基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨高良姜总黄酮对铅诱导HK-2细胞损伤的保护作用

目的 探讨高良姜总黄酮对铅(Pb)诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)细胞损伤的保护作用。方法 体外培养HK-2细胞,MTT法检测不同质量浓度高良姜总黄酮和Pb对HK-2细胞活力的影响。设置对照组、高良姜总黄酮对照组、模型组和高良姜总黄酮组,除对照组和高良姜总黄酮对照组外各组均给予200μmol/L Pb诱导细胞损伤,同时高良姜总黄酮对照组和高良姜总黄酮组给予100μg/mL高良姜总黄酮干预24 h。通过Hoechst 33258荧光染色法联合annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光显微镜法观察Pb诱导及高良姜总黄酮干预对细胞内ROS水平的影响,试剂盒法检测细胞内氧化应激指标ROS、MDA、GSH水平和GSH-Px、CAT、SOD活性,ELISA法检测细胞培养上清液IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western bolt法检测细胞Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白及caspase-3蛋白表达。结果 与对照组比较,高良姜总黄酮(12.5~200μg/mL)对HK-2细胞活力没有显著影响。与模型组比较,高良姜总黄酮可减少Pb诱导HK-2细胞的凋亡(P<0.05),减轻细胞皱缩等细胞凋亡形态学变化,上调细胞内SOD、CAT、GSH-Px活性及GSH水平(P<0.05),降低细胞内MDA、ROS水平(P<0.05),上调Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白及caspase-3蛋白表达(P<0.05)。结论 高良姜总黄酮可能通过调控Keap1/Nrf2/ARE信号通路相关蛋白表达,对Pb诱导HK-2细胞损伤起保护作用。

枸杞籽油对亚急性衰老大鼠睾丸Nrf2/ARE通路和氧化损伤的影响

目的探索枸杞籽油对亚急性衰老大鼠睾丸Nrf2/ARE通路和氧化损伤的影响。方法将60只8周龄♂SD大鼠中的50只(空白组10只)颈部皮下注射D-半乳糖125 mg·kg^(-1),持续8周建立亚急性衰老大鼠模型,β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)观察衰老细胞,HE观察睾丸形态,ELISA检测血清中睾酮(testosterone,T)、促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)和黄体生成素(luteinizing hormone,LH)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平,免疫组化和Western blot检测衰老、氧化损伤和Nrf2/ARE通路相关因子表达。结果模型鉴定成功后,经枸杞籽油干预,改善了睾丸形态,下调β-gal和γH2AX表达;升高血清中SOD、GSH以及T、FSH水平及降低MDA和LH水平(P<0.05);上调睾丸组织Nrf2、GCLC、NQO1和SOD2蛋白表达水平(P<0.05)以及支持细胞中Nrf2核表达。结论枸杞籽油激活亚急性衰老大鼠睾丸Nrf2/ARE信号通路表达,降低其氧化损伤,改善其激素水平。

补阳还五汤加减通过Nrf2/ARE信号通路防治动脉粥样硬化的机制研究

基于益心祛瘀化痰法,探讨补阳还五汤加减调控核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)/抗氧化反应元件(antioxidant response element, ARE)信号通路防治动脉粥样硬化的机制。本研究选取ApoE~(-/-)小鼠进行模型复制,模型复制成功后分为模型组、补阳还五汤加减低、中、高剂量组、阿托伐他汀组、C57BL/6J背景的ApoE~(-/-)小鼠空白组。第9周开始灌胃,连续灌胃4周。HE及油红O染色观察小鼠主动脉窦病理学变化;免疫组化法检测高级氧化蛋白产物(advanced oxidative protein product, AOPP)、细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)表达水平;生化分析仪测定血脂表达水平;ELISA法检测丙二醛(malondialdehyde, MDA)、超氧化歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)表达水平;Western blot法检测沉默信息调节因子1(sirtuin1,SIRT1)、Nrf2、血红素氧化酶1(heme oxygenase-1,HO-1)及醌氧化还原酶l(NAD(P)H:quinone oxidoreductase, NQO-1)蛋白表达;RT-PCR法检测HO-1、NQO1基因的mRNA表达。结果显示,与模型组比较,补阳还五汤加减能够改善AS模型小鼠主动脉窦病理学改变(P<0.01);降低主动脉斑块中AOPP、ROS表达水平(P<0.01);升高小鼠血浆中高密度脂蛋白胆固醇表达水平(P<0.01),降低总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇表达水平(P<0.01);升高SOD、GSH-Px表达水平(P<0.01),降低MDA表达水平(P<0.01);上调小鼠主动脉中SIRT1、Nrf2、HO-1及NQO1蛋白表达水平(P<0.01);并可以上调小鼠主动脉中HO-1、NQO1基因的mRNA表达(P<0.01)。提示补阳还五汤加减通过调控氧化应激损伤发挥抗AS的作用,可能与Nrf2/ARE信号通路活化有关。

红景天苷调节Nrf2/ARE信号通路对氧糖剥夺再灌注诱导的神经元铁死亡的影响

目的 探讨红景天苷调节核因子-E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)诱导的神经元铁死亡的影响。方法 将小鼠神经元细胞HT22随机分为对照组、模型组、红景天苷低剂量(20μmol/L)组、红景天苷高剂量(40μmol/L)组、红景天苷(40μmol/L)+ML385(Nrf2抑制剂,1μmol/L)组,除对照组外其余组细胞均进行OGD/R诱导。通过MTT和CCK-8法检测各组细胞活性和增殖能力;铁试剂盒检测细胞内铁浓度;商品化试剂盒检测各组细胞GPX4、SOD、MDA、ROS活性;透射电镜观察大鼠神经元超微结构的变化;Western Blot检测GPX4、COX2、ACSL4及NRF2/ARE信号通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组神经元细胞超微结构被破坏,线粒体缩小,嵴消失,外膜破裂,细胞活力和增殖率、GPX4、SOD活性、Nrf2、HO-1、GPX4蛋白表达显著降低,Fe^(2+)浓度、MDA、ROS活性、COX2、ACSL4蛋白表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较,红景天苷低、高剂量组细胞超微结构明显改善,细胞活力和增殖率、GPX4、SOD活性、Nrf2、HO-1、GPX4蛋白表达显著升高,Fe^(2+)浓度、MDA、ROS活性、COX2、ACSL4蛋白表达显著降低(P<0.05)。与红景天苷高剂量组比较,红景天苷+ML385组显著逆转了上述指标变化。结论 红景天苷能够激活Nrf2/ARE信号通路抑制OGD/R诱导的神经元铁死亡。

基于Keap1/Nrf2/ARE通路的中医药干预骨关节炎研究进展

骨关节炎是临床上常见的一种慢性筋骨疾病,其病程缠绵,反复发作,发病机制复杂,与氧化应激反应相关。Keap1/Nrf2/ARE信号通路是细胞氧化应激反应中的关键通路,其调控的下游抗氧化蛋白/酶在细胞防御保护中发挥重要作用。骨关节炎的病程中Nrf2、NQO1、HO-1等关键蛋白表达受到抑制,组织抗氧化及抗炎能力减弱,软骨细胞损伤,软骨结构破坏。目前西医的治疗侧重于缓解症状,但不能逆转骨关节炎的进展,急需有效的非手术策略来延缓骨关节炎的病理过程。近年来,大量基础及临床试验表明Keap1/Nrf2/ARE通路是中医药治疗骨关节炎的潜在靶点之一。基于骨关节炎本虚标实的病机,中医药以补虚、化瘀、解毒等法调控Keap1/Nrf2/ARE信号通路,在发挥抗氧化及抗炎作用同时,还能调节软骨细胞外基质的稳态,发挥对骨关节炎的治疗作用。本文总结了中医药靶向干预Keap1/Nrf2/ARE信号通路防治骨关节炎的作用机制,旨在为中医药更合理的运用临床防治骨关节炎提供理论基础。

基于NF-κB与NRF2/ARE通路探索紫杉醇-比伐卢定介入涂层抗血管再狭窄的有效性及分子机制

目的明确紫杉醇-比伐卢定介入涂层(Luo Fengning,LFN)对管腔再狭窄的影响及分子机制。方法体内动物实验分组:WT假手术组、WT血管拉伤组、NRF2-/-血管拉伤组、NF-κB-/-血管拉伤组、WT血管拉伤+LFN干预组、NRF2-/-血管拉伤+LFN干预组、NF-κB-/-血管拉伤+LFN干预组;体外细胞实验分组:第一批分组:Control组、LPS造模组、LPS+LFN组、LPS+LFN+NF-κB敲减组、LPS+LFN+IκB敲减组、LPS+LFN+NF-κB过表达组、LPS+LFN+IκB过表达组。第二批分组:Control组、LPS造模组、LPS+LFN组、LPS+LFN+NRF2敲减组、LPS+LFN+Keap1敲减组、LPS+LFN+NRF2过表达组、LPS+LFN+Keap1过表达组。采用HE染色法检测血管组织病理变化、免疫荧光染色检测血管组织增殖活性、CCK-8法检测细胞增殖率、Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力、Q-PCR和Western blot法测定血管组织和细胞中NF-κB与NRF2/ARE通路关键靶标及配体的基因和蛋白表达。结果LFN对血管拉伤模型大鼠的血管内膜增生过程具有显著抑制作用,可在有效阻断管腔再狭窄的同时拮抗血栓形成。与WT血管拉伤组相比,LFN干预后可上调IκB、NRF2、NQO-1和HO-1基因与蛋白表达(P<0.05,P<0.01),下调Keap-1基因和蛋白表达量(P<0.05,P<0.01),此调控作用在NRF2-/-突变型大鼠中可被逆转。NF-κB、NRF2及其配体敲减或过表达可影响LFN对HCASMC模型迁移和侵袭能力的拮抗作用,并可不同程度削弱其对细胞内NF-κB与NRF2/ARE通路关键蛋白和基因表达的调控能力。结论LFN抗血管再狭窄具备体内应用有效性,该效应的部分机制是LFN通过对NF-κB和NRF2/ARE通路上核转录因子及其关键配体的表达进行双通道正反两个方向的统一调控而实现。

银杏叶提取物激活Nrf2/ARE通路改善慢性间歇性低氧诱导大鼠血管内皮功能障碍

目的探讨银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract,GBE)对慢性间歇性低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)诱导大鼠血管内皮功能障碍的影响及相关机制。方法构建CIH大鼠模型,并用50、100 mg·kg^(-1)的GBE灌胃,检测各组大鼠尾动脉收缩压(systolic blood pressure,SBP);HE染色检测主动脉组织形态;DAF-FM DA染色和硝酸还原酶法检测NO水平;ELISA法检测血清ET-1、TNF-α、IL-6水平;DHE染色检测主动脉组织活性氧水平;试剂盒检测血清MDA、SOD、GSH-Px水平;Western blot检测主动脉组织VCAM-1、ICAM-1、细胞核Nrf2、HO-1、NQO1水平。结果GBE明显降低CIH大鼠的尾动脉SBP、ET-1、活性氧、MDA、VCAM-1、ICAM-1、TNF-α、IL-6水平,明显增加NO、SOD、GSH-Px、细胞核Nrf2、HO-1、NQO1水平。GBE明显改善CIH大鼠主动脉组织形态学。结论GBE可改善CIH模型大鼠血管内皮功能障碍,降低血压,其机制可能与激活Nrf2/ARE通路、抑制氧化应激与炎症反应有关。

谷胱甘肽通过Nrf2/ARE通路改善四氯化碳诱导大鼠肝损伤和肝纤维化

目的探讨谷胱甘肽(GSH)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝损伤和肝纤维化的疗效和保护机制。方法利用CCl4处理雄性SD大鼠,分别给予生理盐水和谷胱甘肽治疗。收集大鼠血液以测量生化指标(ALT、AST、ALP)和炎症因子(IL-6、TNF-a和IL-1β),收集肝脏组织进行组织病理学分析、纤维化标志蛋白、促纤维化信号分子、Nrf2/ARE通路相关蛋白的表达分析。结果谷胱甘肽改善了CCl4诱导的肝损伤,降低了炎症因子的表达。谷胱甘肽还通过减少纤维化标志蛋白和促纤维化信号分子的表达,以及降低脂质过氧化物和丙二醛的水平和提高谷胱甘肽含量来改善肝脏氧化应激。此外,谷胱甘肽可以激活Nrf2/ARE通路,提高Nrf2下游抗氧化基因的表达,减轻CCl4诱导的大鼠肝脏氧化应激。结论谷胱甘肽在体内保护大鼠肝脏免受CCl4引起的损伤和纤维化,这与抑制HSC活化和减轻氧化应激有关。

基于Nrf2/ARE信号通路探讨宽胸气雾剂对血瘀型大鼠心脏的保护及机制

目的探讨宽胸气雾剂(KA)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用及其可能机制。方法随机将30只健康的SD雄性大鼠分为假手术(SHAM)组、MIRI组、MIRI+KA组,给药(生理盐水)28 d后构建MIRI模型,采用结扎冠状动脉方法建立小鼠MIRI模型,术后继续对MIRI+KA组进行KA干预,每次1揿,每日2次。SHAM组和MIRI组给予生理盐水,每日1次。术后收集小鼠心肌组织,称取小鼠心脏重量,HE染色观察组织病理学改变,免疫印迹法检测氧化应激和细胞凋亡相关蛋白表达。结果MIRI组小鼠心肌间质出现明显的炎症细胞浸润,促氧化应激蛋白MDA表达升高,SOD、CAT蛋白表达降低(P<0.05)。KA处理可使MIRI诱导的小鼠心脏重量和心脏重量指数明显降低,心肌间质炎症细胞浸润减少,SOD蛋白表达改善。此外,KA处理还能显著增加转录因子NR-F-相关因子2(Nrf2)蛋白表达,降低抗氧化反应元件(ARE)蛋白表达(P<0.05)。结论KA可以改善血瘀型大鼠的MIRI,其心肌保护机制可能与Nrf2/ARE信号通路有关。

黄酮类化合物调控Keap1-Nrf2/ARE信号通路的抗氧化机制及其在畜禽生产中应用的研究进展

黄酮类化合物属于多酚类化合物,广泛存在于天然植物中,具备很强的抗氧化能力。近年来,越来越多的研究证明黄酮类化合物作为饲料添加剂有益于畜牧生产。Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1-核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件(Keap1-Nrf2/ARE)是增强机体抗氧化能力的关键信号通路,参与抵抗外界氧化应激。黄酮类化合物主要通过调控Keap1-Nrf2/ARE通路,激活上下游关键因子,提高抗氧化酶的活性,提高机体抗氧化能力,从而改善畜禽生长性能、繁殖性能和机体免疫力。作者通过综述Keap1-Nrf2/ARE分子结构和发挥抗氧化作用的机制,以及黄酮类化合物调控Keap1-Nrf2/ARE信号通路及其在畜禽生产中的应用研究,旨在为黄酮类化合物作为饲料添加剂的进一步开发和应用提供参考。

基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨丹皮酚改善酒精性肝、脑损伤小鼠氧化应激损伤与炎症的作用机制

目的探讨丹皮酚基于Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)/核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)信号通路改善乙醇刺激所致小鼠肝、脑炎症和氧化应激损伤的作用机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为空白组,模型组,水飞蓟宾组(36.8 mg/kg),丹皮酚高、中、低(480、240、120 mg/kg)剂量组,每组15只;适应期各组小鼠自由饮用Liber-DeCarli对照液体饲料,模型复制期空白组小鼠自由饮用Lieber-DeCarli对照液体饲料,其他组小鼠自由饮用Lieber-DeCarli乙醇液体饲料并连续灌胃相对应的药液10 d;测定小鼠血脂[三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)]、肝功能[丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)]、炎症因子[白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1α、IL-1β、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α]以及氧化应激指标[过氧化氢酶(catalase,CAT)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(super oxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)]水平;采用苏木精—伊红染色法、油红O染色观察各组小鼠肝、脑组织形态变化;采用Western blot法、免疫荧光法以及qRT-PCR法检测小鼠肝、脑组织Keap1/Nrf2/ARE信号通路相关蛋白及mRNA表达水平。结果与模型组比较,丹皮酚高剂量组小鼠体质量显著增加(P<0.05),血脂(TG、TC)、肝功能(ALT、AST)、炎症因子(IL-6、IL-1α、IL-1β、TNF-α)、氧化应激指标(CAT、GSH、SOD)水平显著升高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05);小鼠肝、脑组织Nrf2、血红素氧合酶-1、醌NADH脱氢酶1、谷氨酸—半胱氨酸连接酶催化亚基蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05),Keap1蛋白及mRNA表达水平显著降低(P<0.05);丹皮酚高剂量组小鼠肝、脑组织病理状态明显改善。结论丹皮酚能显著减轻乙醇诱导的小鼠肝、脑炎症和氧化应激损伤,其机制可能是通过调控Keap1/Nrf2/ARE信号通路实现的。

输合配穴针刺法对小儿缺氧缺血性脑病模型大鼠Nrf2/ARE信号通路的影响

目的探讨输合配穴针刺法对小儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)模型大鼠Nrf2/ARE信号通路的影响。方法将120只健康新生大鼠随机分为输合配穴针刺组、模型组和空白对照组,再将各个组的新生大鼠平均分成4个时间小组即为0、3、7、14 d,每个小组10只新生大鼠。实验采用颈动脉结扎法建立缺血缺氧性脑病模型。输合配穴针刺组于造模成功后给予新生大鼠患侧输合配穴针刺法进行针刺治疗,模型组对新生大鼠仅进行造模操作,空白对照组不对新生大鼠做任何处理。实验采用Western blot方法和RT-PCR检测法对新生大鼠脑组织中Nrf2、Keap1和HO-1的蛋白表达情况及mRNA相对表达量进行检测并对结果进行对比分析。结果模型组于造模7 d后Nrf2、Keap1和HO-1蛋白表达和mRNA相对表达量最多,差异具有统计学意义(P<0.01)。输合配穴针刺组中与相对应时间点的模型组对比,都明显高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.01)。说明输合配穴针刺法对HIBD模型Nrf2/ARE信号传导通路的是有影响的。结论输合配穴针刺法通过促进Nrf2/ARE信号通路上的关键蛋白因子Nrf2的表达,在细胞中与Keap1解离后转移至细胞核,从而激活下游蛋白因子HO-1的表达,减轻HIBD对机体的氧化损伤,以达到保护脑细胞和脑组织的目的。

中药有效成分基于Nrf2/ARE信号通路改善脊髓损伤的研究述评

脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是最具破坏性的中枢性损伤之一,可引起受损部位以下肢体和躯干严重的运动功能障碍,甚至永久性残疾或死亡。核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)在抗炎、抗氧化应激、抑制细胞凋亡、维持线粒体功能等方面发挥重要作用。中药作为天然诱导剂,其中含有诸多抗炎和抗氧化活性成分,是激活Nrf2通路的有效途径。中药及其有效成分调控Nrf2信号通路治疗SCI已成为现代医学研究热点。本文综述了Nrf2信号通路及其关键靶点蛋白与SCI的关系,对调控Nrf2信号通路治疗SCI的中药有效成分及可能的作用机制进行系统总结,以期为靶向激动Nrf2治疗SCI的创新药物研发与应用提供参考。

柴胡皂苷B通过Nrf2/ARE信号缓解Caco-2细胞氧化损伤

目的探讨柴胡皂苷B(saikosaponin B,SSB)对棕榈酸(palmitic acid,PA)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS联合诱导的人结直肠腺癌细胞(Caco-2)屏障损伤的保护作用及潜在机制。方法利用Caco-2细胞构建肠道屏障模型,采用随机数字表法将细胞分为对照组(CON组,n=6),模型组(PA+LPS组,n=6)和柴胡皂苷B干预组(PA+LPS+SSB组,n=6),通过测量跨膜电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)值和紧密连接蛋白的表达水平,评价SSB对Caco-2细胞屏障损伤的保护作用。通过检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)和脂质过氧化物含量评估细胞氧化压力。通过定量聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹法检测SSB对Nrf2/ARE信号通路相关基因及蛋白的表达水平的影响。通过敲降Nrf2验证SSB改善细胞屏障功能是否通过Nrf2/ARE途径。结果PA+LPS+SSB组Caco-2细胞的TEER值、ZO-1和Occludin-1的蛋白水平显著高于PA+LPS组(P<0.05)。PA+LPS组细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)、4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)、蛋白羰基含量(protein carbonyl content,PCC)和ROS含量均显著高于对照组(P<0.05),PA+LPS+SSB组的4-HNE、MDA、ROS含量和PCC均显著低于PA+LPS组(P<0.05)。PA+LPS+SSB组细胞内Nrf2和p-Nrf2的蛋白水平、Nqo1和Ho-1的m RNA水平、过氧化氢酶(catalase,CAT)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)酶活性均显著高于PA+LPS组(P<0.05)。PA+LPS+SSB^(siNrf2)组细胞中ZO-1和Occludin-1的蛋白水平和转录水平均显著低于PA+LPS+SSB组(P<0.05),ROS、4-HNE、MDA含量和PCC均显著高于PA+LPS+SSB组(P<0.05)。结论SSB通过激活Nrf2/ARE信号通路增加了肠上皮细胞的抗氧化能力,抑制了PA和LPS引起的Caco-2细胞氧化应激和屏障损伤,对肠上皮细胞具有良好保护作用。

橙皮素调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路对D-半乳糖诱导的白内障大鼠氧化应激损伤的影响

目的:探究橙皮素对D-半乳糖诱导的白内障大鼠氧化应激损伤的影响以及调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路的机制。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、橙皮素低、高剂量组、橙皮素高剂量+Nrf2抑制剂ATRA组,除假手术组,其余组均通过皮下注射200mg/kg的D-半乳糖建立白内障大鼠模型。阳性对照组灌胃复明胶囊(30mg/kg),橙皮素低、高剂量组分别灌胃橙皮素(50mg/kg、150mg/kg),橙皮素高剂量+ATRA组先灌胃橙皮素(100mg/kg),再腹腔注射ATRA(10mg/kg)。裂隙灯观察双眼晶状体组织浑浊程度;HE观察各组晶状体上皮组织形态学变化;TUNEL法检测晶状体上皮组织细胞凋亡率;ELISA测定晶状体中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;Western blotting检测晶状体中Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的表达水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠模型组晶状体上皮组织出现细胞排列紊乱、水肿、间隙增大等病变;晶状体浑浊程度、上皮细胞凋亡率、Keap1、细胞质Nrf2蛋白表达升高,SOD、CAT、GSH-Px活性、细胞核Nrf2、HO-1蛋白表达均降低(P<0.05)。与模型组相比,阳性对照组和橙皮素低、高剂量组大鼠晶状体上皮损伤减轻;晶状体浑浊程度、上皮细胞凋亡率、Keap1、细胞质Nrf2蛋白表达降低,SOD、CAT、GSH-Px活性、细胞核Nrf2、HO-1蛋白表达均升高(P<0.05)。Nrf2抑制剂ATRA可显著减弱高剂量橙皮素对白内障大鼠晶状体损伤的改善作用。结论:橙皮素可减轻D-半乳糖诱导的白内障大鼠氧化应激损伤,可能通过抑制Keap1表达,促进Nrf2/ARE通路活化实现。

Keap1/Nrf2/ARE信号通路调控脑出血后氧化应激的研究进展

脑出血是一种常见的、严重的脑卒中亚型,具有较高的发病率和死亡率,多数患者伴有不同程度的神经功能障碍,给全球带来了重大的健康和社会经济问题。脑出血急性期所诱发的氧化应激可引起机体发生氧化应激损伤,是引起继发性脑损伤的关键因素。研究表明,Keap1/Nrf2/ARE通路是最重要的抗氧化应激通路,该通路被激活后,可促进抗氧化应激酶的表达,从而减轻氧化应激损伤。现就Keap1/Nrf2/ARE通路改善脑出血后氧化应激损伤的研究进展进行综述,旨在为临床治疗脑出血患者提供新的治疗思路和客观依据。

温针灸调节Nrf2/ARE通路对卵巢功能减退大鼠氧化应激损伤的保护作用

目的观察温针灸通过调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路对卵巢功能减退(DOR)大鼠氧化应激损伤的修复作用。方法将动情周期正常的40只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、激素组及温针灸组,每组10只。除空白组外,其余组大鼠采用雷公藤多苷片灌胃14 d方法制备DOR模型。造模成功后,激素组给予雌激素替代疗法干预,温针灸组取关元、气海、中极、双侧肾俞进行温针灸干预,均干预14 d。采用阴道涂片观察各组大鼠性周期,ELISA法检测血清中雌二醇(E_(2))、促黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、抗苗勒激素(AMH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平,HE染色观察卵巢组织病理形态,Western blot法及RT-PCR法检测卵巢组织中Nrf2、醌氧化还原酶1(NQO1)、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白和mRNA表达情况。结果与空白组比较,模型组大鼠均出现动情周期紊乱;血清中E_(2)、AMH、SOD、GSH-Px水平均明显降低(P均<0.05),LH、FSH、MDA水平均明显增高(P均<0.05);闭锁卵泡数明显增多(P<0.05),成熟卵泡数明显减少(P<0.05);卵巢组织中Nrf2、NQO1、HO-1蛋白和mRNA表达量均明显降低(P均<0.05)。与模型组比较,温针灸组和激素组大鼠动情周期紊乱比例明显降低(P均<0.05);血清中E_(2)、AMH、SOD、GSH-Px水平均明显升高(P均<0.05),LH、FSH、MDA水平均明显降低(P均<0.05);闭锁卵泡数明显减少(P均<0.05),成熟卵泡数明显增多(P均<0.05);卵巢组织中Nrf2、NQO1、HO-1蛋白和mRNA表达量均明显升高(P均<0.05)。结论温针灸对DOR大鼠具有明显保护作用,其作用机制可能与调控Nrf2/ARE信号通路活化,改善卵巢组织氧化应激状态相关。

清肾颗粒对腺嘌呤致肾纤维化大鼠Nrf2/ARE信号通路及氧化应激的干预作用

目的:观察清肾颗粒对腺嘌呤致肾纤维化大鼠的核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化原件(ARE)信号通路及氧化应激的干预作用。方法:实验分为正常组、模型组、清肾颗粒低、中、高剂量组,每组10只。采用腺嘌呤灌胃的方法制备肾纤维化大鼠模型。清肾颗粒低、中、高剂量组分别给予清肾颗粒水溶液按4.0g·kg^(-1)·d^(-1)、8.0g·kg^(-1)·d^(-1)和16.0g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,正常组、模型组大鼠用等量生理盐水(4ml)灌胃,持续8周。8周后腹主动脉无菌采血,并摘取肾脏组织。检测各组大鼠的血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、血尿酸(UA);HE和Masson染色观察肾脏病理;Western Blot法检测肾组织Nrf2、HO-1蛋白表达水平;流式细胞术测定肾组织中活性氧(ROS)含量。结果:与正常组比较,模型组BUN、Scr和UA浓度显著增加,ROS含量升高,肾组织Nrf2、HO-1显著降低,肾脏病理可见大量肾小管萎缩和间质纤维化,炎症细胞浸润。与模型组比较,清肾颗粒低、中、高剂量组BUN、Scr和UA浓度均显著降低,ROS含量降低,肾组织Nrf2、HO-1表达显著升高,肾脏病理损害和炎症细胞浸润减轻。其中清肾颗粒高剂量组的BUN、Scr和UA浓度显著低于中、低剂量组,而中剂量组显著低于低剂量组。肾脏病理损害程度以高剂量组最轻,其次分别为中、低剂量组。清肾颗粒高剂量组的ROS含量显著低于中、低剂量组,肾组织Nrf2、HO-1表达显著高于中、低剂量组,差异均有统计学意义。结论:清肾颗粒可以通过上调腺嘌呤致肾纤维化大鼠的Nrf2/ARE活性,减轻氧化应激反应,进而减轻肾损伤,改善肾组织结构及功能,延缓肾纤维化进展。

复方脑肽节苷脂辅助治疗急性脑梗死早期神经功能恶化的疗效及对Nrf2/ARE信号通路的影响

目的:探究复方脑肽节苷脂辅助治疗急性脑梗死(ACI)早期神经功能恶化(END)的疗效及对转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路的影响。方法:选取84例ACI END患者作为研究对象,随机分为研究组与常规组各42例。常规组采用常规治疗,研究组在常规组基础上加用复方脑肽节苷脂辅助治疗。比较两组疗效、治疗前后美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分、脑血流状态[脑中动脉平均血流速度(Vm)、收缩期血流速度(Vs)、阻力指数(RI)]、氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、8异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)、丙二醛(MDA)]、Nrf2/ARE信号通路相关蛋白表达情况、不良反应发生率。结果:研究组总有效率高于常规组(P<0.05);治疗后研究组NIHSS评分低于常规组,MoCA评分高于常规组(P<0.05);治疗后研究组Vm、Vs较常规组高,RI较常规组低(P<0.05);治疗后研究组血清8-iso-PGF2α、MDA水平较常规组,SOD高于常规组(P<0.05);治疗后研究组Nrf2、ARE、醌NADH脱氢酶1(NQO1)水平高于常规组(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:复方脑肽节苷脂辅助治疗ACI END效果显著,可有效增加脑血流灌注,能通过调节Nrf2/ARE信号通路相关蛋白表达减轻氧化应激损伤,从而促进神经功能及认知功能改善,安全性高。

橙皮素调控Nrf2/ARE通路改善载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的实验研究

目的:基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应原件(ARE)通路探讨橙皮素对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)的影响。方法:将48只ApoE^(-/-)小鼠用高脂饮食喂养12周后,采用左颈总动脉缩窄性套管法建立ApoE^(-/-)小鼠AS模型。模型制备成功后将ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、橙皮素低剂量组、橙皮素高剂量组、鸦胆子苦醇组,每组12只。另取12只雄性C57BL/6J小鼠作为对照组,给予普通饲料喂养。橙皮素低、高剂量组小鼠分别给予50 mg/kg、100 mg/kg橙皮素灌胃,每日1次;鸦胆子苦醇组小鼠灌胃100 mg/kg橙皮素,隔天腹腔注射Nrf2抑制剂鸦胆子苦醇2 mg/kg,连续给药12周;对照组和模型组给予等量0.5%羧甲基纤维素钠灌胃。检测各组血清血脂水平以及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;油红O染色观察主动脉斑块形成和主动脉窦脂质沉积情况,并计算损伤面积百分比;荧光探针测定主动脉中活性氧(ROS)的生成;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测主动脉中Nrf2/ARE通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠主动脉ROS增加,血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)、MDA、主动脉斑块损伤和主动脉窦脂质损伤面积百分比、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)的表达均明显升高,血清SOD、GSH-Px活性、主动脉Nrf2、还原型辅酶/醌氧化还原酶(NQO1)、血红素加氧酶1(HO-1)的表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,橙皮素低、高剂量组小鼠ROS降低,血清TC、TG、LDL-C、ox-LDL、MDA水平、主动脉斑块损伤和主动脉窦脂质损伤面积百分比、Keap1均明显下降,HDL-C、SOD、GSH-Px活性、Nrf2、NQO1、HO-1的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);鸦胆子苦醇可逆转高剂量橙皮素减轻ApoE^(-/-)小鼠AS病变的作用。结论:橙皮素可能通过激活Nrf2/ARE通路,维持内皮细胞中的氧化还原平衡,减轻ApoE^(-/-)小鼠AS病变,具有较好的抗AS作用。