川芎嗪对顺铂耳毒性大鼠耳蜗组织Nrf2/NQO1信号通路相关蛋白表达影响

目的探讨川芎嗪(即四甲基吡嗪,tetramethylpyrazine,TMP)对顺铂耳毒性大鼠的作用机制,以及血清中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)含量变化、耳蜗组织中肌腱膜纤维肉瘤癌基因(musculoaponeurotic fibrosarcoma,Maf)、血红素氧合酶1(HO-1)和还原型辅酶/醌氧化还原酶(NQO1)蛋白表达对其的影响。方法采用腹腔注射顺铂(4 mg/kg)诱导顺铂耳毒性大鼠模型。将大鼠随机分为空白对照组、空白+TMP组、模型对照组(M组)、模型+TMP组。通过比较大鼠听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)听力阈值的变化、基底膜铺片技术观察内耳毛细胞纤毛形态变化(硝酸银染色),评估TMP对顺铂耳毒性大鼠耳蜗毛细胞结构的影响。比色法测定大鼠血清中GSH-Px含量变化。Western blot检测法检测各组大鼠耳蜗组织中Maf、HO-1和NQO1的表达变化。结果与空白组相比,模型组大鼠血清中抗氧化酶GSH-Px活性显著下降(P<0.05),耳蜗组织中Maf、NQO1和HO-1基因表达均呈上升趋势;与模型对照组比较,模型+TMP组能够显著提高药物性耳聋大鼠血清中抗氧化酶GSH-Px(P<0.05)活性,增加耳蜗组织中Maf,NQO1和HO-1的蛋白的相对表达(P<0.05)。结论TMP对药物性耳聋大鼠病理损伤具有恢复作用,其机制可能与血清中GSH-Px含量变化和Nrf2/NQO1信号通路相关蛋白的表达有关。

AMPK/NRF2/NQO1信号通路与SD大鼠酒精性心肌病的相关性研究

目的明确单磷酸腺苷依赖的蛋白激酶/核因子E2相关因子2/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸脱氢酶醌1(Adenosine monophosphate dependent protein kinase/nuclear factor E2-related factor 2/NADPH dehydrogenase quinone 1,AMPK/NRF2/NQO1)信号通路与SD大鼠的酒精性心肌病(alcoholic myocardiopathy,ACM)的关系。方法选用健康的8周龄SD大鼠构建ACM模型,采用随机数字表法分成2组,全价颗粒饲料+饮水组(对照组n=24只),全价颗粒饲料+饮酒组(实验组n=24只)。实验组大鼠于每日10:00、17:00给予定量[20 g/(kg·d)]20%浓度酒精喂养(灌胃);正常对照组同时给予等量蒸馏水(灌胃)。从造模开始,实验组以20%酒精浓度持续喂养12周。记录大鼠一般情况。分别于第4周、第8周、第12周实施超声心动图与病理分析。马松染色(Masson)检测大鼠心肌纤维化,免疫组化及RT-qpcr法检测大鼠心肌组织中AMPK、NRF2、NQO1蛋白及基因的表达,分析其关系,从蛋白及基因水平探讨ACM的发病机制。结果心脏彩超:实验组大鼠与对照组相比左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)左室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS)均下降(P<0.05);病理:对照组HE染色无异常,实验组心肌细胞出现充血水肿等变性;Masson染色:与对照组相比,实验组大鼠心肌纤维化加重;免疫组化:与对照组相比,实验组大鼠心肌AMPK、NRF2、NQO1蛋白表达减弱,染色变浅;RT-qpcr:与对照组相比,实验组大鼠心肌AMPK、NRF2、NQO1基因表达减弱(P<0.05)。结论大鼠心肌纤维化及损伤程度与饮酒时间及浓度积累呈正相关,随着饮酒时间的延长,酒精在体内蓄积,心肌纤维化及损伤程度更严重,抑制AMPK/NRF2/NQO1信号通路可能是分子机制。

Nrf2/NQO1信号通路在胃癌干细胞氧化应激反应中的作用机制

目的:观察核因子E2相关因子2(Nrf2)、醌氧化还原酶(NQO1)在胃癌干细胞和正常胃黏膜组织中的表达,探讨Nrf2/NQO1信号通路在胃癌干细胞氧化应激反应中的作用机制。方法:采用肿瘤球悬浮分选法从60例胃癌组织标本中分选胃癌干细胞,干细胞随机分为干细胞初分组和激活组。30例正常胃黏膜组织作为对照。采用Western blotting法检测各组Nrf2、NQO1蛋白表达水平和超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活性。结果:与正常对照组比较,干细胞初分组和激活组Nrf2、NQO1的表达水平升高(P<0.05),SOD活性显著降低,MDA活性则显著升高(P<0.05);与干细胞初分组比较,激活组Nrf2、NQO1的表达水平显著升高(P<0.05),SOD活性显著增强,MDA活性显著下降(P<0.05)。结论:激活Nrf2/NQO1通路可以调节胃黏膜组织中SOD和MDA的活性,增强细胞对氧化应激的耐受性,发挥保护细胞的作用。

督脉隔药灸联合水凝胶多功能复合敷料对压力性损伤大鼠Nrf2/HO-1/NQO1信号通路的影响

目的观察督脉隔药灸联合水凝胶多功能复合敷料对压力性损伤大鼠创面修复及核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2 related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)/NADPH醌氧化还原酶1(NADPH quinone oxidoreductase 1,NQO1)信号通路的影响。方法选取50只SPF级SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、水凝胶敷料组、督脉隔药灸组、联合干预组,每组10只。除假手术组外,其余4组借助压力装置构建压力性损伤大鼠模型。分组干预并记录各组大鼠的压力性损伤修复情况及创面组织病理变化;借助ELISA检测各组大鼠的血清炎性因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6以及氧化应激因子丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平;Western blot与RT-PCR检测各组大鼠创面肉芽组织Nrf2、HO-1、NQO1、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白及mRNA的表达水平。结果HE染色结果显示:假手术组皮肤结构未被破坏;模型组创面肉芽组织可见明显的细胞坏死、变性及炎性细胞浸润;干预各组可见创面修复,表现为散在炎性细胞浸润,“气球样”坏死变性明显减少。Masson染色结果显示:假手术组创面皮肤组织胶原纤维较为整齐;模型组创面肉芽组织可见大面积的胶原纤维沉积、紊乱;干预各组可见不同程度的创面修复。与假手术组对比,模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平和创面肉芽组织Nrf2、HO-1、NQO1、MMP-9蛋白及mRNA的表达水平均升高(P<0.05),而创面修复率、血清SOD、GSH-Px水平均下降(P<0.05);与模型组比较,水凝胶敷料组、督脉隔药灸组、联合干预组的血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平均下降(P<0.05),而创面修复率、血清SOD、GSH-Px水平和创面肉芽组织Nrf2、HO-1、NQO1、MMP-9蛋白及m RNA的表达水平均升高(P<0.05),且联合干预组较其他干预组更优(P<0.05)。结论督脉隔药灸可有效促进压力性损伤的创面修复,与水凝胶多功能复合敷料联合使用效果更佳,其机制可能与督脉隔药灸抑制创面炎性反应及氧化应激,并激活Nrf2/HO-1/NQO1信号通路相关。

神经生长因子联合BMSCs-源外泌体通过Keap1/NQO1/Nrf2信号通路缓解脑出血大鼠神经损伤

目的探讨大鼠神经生长因子(rat nerve growth factor,RtNGF)联合骨髓间充质干细胞-源外泌体(BMSCs exosomes)缓解脑出血(intracerebral haemorrhage,ICH)大鼠神经损伤的疗效及其作用机制。方法制备BMSCs exosomes。60只大鼠随机分为假手术(Sham)组,ICH组,ICH+RtNGF组,ICH+BMSCs exosomes组,ICH+RtNGF+BMSCs exosomes组,每组12只。建立ICH大鼠模型,并给予RtNGF或BMSCs exosomes单独治疗或联合治疗。制备各分组大鼠脑组织石蜡组织切片,并对其进行HE染色。qPCR法测定各分组大鼠脑组织中Keap1/NQO1/Nrf2信号通路蛋白质因子mRNA的相对表达水平。免疫组化(IHC)法测定各分组大鼠脑组织中Keap1/NQO1/Nrf2信号通路蛋白质因子的表达水平。结果与Sham组相比,ICH组大鼠脑组织中存在多处明显的组织腔隙和血凝块。ICH+RtNGF组、ICH+BMSCs exosomes组和ICH+RtNGF+BMSCs exosomes组均有所改善,且ICH+RtNGF+BMSCs exosomes组缓解神经损伤效果最好。与Sham组相比,ICH组大鼠脑组织中Keap1,NQO1和Nrf2 mRNA表达水平升高(P<0.05);上述3种蛋白质IHC相对染色评分升高(P<0.05)。与ICH组相比,ICH+RtNGF组、ICH+BMSCs exosomes组和ICH+RtNGF+BMSCs exosomes组上述检测指标水平降低(P<0.05),且与ICH+RtNGF组或ICH+BMSCs exosomes组相比,ICH+RtNGF+BMSCs exosomes组上述检测指标水平更低(P<0.05)。结论RtNGF联合BMSCs exosomes治疗ICH大鼠,可通过Keap1/NQO1/Nrf2信号通路降低氧化应激缓解神经损伤。

虫草素通过激活Nrf2/HO-1/NQO1通路缓解脑缺血再灌注大鼠脑组织损伤

目的探讨虫草素(cordycepin,COR)在脑缺血再灌注(cerebral ischemia reperfusion,CI/R)大鼠脑组织损伤中的保护作用及机制。方法60只Wistar大鼠分为健康对照组、模型组、模型加药组。跳台试验和Y迷宫实验检测大鼠学习和记忆力;HE染色法检测脑组织病理变化;干湿重法计算脑含水率和脑指数;TUNEL法观测脑组织细胞凋亡情况;ELISA测定大鼠血清中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase。SOD)、丙二醛(malonic dialdehyde,MDA)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量;蛋白质印迹检测Bax/Bcl-2、cleaved cas9/cas9、cleaved cas3/cas3、Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平。结果与模型组比较,COR能剂量依赖地改善大脑组织损伤,抑制氧化应激,促进Nrf2/HO-1/NQO1通路激活。结论虫草素能够改善脑组织损伤,其作用机制与上调Nrf2通路有关。

基于Nrf2/HO-1/NQO1信号通路探讨雷公藤内酯三醇对急性肝损伤大鼠的保护机制

目的:基于核因子E2相关因子2/血红素氧合酶/醌氧化还原酶1(Nrf2/HO-1/NQO1)信号通路探究雷公藤内酯三醇对四氯化碳(CCl4)诱导急性肝损伤大鼠的保护机制。方法:纳入40只SPF级雄性SD大鼠,适应性饲养7 d,而后随机分为4组(正常组、模型组及低剂量组、高剂量组),每组10只。正常组及模型组每日尾静脉注射等体积无菌0.9%氯化钠溶液,低剂量组、高剂量组分别注射100 mg/kg、200 mg/kg雷公藤内酯三醇,均连续注射7 d,于第7天注射雷公藤内酯三醇(模型组为无菌生理盐水)3 h后,对模型组、低剂量组、高剂量组大鼠腹腔注射1 mL/kg CCl4以进行急性肝损伤模型诱导(正常组腹腔注射等体积的橄榄油溶液)。在注射CCl416 h后取大鼠血液及肝脏标本,采用HE组织化学染色法观察大鼠肝组织切片的病理学改变,并检测4组血清肝功能指标水平及肝组织Nrf2、HO-1、NQO1蛋白水平及mRNA表达量。结果:肝组织病理检查结果显示,正常组肝组织细胞排列整齐,组织结构及形态正常,细胞界限明显,胞质完整。模型组在注射CCl416 h后,肝组织出现肝细胞边界不清晰、细胞排列紊乱等肝细胞坏死特征,且可见炎症细胞浸润及肝细胞严重水肿呈气泡样变。相比于模型组,低剂量组、高剂量组的肝细胞水肿程度及肝细胞坏死特征较轻,且高剂量组轻于低剂量组。模型组、低剂量组及高剂量组的肝指数大于正常组,血清天冬氨酸转氨酶(AST)、甲氨酸转氨酶(ALT)水平高于正常组(P<0.05);模型组肝指数大于低剂量组及高剂量组,且低剂量组大于高剂量组(P<0.05);模型组AST、ALT水平高于低剂量组及高剂量组,且低剂量组高于高剂量组(P<0.05)。模型组、低剂量组及高剂量组的肝组织Nrf2、HO-1、NQO1蛋白水平及Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA表达量高于正常组,且模型组高于低剂量组及高剂量组,低剂量组高于高剂量组(P<0.05)。结论:雷公藤内酯三醇可减轻CCl4诱导的大鼠急性肝损伤,其作用机制可能与其能激活Nrf2/HO-1/NQO1信号通路以抑制肝细胞氧化损伤有关。

黄芪多糖介导Nrf2-HO-1/NQO1信号通路促进大鼠难愈创面的愈合

目的 研究黄芪多糖对创面难愈合大鼠创面的促愈合作用及对核因子E2相关因子2(nuclearfactor-erythroid2related factor 2,Nrf2)-血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)/NADPH醌氧化还原酶1(NADPH quinone oxidoreductase1,NQO1)信号通路表达的影响。方法 18只SD大鼠用于构建慢性难愈合创面模型,造模成功后随机分为模型组、黄芪多糖组、京万红软膏组,另6只大鼠纳入空白对照组,药物涂抹创面21d,期间分析大鼠创面愈合情况。苏木精-伊红染色观察各组大鼠创面组织病理变化情况,全自动生化仪检测血清中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6水平;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测大鼠创面组织中Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达水平。结果 与空白对照组比较,模型组大鼠的创面组织病理改变明显,血清SOD、GSH-Px活性下降,而MDA、TNF-α、IL-1β及IL-6水平上升(P<0.01),Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达水平升高(P<0.05)。与模型组相比,黄芪多糖组和京万红软膏组大鼠治疗第7、14、21d的创面愈合率均显著提高,创面组织病理改变均明显减轻,血清SOD与GSH-Px活性均提高,而MDA、TNF-α、IL-1β及IL-6水平均下降(P<0.01),Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论 黄芪多糖可通过抑制氧化应激及炎症反应促进大鼠难愈创面的愈合,并进一步激活组织Nrf2-HO-1/NQO1信号通路表达。

MEBT/MEBO对慢性难愈合创面组织内Nrf2/HO-1/NQO1信号通路的影响

目的探讨皮肤再生医疗技术(MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合创面组织内核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO⁃1)/醌氧化还原酶1(NQO1)信号通路的影响。方法选取90只SPF级Wistar雄性大鼠适应性饲养1周后,采用随机数表法将其随机分为空白组、对照组、模型组、MEBO组和贝复新组,每组18只。其中空白组大鼠只做备皮处理,对照组大鼠建立急性创面模型,模型组、MEBO组和贝复新组大鼠建立慢性难愈合创面模型。模型建立后,空白组大鼠备皮处皮肤及对照组、模型组大鼠创面予以生理盐水纱布换药处理,MEBO组大鼠创面予以湿润烧伤膏(MEBO)药纱换药处理,贝复新组大鼠创面予以重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶药纱换药处理,对比观察各组大鼠创面愈合率、组织病理学变化情况以及皮肤/创面组织内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及Nrf2、HO⁃1、NQO1蛋白与HO⁃1、NQO1 mRNA表达水平。结果干预第3天,各组大鼠创面愈合率尤以对照组最高、贝复新组次之(P均<0.05);干预第7、14天,各组大鼠创面愈合率尤以MEBO组最高、贝复新组次之(P均<0.05)。HE染色结果显示,干预第3、7、14天,对照组、MEBO组和贝复新组大鼠创面组织内坏死细胞及炎性细胞逐渐减少,成纤维细胞与毛细血管逐渐增多,而模型组大鼠创面组织内坏死细胞和炎性细胞减少不明显;Masson染色结果显示,干预第3、7、14天,对照组、MEBO组和贝复新组大鼠创面组织内胶原纤维由细少且紊乱逐渐趋于粗大且平整,而模型组大鼠创面组织内胶原纤维虽逐渐增粗、增多,但排列仍较紊乱。干预第7天,对照组、MEBO组和贝复新组大鼠创面组织内MDA表达水平均明显低于模型组(P均<0.05);干预第3、7天,对照组、MEBO组和贝复新组大鼠创面组织内SOD表达水平均明显高于模型组(P均<0.05)。干预第3、7天,MEBO组和贝复新组大鼠创面组织内Nrf2、HO⁃1、NQO1蛋白以及HO⁃1、NQO1 mRNA表达水平均明显高于空白组、对照组和模型组(P均<0.05),且干预第7天,MEBO组大鼠创面组织内Nrf2、HO⁃1蛋白以及HO⁃1 mRNA表达水平均明显低于贝复新组(P均<0.05)。结论MEBT/MEBO可能能够通过激活Nrf2/HO⁃1/NQO1信号通路减轻大鼠慢性难愈合创面氧化应激损伤,促进创面再生修复。

青蒿琥酯通过Nrf2/HO-1/NQO1通路改善血管性认知障碍的实验研究

目的基于Nrf2/HO-1/NQO1通路探讨青蒿琥酯对血管性认知障碍大鼠学习记忆功能的影响及机制。方法27只雄性大鼠,随机分为假手术组、溶剂对照组和青蒿琥酯组,每组9只。通过结扎双侧颈总动脉建立血管性认知障碍大鼠模型,溶剂对照组和青蒿琥酯组在造模后分别给予5%NaHCO3和50 mg/kg青蒿琥酯腹腔注射,持续给药28 d。给药后通过Morris水迷宫检测各组大鼠的学习记忆功能,检测各组大鼠海马内的超氧歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;通过劳克坚牢蓝(LFB)染色显示神经髓鞘损伤情况;通过Western Blot检测大鼠海马中Nrf2、HO-1和NQO1等蛋白表达水平。对上述3组检测结果进行统计学分析和比较。结果与假手术组相比,溶剂对照组找到平台的潜伏期显著增加(P<0.05),而穿过平台位置的次数显著减少(P<0.05);与溶剂对照组相比,青蒿琥酯组大鼠找到平台的潜伏期显著降低(P<0.05),而穿过平台位置的次数显著增加(P<0.05)。LPB染色显示,血管性认知障碍大鼠胼胝体区域可见明显的髓鞘损伤,给予青蒿琥酯后可明显改善。与假手术组相比,溶剂对照组大鼠海马SOD、GSH-Px水平显著下降(P<0.05),而MDA水平显著升高(P<0.05);与溶剂对照组相比,青蒿琥酯组大鼠海马SOD、GSH-Px水平显著升高(P<0.05),而MDA水平显著下降(P<0.05)。与假手术组相比,溶剂对照组大鼠海马内的Nrf2、HO-1和NQO1的表达水平均显著下调(P<0.05);而与溶剂对照组相比,青蒿琥酯组大鼠海马内的Nrf2、HO-1和NQO1的表达水平均显著上调(P<0.05)。结论青蒿琥酯可显著改善血管性认知障碍大鼠的学习记忆功能,其机制可能与Nrf2/HO-1/NQO1通路的激活和抑制血管性认知障碍大鼠脑内的氧化应激损伤相关。

人参皂苷对糖尿病肾病大鼠体内ColⅣ、Nrf2和NQO1表达的影响

目的研究人参皂苷对糖尿病肾病大鼠体内Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)、Nrf2和醌氧化还原酶1(NQO1)表达的影响。方法30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组),糖尿病肾病模型组(DN组),糖尿病肾病模型加人参皂苷治疗组(MG组),每组10只。对3组大鼠的体重、血糖和生化指标分别进行记录;HE染色观察大鼠肾组织形态;Western blot检测大鼠ColⅣ、Nrf2和NQO1蛋白并比较,用RT-PCR法检测mRNA的相对表达量。结果实验前3组大鼠体重差异无统计学意义(P>0.05),实验后与NC组大鼠的体重和血糖比较,DN组大鼠显著降低,血糖值显著升高(P<0.05);与DN组大鼠比较,GM组大鼠的体重和血糖值明显得到改善(P<0.05)。DN组生化指标的浓度明显高于NC组,而Ins明显降低(P<0.05);和DN组生化指标比较,GM组的浓度明显降低,Ins明显升高(P<0.05);与NC组大鼠的肾组织形态比较显示,DN组大鼠的情况明显较差,并且肾小球系膜细胞与高度增生出现;GM组大鼠的肾组织形态比DN组大鼠有明显的改善。蛋白和mRNA比较显示,DN组大鼠ColⅣmRNA和蛋白的表达均比NC组显著增高(P<0.05),Nrf2、NQO1表达明显减少,MG组和DN组大鼠比较,经过人参皂苷治疗后,其ColⅣ表达量明显降低,Nrf2、NQO1表达量显著升高(P<0.05)。结论人参皂苷可以抑制大鼠体内ColⅣ的表达,提高Nrf2和NQO1蛋白的表达,从而改善糖尿病肾病大鼠血糖及肾功能水平。

基于Nrf2/HO-1信号通路的寿胎丸对复发性流产大鼠的影响

目的观察寿胎丸对复发性流产(RSA)大鼠的影响,从Nrf2/HO-1信号通路探讨其作用机制。方法32只SD雌鼠与16只SD雄鼠合笼饲养过夜,将32只孕鼠随机分为正常妊娠组、模型组、地屈孕酮组及寿胎丸组。除正常妊娠组外,其余各组在妊娠第1~9日下午予羟基脲溶液灌胃,妊娠第10日上午予米非司酮溶液灌胃建立RSA大鼠模型。寿胎丸组第1~9日上午予寿胎丸药液灌胃,地屈孕酮组予地屈孕酮溶液灌胃,模型组和正常妊娠组予等量生理盐水灌胃。米非司酮灌胃2 h后分离子宫,计算子宫脏器指数和胚胎丢失率,HE染色观察蜕膜组织病理变化,ELISA检测血清活性氧(ROS)含量,Western blot检测蜕膜组织核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白表达,RT-qPCR检测蜕膜组织Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA表达。结果与正常妊娠组比较,模型组大鼠子宫脏器指数显著降低,胚胎丢失率显著升高(P<0.01);蜕膜细胞胞浆水肿,细胞核萎缩或消失;血清ROS含量显著增加(P<0.01),蜕膜组织Nrf2、HO-1、NQO1蛋白和mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,寿胎丸组大鼠子宫脏器指数显著升高,胚胎丢失率显著降低(P<0.05);蜕膜细胞胞浆水肿、核仁固缩明显改善;血清ROS含量显著减少(P<0.01),蜕膜组织Nrf2、HO-1、NQO1蛋白和mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论寿胎丸可能通过激活Nrf2/HO-1通路提高RSA大鼠抗氧化应激能力,从而治疗RSA。

基于Nrf2⁃NQO1/γ⁃GCS信号通路探讨续断种子方对少弱精子症模型大鼠附睾氧化损伤的保护机制

目的:探讨续断种子方对少弱精子症模型大鼠附睾氧化损伤的保护机制。方法:将40只SD大鼠随机平均分为空白组、模型组、续断种子方组(10 g/kg)、左卡尼汀组(0.1 g/kg)。除空白组外,均诱导为少弱精子症。其中空白组、模型组给予生理盐水灌胃,续断种子方组给予续断种子方溶液灌胃,左卡尼汀组给予左卡尼汀灌胃,8周后HE染色观察附睾组织结构;通过精子质量检测大鼠附睾精子浓度和活动率;采用RT-qPCR、免疫组化检测附睾组织Nrf2、NQO1、γ-GCS mRNA和蛋白表达水平。结果:(1)HE染色:空白组附睾管排列紧密规则,组织结构完整,上皮细胞排列规整,管腔精子数目多,分布均匀。模型组附睾管出现结构萎缩,排列疏松,间质变大,细胞碎片增多,精子细胞明显减少。与模型组相比,续断种子方组、左卡尼汀组附睾管腔病变具有显著改善,腔内正常精子量增多,分布均匀。(2)各组精液质量比较结果:精子密度和精子活动率:相较于空白组,其余组精子密度、活动率均明显降低(P<0.05),模型组精子密度、活动率明显降低(P<0.05);与模型组比较,续断种子方组和左卡尼汀组精子密度和活动率均明显升高(P<0.05)。(3)RT-qPCR:与空白组相比,模型组大鼠附睾Nrf2、NQO1、γ-GCS mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05),与模型相比,续断种子方组、左卡尼汀组Nrf2、NQO1、γ-GCS mRNA和蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论:续断种子方能够减轻少弱精子症大鼠氧化应激损伤,提高少弱精子症大鼠精子质量。其作用机制可能是促进少弱精子症大鼠附睾组织Nrf2-NQO1/γ-GCS信号通路活化,上调Nrf2、NQO1和γ-GCS蛋白表达相关。

电项针干预对急性脑出血大鼠Nrf2、NQO1表达和神经功能的影响

目的观察电项针干预对急性脑出血(ICH)大鼠脑组织中转录因子E2相关因子(Nrf2)、NAD(P)H醌氧化还原酶(NQO1)的表达和神经功能评分的影响,探讨电项针干预脑出血大鼠抗氧化应激损伤的机制。方法随机将24只SD大鼠分为空白对照组、假手术组、ICH模型组、ICH电项针组。ICH电项针组在造模后干预治疗5 d。各组分别在造模后1、3、5 d进行平衡木行走试验,同时在造模后5 d选取病变周围脑组织,检测Nrf2、NQO1 mRNA和蛋白的表达水平。结果大鼠脑组织Nrf2、NQO1 mRNA和蛋白的表达情况:与空白对照组比较,ICH模型组和ICH电项针组的表达量均升高(P<0.01或P<0.05);与假手术组相比,ICH模型组、ICH电项针组Nrf2、NQO1 mRNA和蛋白的表达均升高(P<0.01);与ICH模型组比较,ICH电项针组Nrf2、NQO1mRNA和蛋白的表达增高(P<0.05)。平衡木行走试验:造模后,假手术组和空白对照组评分差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组相比,ICH模型组和ICH电项针组干预1 d后评分均增高;与模型组比较,电项针组干预3、5 d后评分有下降趋势(P<0.01)。结论电项针干预脑出血大鼠能促进脑组织损伤周围区Nrf2、NQO1的表达,抑制氧化应激反应,改善神经功能缺损。

温肾醒脑方干预对血管性痴呆大鼠Nrf2-HO-1/NQO1信号通路的影响

目的:观察温肾醒脑方对VD大鼠Nrf2-HO-1/NQO1信号通路的影响,探讨其对VD大鼠脑保护作用机制。方法:将60只大鼠分为正常组、模型组、脑复康组(0.6 g·kg^-1)和温肾醒脑方组(2 g·kg^-1),每组15只,构建肾虚痰瘀型VD大鼠模型,给予相应药物灌胃治疗后,HE染色法观察脑组织海马形态学变化,运用ELISA检测血清和脑组织SOD、MDA、IL-1β、TNF-α、AchE、ChAT等,RT-PCR和免疫组化法检测Nrf2、HO-1、NQO1的mRNA和蛋白表达。结果:与正常组相比较,模型组海马区组织结构高度疏松,神经元高度水肿,结构模糊,神经元变性,胞核呈深染、固缩、溶解;血清MDA、IL-1β和TNF-α显著升高(P<0.05或P<0.01),SOD显著降低(P<0.01);脑组织MDA和AchE均显著升高(P<0.05或P<0.01),SOD和ChAT显著降低(P<0.05或P<0.01);海马区Nrf2、HO-1、NQO1的mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.01)。与模型组相比较,温肾醒脑方组和脑复康组海马区病理形态较模型组有所改善,神经元病理变化较轻,软化灶减少,神经元肿胀、空泡变性程度、核固缩、核溶解程度不同程度的减轻;血清MDA、IL-1β和TNF-α显著降低(P<0.05或P<0.01),SOD显著升高(P<0.05);脑组织MDA和AchE均显著降低(P<0.05或P<0.01),SOD和ChAT显著升高(P<0.05或P<0.01);海马区Nrf2、HO-1、NQO1的mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.05或P<0.01),且温肾醒脑方组更为明显。结论:温肾醒脑方能够改善脑组织病理形态结构,其机制可能是通过激活Nrf2-HO-1/NQO1信号通路调控下游相关因子的表达,调节血清和脑组织氧自由基和炎性因子代谢,抑制氧化应激及炎性反应损伤,发挥神经保护作用。

桔皮素调控Nrf2/NQO1通路减轻脊髓损伤大鼠炎症与氧化应激损伤

目的研究桔皮素对脊髓损伤大鼠的修复作用及其机制。方法将大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、桔皮素组,每组8只。除假手术组外,其余各组采用Allen打击法制作脊髓损伤大鼠模型。造模成功后,桔皮素组灌胃桔皮素50 mg/kg,假手术组及模型组灌胃等体积的生理盐水,1次/d,连续干预14 d。分别于造模后第0、3、7、14天,采用Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分评估大鼠运动功能恢复情况;采用HE染色及Nissl染色观察脊髓组织形态学变化,使用ELISA法检测各组大鼠脊髓组织SOD、GSH活性和MDA、IL-1β、TNF-α、IL-10水平,免疫荧光法检测脊髓组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元核抗原(Neun)表达,Western blot法检测脊髓组织IL-1β、TNF-α、IL-10、核因子E2相关因子2(Nrf-2)和NAD(P)H-醌氧化还原酶1(NQO-1)表达。结果与模型组比较,桔皮素组大鼠BBB评分升高(P<0.05),HE染色评分降低(P<0.05),Nissl染色尼氏小体数增加(P<0.05);脊髓组织SOD、GSH活性及IL-10水平升高(P<0.05),MDA、IL-1β、TNF-α水平降低(P<0.05);GFAP荧光强度减弱(P<0.05),Neun荧光强度增强(P<0.05);IL-1β、TNF-α蛋白相对表达降低(P<0.05),IL-10、Nrf-2、NQO-1蛋白相对表达升高(P<0.05)。结论桔皮素可能通过Nrf2/NQO1信号通路发挥抗炎、抗氧化应激的作用,缓解大鼠早期的脊髓损伤;另一方面可能通过减少胶质瘢痕,促进神经细胞生成,从而促进脊髓损伤的恢复。

敦煌医方瞿麦汤对肾草酸钙结石大鼠核转录因子2-NAD(P)H醌氧化还原酶1通路的影响

目的:研究探讨敦煌医方瞿麦汤对肾草酸钙结石模型鼠Nrf2-NQO1通路的影响。方法:SD雄性大鼠60只按随机数字表法分为空白对照组(等体积蒸馏水)、模型组(等体积蒸馏水)、肾石通颗粒组(5 g/kg·d),敦煌医方瞿麦汤高、中、低剂量组(20、10、5 g/kg)每组各10只。大鼠肾草酸钙结石模型的制备采用1%乙二醇+2%氯化铵的溶液联合灌胃法,造模5 h后给予相应药物干预,持续4周。末次给药24 h后,检测各组大鼠的体质量、肾指数、血清钙(calcium,Ca^2+)、磷(phosphorus,P)含量、肾组织SOD活性、MDA含量、Nrf2 mRNA和QNO1mRNA的表达。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠肾指数、血清Ca^2+含量、肾组织MDA的含量均增加,其体质量、肾组织SOD活性、Nrf2mRNA和NQO1mRNA的表达均下降;与模型组比较,敦煌医方瞿麦汤各干预组肾指数、血清Ca^2+含量均下降,体质量和肾组织SOD活性均升高,MDA含量均下降;敦煌医方瞿麦汤中、高剂量组肾组织Nrf2 mRNA和NQO1mRNA表达均升高。结论:敦煌医方瞿麦汤可通过上调Nrf2-NQO1通路相关因子表达,抑制大鼠肾草酸钙结石的形成。

大鼠创伤性脑损伤后Nrf2通路相关因子的表达

目的观察大鼠创伤性脑损伤后脑组织内核因子E2相关性因子2（Nrf2）及该通路下游分子血红素加氧酶1（HO-1）、醌氧化还原酶1（NQ01）的表达。方法采用改良Feeney自由落体模型制作大鼠脑外伤模型，对照组仅开骨窗不制作脑外伤。采用WesternBlot法检测脑外伤24h后损伤灶周围脑组织细胞核内Nrf2蛋白含量，RT—PCR法检测HO—1mRNA、NQO1mRNA水平。结果脑外伤后脑组织细胞核内Nrf2蛋白含量显著增加，HO-1mRNA、NQ01mRNA水平亦明显增加（均P〈0．01）。结论脑外伤后脑组织内Nrf2通路被激活。

RNAi沉默Nrf2基因增强煤焦沥青烟提取物对BEAS-2B细胞的毒性作用

目的:探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默Nrf2基因对煤焦沥青烟提取物(CTPE)致人支气管上皮细胞(BEAS-2B)发生恶性转化过程中的作用,为肺癌的发生机制提供线索。方法:应用RNAi技术建立Nrf2基因沉默的BEAS-2B细胞稳定表达株;设立二甲基亚砜(DMSO)阴性对照组、苯并(a)芘[B(a)P]阳性对照组、CTPE组、RNAi组;采用软琼脂克隆形成实验分析细胞恶变情况;采用RT-PCR法检测Nrf2和NQO1 mRNA的表达;Western blot法检测Nrf2和NQO1蛋白的表达。结果:20代以后,B(a)P组、CTPE组和RNAi组的克隆形成率高于DMSO组(P<0.001);而RNAi组的克隆形成率高于B(a)P组和CTPE组(P<0.001)。B(a)P组和CTPE组Nrf2 mRNA和蛋白表达水平均较DMSO组增加(P<0.001),B(a)P组、CTPE组和RNAi组NQO1 mRNA和蛋白水平均较DMSO组上调,RNAi组的表达量低于B(a)P组和CTPE组(P<0.001);诱导后(CTPE组)第10代、20代、30代细胞中Nrf2与NQO1的蛋白表达呈正相关(r=0.913,P<0.001)。结论:Nrf2可能通过上调NQO1的表达对抗CTPE对BEAS-2B细胞的毒性作用从而抑制细胞恶化;Nrf2和NQO1在BEAS-2B细胞癌前病变阶段已呈现较明显表达,这可能有助于接触CTPE高危人群罹患肺癌的预警及筛查。

siRNA抑制牛睾丸细胞Nrf2基因表达的研究

为了探讨Nrf2基因被干扰后对牛睾丸细胞的影响,试验采用了实时荧光定量PCR和Western boltting方法检测了牛睾丸细胞中HO-1和NQO1基因的表达。结果显示,设计的siRNA-1672在终浓度为50nmol/L时抑制效果较好,Nrf2基因表达显著下降,HO-1和NQO1基因在mRNA水平上表达显著下降。Nrf2被干扰72h后,HO-1和NQO1蛋白质水平表达水平明显下降。说明Nrf2对牛睾丸细胞中HO-1和NQO1基因的表达存在调控作用。