基于Nrf2-HO-1/CYP2E1通路探讨五指毛桃醇提取物对酒精性肝损伤小鼠的抗氧化保护机制

目的探讨五指毛桃(Fici Hirtae Radix,FHR)醇提取物对小鼠酒精性肝损伤的保护作用及其机制。方法将60只小鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照组及五指毛桃醇提取物高、中、低剂量组。除对照组给予生理盐水灌胃外,其余各组小鼠以梯度酒精灌胃法复制酒精性肝损伤模型。复制模型同时,阳性对照组灌胃给予50 mg·kg^(-1)水飞蓟素,五指毛桃醇提取物组分别灌胃给予2、1、0.5 g·kg^(-1)五指毛桃醇提取物进行干预,对照组、模型组灌胃给予等体积生理盐水,连续6周。复制模型成功后取材,HE染色法观察肝组织病理变化;比色法测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平,肝组织内丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;并采用蛋白质印迹法测定核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、超氧化物歧化酶1(SOD-1)和细胞色素P450 2E1(CYP 2E1)的蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组小鼠肝细胞肿胀,排列散乱,中央静脉周围小变性明显,呈现肝细胞灶状坏死;血清中ALT和AST水平明显升高(P<0.01);肝组织中MDA含量明显升高(P<0.01),SOD活性明显降低(P<0.01),GSH含量和GSH-Px活性明显降低(P<0.01);Nrf2、HO-1及SOD-1蛋白水平明显降低(P<0.05),CYP2E1蛋白水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,五指毛桃醇提取物各剂量组肝脏炎性细胞浸润减少,肝脏组织坏死减轻;五指毛桃醇提取物高、中剂量组明显降低ALT、AST水平(P<0.05);五指毛桃醇提取物高、中剂量组明显降低MDA水平(P<0.05),五指毛桃醇提取物低剂量组明显升高GSH含量(P<0.05),五指毛桃醇提取物各剂量组均明显升高SOD水平(P<0.05),五指毛桃醇提取物高、低剂量组明显升高GSH-Px活性(P<0.05);五指毛桃醇提取物高剂量组明显上调Nrf2蛋白表达水平(P<0.05),五指毛桃醇提取物高、低剂量组明显上调HO-1蛋白表达水平(P<0.05),五指毛桃醇提取物高、中剂量组明显上调SOD-1蛋白表达水平(P<0.05),五指毛桃醇提取物中、低剂量组明显下调CYP2E1蛋白表达水平(P<0.05)。结论五指毛桃醇提取物对酒精性肝损伤小鼠具有保护作用,其机制可能是通过激活Nrf2,诱导调控下游抗氧化因子或抗氧化系统,并抑制CYP2E1异常活化,减轻氧化应激反应,从而降低酒精对肝脏的损伤。

五味子丙素调控Nrf2信号通路改善对乙酰氨基酚诱导的小鼠肝损伤

过量的对乙酰氨基酚(APAP)在体内会被细胞色素P450系统转化为有毒代谢物NAPQI而消耗谷胱甘肽(gluta-thione,GSH),当GSH耗竭后,NAPQI与蛋白质共价结合,诱发线粒体功能障碍和氧化应激导致肝毒性.五味子丙素(schisan-drin C,SinC)是一种从五味子中分离出来的联苯并环辛二烯衍生物,具有保肝效应,但其对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的肝损伤是否具有保护作用及作用机制尚不明确.因此,该研究通过腹腔注射APAP(400 mg·kg^(-1))诱导小鼠发生急性肝损伤构建动物模型,旨在通过动物实验探究SinC对APAP所致肝损伤的影响及其作用机制,同时为中医药防治APAP过量导致的肝损伤提供潜在的候选药物.在APAP诱导的小鼠肝损伤模型中,五味子丙素可改善肝脏组织病理学病变,显著降低谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的活性,增加GSH和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量以及降低总胆红素(total bilirubin,TBIL)、直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平.进一步分析表明,五味子丙素降低了肝组织中CYP2E1蛋白和mRNA水平,并增加了NF-E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)及其下游靶标(包括HO-1、NQO1和GCLC)的表达.结果表明,五味子丙素可能通过降低CYP2E1的表达,抑制细胞凋亡,改善炎症反应,激活Nrf2信号通路,抑制氧化应激,从而改善APAP导致的肝损伤.

基于网络药理学探讨溪黄草治疗酒精性肝损伤的作用机制

目的:考察溪黄草对酒精性肝损伤的保护作用和潜在作用机制。方法:40只雌性昆明小鼠随机分为空白组、模型组、溪黄草组、阳性对照组。0.1 mL/10 g灌胃52°白酒建立酒精性肝损伤模型,连续给药10 d。末次给药,HE染色观察肝组织病理改变,试剂盒法测定血清指标。网络药理学方法分析溪黄草治疗酒精性肝损伤的潜在有效物质成分和信号通路、分子靶点,Western-blot验证相关分子靶点。结果:溪黄草组AST、m-AST、GDH蛋白表达水平显著高于模型组(P<0.05或P<0.01);溪黄草组ADH和CAT蛋白水平表达显著高于模型组(P<0.05或P<0.01);溪黄草组SOD和GSH-Px、GSH蛋白表达水平显著高于模型组(P<0.05或P<0.01),MDA蛋白表达水平显著低于模型组(P<0.05);网络药理分析显示咖啡酸、迷迭香酸、槲皮素、胡麻素、异鼠李素是最可能的活性物质,Nrf2、CYP2E1、PTGS2、MMP9、MMP2是最可能的治疗靶点。Western-bolt验证结果显示经溪黄草给药干预后,溪黄草组与模型组相比,Nrf2蛋白表达极显著上调(P<0.01),CYP2E1蛋白表达极显著下调,具有统计学意义(P<0.01)。结论:溪黄草对酒精性肝损伤具有保护作用,其中机制可能与溪黄草降低CYP2E1水平,激活Nrf2的表达,从而降低氧化应激造成的损伤相关。

褪黑素对精神障碍大鼠星形胶质细胞极化的作用及机制研究

目的基于Nrf2-HO-1/CYP2E1通路探讨褪黑素调控精神障碍大鼠星形胶质细胞极化的作用机制。方法将50只大鼠随机分为假手术组、模型组、褪黑素组、Nrf2抑制剂(ML-385)组及褪黑素+ML-385组,采用刀片切割法损伤大鼠额叶皮质,复制精神障碍模型。糖水偏好和旷场实验检测大鼠行为学变化;HE和Nissl染色观察大鼠额叶皮质病理损伤和神经元损伤情况;免疫荧光染色检测大鼠额叶皮质GABA能神经元标记物GAD67、A1与A2型星形胶质细胞C3/GFAP与S100A10/GFAP表达;Western blot检测大鼠额叶皮质Nrf2-HO-1/CYP2E1通路相关蛋白Nrf2、HO-1、CYP2E1表达。结果与模型组相比,褪黑素组大鼠糖水偏好指数、跨格次数和站立次数显著提高,额叶皮质病理损伤减轻、神经元数量明显增加,大鼠额叶皮质GAD67表达水平显著升高、C3/GFAP表达水平显著降低、S100A10/GFAP表达水平显著升高,Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高,CYP2E1蛋白表达水平显著降低;然而褪黑素对精神障碍大鼠的上述作用均被ML-385削弱或抑制。结论褪黑素可能通过调控Nrf2-HO-1/CYP2E1通路活性促进A1型星形胶质细胞向A2型极化,进而改善大鼠精神障碍状态。