Nrf2基因敲除对莪术神经发育毒性的影响研究

目的观察莪术对正常和血瘀证孕小鼠子代的神经发育毒性是否具有选择性及可能的生物学机制。方法采用冰水浸入法制备寒凝血瘀证小鼠模型。C57BL/6野生小鼠和Nrf2基因敲除(Nrf2-KO)小鼠分为对照组和莪术暴露组,孕小鼠从妊娠第5~18天灌胃给予莪术水煎液。检测子代小鼠负趋地性达标日龄,分光光度法检测子代小鼠脑组织LPO含量和SOD活性,实时定量PCR检测子代小鼠脑组织SOD1和HO-1 mRNA表达,蛋白质印迹法检测子代小鼠脑组织HO-1蛋白表达。结果与正常对照组比较,正常小鼠灌胃莪术(10.0 g/kg)导致子代负趋地性达标日龄显著延长和脑组织LPO显著增加(均P<0.05),而血瘀证小鼠无显著差异(均P>0.05)。与正常对照组比较,血瘀证组小鼠HO-1表达,SOD活性和HO-1 mRNA表达显著增加(均P<0.05)。Nrf2基因敲除增加了血瘀证孕鼠子代断崖回避的达标日龄和脑组织氧化应激。结论莪术对正常小鼠子代的毒性效较血瘀证小鼠子代明显,Nrf2分子参与莪术神经发育毒性的有故无殒现象。

莪术胚胎期暴露对仔鼠神经行为的影响及氧化损伤机制

目的观察正常和血瘀证孕小鼠子代莪术神经发育毒性的差异,为中药辨证减毒提供实验依据。方法采用冰水浸入法制备寒凝血瘀小鼠模型。C57BL/6野生小鼠和Nrf2基因敲除(Nrf2-KO)小鼠分为对照组和莪术暴露组,孕小鼠从妊娠第5天至18天灌胃给予莪术水煎液。检测子代小鼠前肢悬挂和空中翻正达标日龄,分光光度法检测子代小鼠脑组织MDA含量,实时定量PCR检测子代小鼠脑组织Nox4 mRNA表达,蛋白质印迹法检测Nox4蛋白表达。结果与正常对照组比较,正常小鼠灌胃莪术导致子代前臂悬挂和空中翻正达标日龄显著延长和脑组织MDA显著增加(P<0.05),而血瘀证小鼠未见显著差异(P>0.05)。与对照组比较,莪术增加了正常和血瘀证小鼠子代脑组织Nox4 mRNA和蛋白表达(P<0.05),而对ERK1/2磷酸化水平无显著影响(P>0.05)。Nrf2基因敲除增加了血瘀证孕小鼠子代前臂悬挂和空中翻正的达标日龄和脑组织MDA含量(P<0.05)。结论莪术对正常小鼠子代的神经毒性效较血瘀证小鼠子代明显,莪术神经发育毒性的"有故无殒"现象可能与Nrf2核转位有关。

基于“有故无殒”莪术对正常和血瘀证小鼠毒性差异机制的研究

为了明确正常和血瘀证的孕鼠子代莪术神经发育毒性的差异及其生物机制,采用冰水浸入法制备寒凝血瘀证小鼠模型,雌性小鼠随机分为正常对照组、血瘀证对照组、正常+莪术(2.5、5、10 g·kg^(-1))组、血瘀证+莪术(2.5、5、10 g·kg^(-1))组、血瘀证Nrf2敲除组、血瘀证Nrf2敲除+莪术(10 g·kg^(-1))组、正常+tBHQ (Nrf2的激动剂)组和正常+莪术(10 g·kg^(-1))+tBHQ组,共12组。交配成功的莪术暴露组小鼠于妊娠期第5～18天灌胃给予莪术水煎液。行为学方法检测子代小鼠断崖回避达标日龄,分光光度法检测子代小鼠脑组织谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量,实时定量PCR检测子代小鼠脑组织Nrf2、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate cysteine ligase catalytic subunit,GCLc)和修饰亚基(glutamate cysteine ligase modifier subunit, GCLm) mRNA表达,蛋白质印迹法检测子代小鼠脑组织Nrf2、GCLc和GCLm蛋白表达。动物福利和实验过程均遵循齐齐哈尔医学院动物伦理委员会的规定执行。结果显示,正常小鼠灌胃莪术水煎液(10.0 g·kg^(-1))导致子代断崖回避达标日龄显著延长(P<0.05),而血瘀证小鼠子代无显著差异(P>0.05)。与正常对照组比较,血瘀证孕小鼠显著增加子代脑组织GSH含量、GCLc、Nrf2 mRNA和蛋白表达(均P<0.05),而莪术处理对GSH含量、GCLc、Nrf2 mRNA和蛋白表达并没有影响(均P>0.05)。Nrf2基因敲除显著延长血瘀证孕小鼠子代断崖回避的达标日龄(P<0.05)。总之,莪术对正常小鼠子代神经发育毒性效应较血瘀证小鼠明显, Nrf2分子参与莪术"有故无殒"现象。