激水平,并增强肾组织中NRF-2/HO-1活性。结论柚皮素可能通过降低氧化应激水平抑制PIH大鼠的肾损伤。

缺血性脑卒中基于Nrf-2/HO-1上调Mfsd2a表达缓解BCFB损伤研究

目的 探究Nrf-2/HO-1信号通路调节的Mfsd2a表达在缺血性脑卒中(IS)引起的血-脑脊液屏障(BCFB)破坏中的作用。方法 45只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组,脑缺血组,脑缺血+BARD组。取非假手术组大鼠,参考Longa法构建IS模型,取脑缺血+BARD组大鼠立即尾静脉注射2.0mg·kg^(-1) BARD。24 h后开展神经功能评估,之后分别检测大鼠脑梗死体积,BCFB通透性,脑水肿程度,最后采用免疫荧光和Western blot检测各个蛋白表达。结果 IS造成大鼠神经功能评分增加,脑组织出现梗死区域,BCFB通透性与脑水肿程度增加。与脑缺血组相比,BARD下调了大鼠神经功能评分,减少了梗死体积,降低了BCFB通透性与脑水肿程度。分子水平上,BARD治疗进一步激活了Nrf-2/HO-1信号通路,增加了Mfsd2a表达。与此同时,BARD干预逆转了IS造成的BCFB紧密连接蛋白Claudin-5、ZO-1与VEcadherin表达降低。结论 Nrf-2/HO-1信号通路激活介导Mfsd2a表达增加,促进了BCFB修复,减轻了脑水肿与脑梗死,改善了IS大鼠神经功能损伤。

紫檀芪调节Keap-1/Nrf2/HO-1信号通路对非酒精性脂肪肝大鼠氧化应激和细胞凋亡的影响

目的:研究紫檀芪调节Kelch样ECH关联蛋白1(Keap-1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠氧化应激和细胞凋亡的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、紫檀芪低剂量组(30 mg/kg)、紫檀芪高剂量组(60 mg/kg)、紫檀芪(60 mg/kg)+N-(4-(2,3-二氢-1-(2’-甲基苯甲酰)-1H-吲哚-5-基)-5-甲基-2-噻唑基)-1,3-苯并二氧唑-5-乙酰胺(ML385)(30 mg/kg)组,每组12只。模型组与药物干预组大鼠以高脂饲料饲养诱导NAFLD模型,对照组大鼠以普通饲料饲养,各组连续喂养12周。以紫檀芪和ML385分组处理14 d后(对照组以等剂量生理盐水处理),检测各组大鼠脂代谢指标[三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)及游离脂肪酸(FFA)水平]、肝指数、肝功能指标[谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)]水平、血清白细胞介素(IL)-17、IL-6、IL-10、氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)]水平;原位末端标记法(TUNEL)染色检测各组大鼠肝细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法检测各组大鼠肝组织凋亡相关蛋白及Keap-1/Nrf2/HO-1通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠血清IL-10、SOD及CAT水平、肝组织Nrf2、HO-1、Bcl-2表达水平显著降低(P<0.05),TG、TC及FFA水平、肝指数、ALT及AST水平、血清IL-17、IL-6、MDA水平、肝细胞凋亡率、肝组织Keap-1及Bax表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组相比,紫檀芪低、高剂量组大鼠血清IL-10、SOD及CAT水平、肝组织Nrf2、HO-1、Bcl-2表达水平均升高(P<0.05),TG、TC及FFA水平、肝指数、ALT及AST水平、血清IL-17、IL-6、MDA水平、肝细胞凋亡率、肝组织Keap-1、Bax表达水平均降低(P<0.05);与紫檀芪低剂量组相比,紫檀芪高剂量组大鼠血清IL-10、SOD及CAT水平、肝组织Nrf2、HO-1、Bcl-2表达水平升高(P<0.05),TG、TC及FFA水平、肝指数、ALT及AST水平、血清IL-17、IL-6、MDA水平、肝细胞凋亡率、肝组织Keap-1及Bax表达水平降低(P<0.05);与紫檀芪高剂量组相比,紫檀芪+ML385组大鼠血清IL-10、SOD及CAT水平、肝组织Nrf2、HO-1、Bcl-2表达水平降低(P<0.05),TG、TC及FFA水平、肝指数、ALT及AST水平、血清IL-17、IL-6、MDA水平、肝细胞凋亡率、肝组织Bax表达水平升高(P<0.05)。结论:紫檀芪可能通过激活Keap-1/Nrf2/HO-1信号通路,改善NAFLD大鼠脂代谢水平,调节炎症反应及氧化应激,减轻肝组织脂肪变性及细胞凋亡。

五味子乙素对克雷伯菌引起的重症肺炎大鼠肺组织Nrf2/Keap-1/PGC-1α信号通路的影响

目的探究五味子乙素(schisandrin B,Sch B)对重症肺炎大鼠肺组织核转录因子E2相关因子2(uclear transcription factor E2 related factor 2,Nrf2)/Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Kelch-like epichlorohydrin-associated protein1,Keap-1)/过氧化物酶体增殖激活受体γ共激活因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1,PGC-1α)信号通路的影响。方法先构建重症肺炎大鼠模型,随机分为模型组、Sch B不同剂量组(低、中、高剂量组)和阳性对照组,每组10只,另取10只大鼠作为空白对照组。Sch B低、中、高剂量组分别灌胃给予2.50、5.0、10.0 mg/kg Sch B进行干预,阳性对照组给予大鼠地塞米松1.04 mg/kg灌胃治疗,其余组给予生理盐水,连续14 d。主动脉取血,检测血气指标;分离肺组织,检测其病理学变化、炎症因子水平及通路相关蛋白表达。结果空白对照组大鼠正常饮食、精神状态无异常、肺组织结构清晰。与空白对照组相比,模型组大鼠状态较差,肺组织病理损伤严重,PaCO_(2)值、肿瘤坏死因子α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)含量、Keap-1蛋白表达均显著增加(P<0.05),PaO_(2)和SaO_(2)水平、Nrf2和PGC-1ɑ蛋白表达明显降低(P<0.05)。与模型组相比,Sch B低、中、高剂量组大鼠不良症状逐渐缓解,肺组织炎性浸润、肺泡间质水肿逐渐减轻,PaCO_(2)值、TNF-ɑ、IL-6和IL-1β含量、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Kelch-like epichlorohydrin-associated protein1,Keap-1)蛋白表达均依次降低(P<0.05),PaO_(2)和SaO_(2)值、Nrf2和PGC-1ɑ蛋白表达水平依次增加(P<0.05),Sch B高剂量组与阳性对照组相比,各项指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论Sch B可缓解克雷伯菌引起的重症肺炎大鼠不良症状,可能与激活NRF2/PGC-1α信号通路,降低Keap1蛋白表达有关。

乌梅丸及拆方对糖尿病胃轻瘫模型小鼠的治疗作用及对氧化应激因子表达的影响

【目的】观察乌梅丸对糖尿病胃轻瘫(DGP)小鼠的治疗作用及配伍机制。【方法】将69只C57BL/6J小鼠随机分为正常组(12只)和造模组(57只)。采用60%高脂饲料喂养结合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法将造模组小鼠构建成DGP模型。成功建模后,将造模组小鼠随机分为模型组、乌梅丸全方组、乌梅丸酸味药组、乌梅丸苦味药组、乌梅丸甘味药组和乌梅丸辛味药组,每组9只。经过28 d治疗后,测定小鼠胃排空率、小肠推进率,采用苏木素-伊红(HE)染色观察胃窦病理变化,应用血糖仪检测小鼠空腹血糖(FBS),采用比色法检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测胃窦组织胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)、血管活性肠肽(VIP)含量,采用Western Blot法检测胃窦组织中Kelch样ECH关联蛋白1(Keap-1)、核因子红细胞系2相关因子2(Nrf-2)、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(Nqo-1)、超氧化物歧化酶1(Sod-1)蛋白表达量。【结果】(1)与正常组比较,模型组小鼠血清FBS、TG、TC和LDL-C水平显著升高(P<0.05或P<0.01或P<0.001);与模型组比较,乌梅丸全方组、酸味药组和苦味药组第3、4周末血糖值显著下降(P<0.05或P<0.01或P<0.001),乌梅丸全方组血清TG、TC、LDL-C水平显著降低(P<0.05或P<0.01),乌梅丸酸味药组、苦味药组、甘味药组及辛味药组血清TC水平均显著下降(P<0.05),拆方组中仅乌梅丸酸味药组LDL-C水平显著下降(P<0.05)。(2)与正常组比较,模型组小鼠胃窦黏膜层及黏膜下层腺体细胞排列紊乱;与模型组比较,乌梅丸全方组胃窦组织病理损伤得到明显改善,酸味药组、苦味药组DGP小鼠胃窦组织损伤的恢复效果优于甘味药组和辛味药组。(3)与正常组比较,模型组小鼠胃排空率和小肠推进率降低(P<0.01或P<0.001);与模型组比较,乌梅丸全方组、酸味药组及苦味药组胃排空率均显著升高(P<0.05或P<0.001),乌梅丸全方组、酸味药组、苦味药组、甘味药组、辛味药组小肠推进率均显著升高(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。(4)与正常组比较,模型组小鼠胃窦组织VIP含量显著升高(P<0.01),GAS、MTL含量显著降低(P<0.01或P<0.001);与模型组比较,乌梅丸全方组、酸味药组、苦味药组、甘味药组GAS含量均显著升高(P<0.01或P<0.001),乌梅丸全方组、苦味药组小鼠MTL含量显著升高(P<0.05或P<0.01),乌梅丸全方组、酸味药组、苦味药组、甘味药组小鼠胃窦组织VIP含量均显著降低(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。(5)与正常组比较,模型组小鼠胃窦组织Keap-1表达水平升高(P<0.05),Nrf-2、Nqo-1和Sod-1表达水平降低(P<0.05或P<0.001);与模型组比较,乌梅丸全方组及苦味药组Keap-1蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.001),乌梅丸全方组、酸味药组及苦味药组Nrf-2、Nqo-1、Sod-1表达水平显著升高(P<0.05或P<0.001)。【结论】乌梅丸可有效调节DGP小鼠糖脂代谢、改善胃窦损伤、促进胃肠动力,全方药效优于各拆方,其机制可能与酸味药、苦味药、甘味药、辛味药协同配伍增效,且主要通过酸味药和苦味药调节Nrf-2/Keap-1通路进而改善氧化应激损伤有关。

枸杞子多糖的提取纯化、体外抗氧化及其抗衰老作用

目的:从枸杞子中分离纯化得到枸杞子多糖,并对其体外抗氧化活性及抗衰老作用进行研究。方法:通过水提醇沉法提取得到枸杞子粗多糖,再经过Sevage试剂除蛋白、DEAE-52纤维素离子交换树脂从粗多糖中分离纯化得到枸杞子多糖LBP。通过测定LBP对DPPH自由基、羟基自由基和ABTS+自由基的清除能力及对Fe^(3+)还原能力,评价LBP的体外抗氧化能力,采用D-半乳糖诱导建立衰老小鼠模型,给药结束后,比较各组小鼠的体质量及脏器指数,检测血清、肝和脑组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)和过氧化氢酶(CAT)的水平,蛋白质印迹(Western blotting)法检测肝组织中核内因子-E2-相关因子(Nrf-2)和血红素氧合酶-1(HO-1)的蛋白表达。结果:分离纯化得到的多糖LBP含量为86.64%±2.34%;LBP对DPPH自由基、羟基自由基和ABTS^(+)自由基清除能力的IC_(50)值分别为0.2081±0.0182、0.7132±0.0220和0.3646±0.0138 mg/mL;与模型组相比,阳性组和LBP高剂量组显著提高小鼠体质量(P<0.05或P<0.01),脏器指数显著升高(P<0.05或P<0.01);阳性组和LBP高剂量组可显著提高小鼠血清、肝和脑组织中SOD、CAT和GSHPx水平(P<0.05或P<0.01),并极显著降低MDA水平(P<0.01),肝脏组织中Nrf-2蛋白表达水平除LBP低剂量外均显著升高(P<0.05),HO-1蛋白表达水平在各组中均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:枸杞子多糖LBP具有较强的抗氧化能力和一定的抗衰老作用,其作用机制可能与Nrf-2/HO-1信号通路有关。

三七皂苷R1调控AMPK/Nrf-2/HO-1信号通路缓解冠心病大鼠心肌损伤的研究

目的研究三七皂苷R1对冠心病模型大鼠心肌损伤的作用及机制。方法将大鼠随机分为对照组,模型组,三七皂苷R1低、中、高剂量组,每组9只;采用饲喂高脂饲料联合垂体后叶注射液腹腔注射的方法建立冠心病大鼠模型;三七皂苷R1低、中、高剂量组分别灌胃给予50,100和200 mg·kg^-1的三七皂苷R1,每天给药1次,连续4周。HE染色观察心肌损伤,Western blotting检测活化的半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、半胱氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的表达水平,测定平均动脉压、心率和左室收缩压水平,ELISA检测心损标记肌红蛋白(myoglobin,Mb)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isozyme,CK-MB)和肌钙蛋白(cardiac troponin,cTnI)表达水平及炎症因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)含量,试剂盒检测心肌细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)表达水平,Western blotting检测腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activeted protein kinase,AMPK)的磷酸化及转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)、血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)表达水平。结果三七皂苷R1能降低冠心病大鼠心肌损伤程度,抑制心肌凋亡蛋白caspase-3、caspase-9的活化(P<0.05),上调心脏功能指标平均动脉压、心率和左室收缩压水平(P<0.05),抑制心损标记物CK-MB、cTnI和Mb高表达(P<0.05),降低氧化应激指标SOD、GSH、LDH和MDA的含量(P<0.05),抑制炎症因子IL-6、IL-1β、iNOS和TNF-α含量表达上调(P<0.05),上调AMPK/Nrf-2/HO-1信号通路蛋白的表达(P<0.05)。结论三七皂苷R1能改善冠心病大鼠心肌损伤,抑制心肌细胞凋亡、氧化应激、炎症反应,这与调控AMPK/Nrf-2/HO-1信号通路激活有关。

开心散对Aβ1-42诱导Alzheimer病大鼠模型Keap-1/Nrf2/MnSOD信号通路的作用

目的:基于Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap-1)/核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/锰超氧化物歧化酶(Mn SOD)信号通路探讨开心散改善阿尔茨海默病(AD)模型大鼠认知障碍的可能机制。方法:通过侧脑室注射β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42,5μL)建立AD模型。造模后将大鼠随机分为模型组,多奈哌齐组和开心散低、中、高剂量组,并另设正常组。多奈哌齐组给予多奈哌齐片(1.8 g·kg^(-1)·d^(-1)),开心散低、中、高剂量组给予开心散制成的药液(10,20,40 g·kg^(-1)·d^(-1)),正常组和模型组给予等体积的纯水。采用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆力。采用比色法检测血清中髓过氧化酶(MPO),诱导型一氧化氮合酶(i NOS),超氧化物歧化酶(SOD)的表达水平。采用尼氏染色观察海马CA3区病理形态。采用免疫组化(IHC)和蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测海马中Keap-1,Nrf2,Mn SOD的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间显著增加(P<0.01),穿越平台次数和目标象限时间显著降低(P<0.01);与模型组比较,多奈哌齐组和开心散低、中、高组大鼠平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间明显减少(P<0.05,P<0.01),穿越平台次数和目标象限时间明显增加(P<0.05,P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠血清中MPO,i NOS表达水平显著升高(P<0.01),而SOD表达水平降低(P<0.01)。与模型组比较,多奈哌齐组和开心散低、中、高组大鼠血清中MPO,i NOS表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),而SOD表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。正常组大鼠海马CA3区神经元排列整齐,未有尼氏体固缩。模型组大鼠海马CA3区神经元排列欠整齐,有明显的神经元丢失和尼氏体固缩。多奈哌齐组和开心散低、中、高组大鼠海马CA3区神经元排列较整齐,神经元数量增多,尼氏体固缩减少。与正常组比较,模型组大鼠海马中Keap-1的积分吸光度IA和蛋白水平降低(P<0.01),而Nrf2,Mn SOD的IA和蛋白水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,多奈哌齐组和开心散低、中、高组大鼠海马中Keap-1和Mn SOD的IA和蛋白水平明显升高(P<0.05,P<0.01),而Nrf2的IA和蛋白水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:开心散可通过调节Keap-1/Nrf2/Mn SOD信号通路缓解AD模型大鼠的认知障碍。