花生高亲和硝酸盐转运蛋白基因AhNRT2.7a响应低氮胁迫的功能研究

【目的】氮素在作物生产中对生物量和产量起关键作用。高亲和硝酸盐转运蛋白基因NRT2在植物响应低氮胁迫时被激活并具有维持氮吸收和转运的作用。通过筛选花生低氮耐受相关的NRT2基因并解析其生物学功能,为培育高氮素利用率的花生新品种提供理论参考,最终有助于实现节氮、高效的绿色生产目标。【方法】检测正常氮浓度及1/20正常氮浓度(15 mmol·L^(-1))条件下5个具有典型跨膜结构的花生NRT2基因(AhNRT2.4、AhNRT2.5b、AhNRT2.5c、AhNRT2.7a和AhNRT2.7b)的时空表达情况。以花育6309的cDNA为模板,对AhNRT2.7a进行克隆和生物信息学分析,并通过亚细胞定位确定AhNRT2.7a的表达部位。进一步构建异源过表达AhNRT2.7a的拟南芥株系,分别在正常以及低氮胁迫条件下测定其叶绿素含量、氮积累量以及谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酸合成酶(GOGAT)、硝酸还原酶(NR)、亚硝酸还原酶(NiR)、谷氨酸脱氢酶(GDH)5个氮代谢关键酶的活性。【结果】5个NRT2基因中有4个NRT2基因在花生响应低氮胁迫条件下大量表达。其中,AhNRT2.7a能够响应低氮胁迫,并在花生茎和叶中高表达。获得AhNRT2.7a的cDNA序列,全长为1380 bp,编码459个氨基酸。蛋白结构分析显示其为具有12个典型跨膜结构域的膜蛋白。该氨基酸序列与栽培种花生(Arachis hypogaea L.)相似性高达99.56%,其次是野生亲本AA和BB基因组花生。亚细胞定位显示其主要定位于细胞质膜上。构建异源过表达AhNRT2.7a的转基因拟南芥植株,在不同供氮条件下,成熟叶和幼叶叶片的叶绿素相对含量均显著高于野生型拟南芥。同时,对上述5个氮代谢相关酶活性以及氮、磷、钾积累量测定显示,转基因植株中2个氮代谢相关酶(GS和NR)的酶活性以及氮积累量均比野生型拟南芥有显著升高。【结论】花生中4个NRT2基因响应低氮胁迫,其中AhNRT2.7a能够提高植物氮代谢过程的氮素利用率。AhNRT2.7a的表达在促进氮代谢过程的同时,促使碳代谢作用的进一步加强。因此,AhNRT2.7a适合作为花生氮素高效利用为目的的候选基因。

烟草硝酸盐转运蛋白基因NtNRT2.4的克隆及表达分析

植物NRT2基因家族(高亲和硝酸盐转运蛋白基因)在植物吸收和转运硝酸盐过程中发挥重要作用。本研究根据NRT2基因家族的保守序列设计兼并引物,扩增出一条821bp序列,以此序列为信息探针,通过电子克隆和RT-PCR的方法从烟草中克隆获得一个包含1593bp开放阅读框、编码530个氨基酸的c DNA序列,命名为Nt NRT2.4。生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白质具有NRT家族的共有结构特征,与烟草已发现的三个本家族基因同源性达到77.54%,与拟南芥NRT2家族基因同源性达到81.63%,其启动子中包含多个与硝酸盐、光照及根系特异表达相关的元件;组织特异表达分析结果显示,烟草Nt NRT2.4基因的组织表达差异较大,在根部的表达量较高,在叶片和茎部的表达量低;不同氮素形态、光照和蔗糖处理下的基因表达分析结果表明,硝态氮、光照和蔗糖处理诱导Nt NRT2.4表达,而铵态氮抑制其表达。

木薯MeNRT2.1基因的克隆及表达分析

木薯具有产量高、抗贫瘠等特点,为了了解其耐贫瘠的作用机理,提高木薯在贫瘠土壤中对氮素的利用率,以培养20 d的"华南5号"木薯组培苗为实验材料,采用同源克隆和RT-PCR技术,获得一个高亲和硝态氮转运蛋白(NRT2)基因,命名为Me NRT2.1,该基因含有1 593 bp的开放阅读框架,编码530个氨基酸。生物信息学分析结果表明,木薯Me NRT2.1与苜蓿、拟南芥、可可、杨树等物种的NRT2.1同源性高,其中与可可树Tc NRT2.1的亲缘关系最近,氨基酸相似性达到90%。实时荧光定量PCR检测结果表明,Me NRT2.1在木薯组培苗的根中表达,并且在NO_3^-浓度为0.2 mmol/L时,其相对表达量较高,NO_3^-浓度为10 mmol/L时其相对表达量较低,NO_3^-浓度为0时几乎不表达;Me NRT2.1在茎、叶中也几乎不表达,即该基因具有诱导型组织特异性表达模式。原生质体瞬时表达发现Me NRT2.1定位在细胞膜上。此研究为进一步通过NRT2基因提高木薯的抗逆性奠定了基础。

黄瓜NRT2基因的鉴定和特征分析

本研究利用生物信息学方法,从黄瓜基因组中鉴定出3个NRT2基因,并对这些基因的基因组分布、结构、遗传进化和顺式元件进行了系统分析。结果显示,黄瓜的NRT2基因分别位于1号、1号和5号染色体,具有2个或3个外显子,分别与拟南芥的NRT2.4或者NRT2.5直系同源;它们都具有数个植物激素和逆境应答元件,暗示它们不仅在氮素吸收过程中具有一定功能,而且与植物逆境应答有关。该结果为进一步研究黄瓜NRT2的功能提供了线索。

藜麦NRT2基因家族的鉴定及表达分析

硝态氮是植物吸收氮素的2种主要形式之一,硝酸盐转运蛋白2(NRT2)在土壤中硝酸盐缺乏时发挥主导作用。为探究藜麦NRT2基因家族的特征和表达模式,利用生物信息学方法,对藜麦NRT2基因进行全基因组鉴定,并分析了其编码蛋白、染色体定位、基因结构、系统进化、顺式作用元件、组织表达特异性以及不同氮素水平处理后基因的表达模式。结果表明,藜麦中有15个NRT2基因,分布在7条染色体上,每个成员分别含有1~9个内含子及2~10个外显子,蛋白亚细胞定位预测其均定位在质膜上,为疏水性蛋白。同时,系统进化分析显示,藜麦NRT2蛋白家族属于2个亚家族,与拟南芥的亲缘关系更近。顺式作用元件分析显示,藜麦NRT2家族成员启动子区存在大量与生长发育及逆境胁迫等相关的顺式作用元件。藜麦NRT2基因家族成员在不同组织器官中的表达存在差异,在根、茎、叶中表达量较高。在低氮条件下,藜麦NRT2.4、NRT2.7、NRT2.15表达上调;0,25%N处理后藜麦NRT2.7、NRT2.15的表达量急剧增加。研究结果可为后续藜麦NRT2s基因克隆和功能以及氮素胁迫分析提供参考依据。

植物NRT2家族的分子进化

为了研究硝酸盐转运子NRT2家族在植物中的进化关系,综合利用共线性信息和序列相似性信息,从8种已经进行过全基因组测序的物种(大白菜、大豆、杨树、葡萄、玉米、水稻、高粱、二穗短柄草)中,搜索拟南芥NRT2的同源基因。通过分析发现,这些基因序列基本都具有MFS超家族的NNP家族基因的典型特征。但单、双子叶植物之间,NRT2的基因结构存在着较大的差异。系统发育重建结果表明,NRT2基因家族的成员主要是在单、双子叶植物分歧后进化产生的;同时,不同植物的NRT2基因又具有不同的进化模式。大白菜NRT2家族经历了基因组三倍化事件及基因片段丢失。因此,拟南芥和大白菜的NRT2家族有较为密切的进化关系,进化分析为利用已有的拟南芥NRT2研究结果进一步在大白菜中开展NRT2的功能研究提供了参考线索。

茶树硝酸根转运蛋白基因NRT2.5的克隆及表达分析

通过RACE克隆从茶树[Camellia sinensis(L.)]叶片中获得NRT2.5基因cDNA全长序列。所得基因序列全长为2 457 bp,其中开放阅读框为1 362 bp,编码454个氨基酸,推测蛋白分子量为48.7 kD,理论等电点为9.63。生物信息学分析表明,该基因与可可树、拟南芥等的NRT2.5基因具有高度同源性,且其编码的蛋白质具有NRT家族共有的结构特征。实时定量PCR分析表明,NRT2.5基因在茶树不同组织中均有表达,但主要在成熟叶和根中表达;不同氮浓度处理后,茶树NRT2.5基因在低浓度下的表达量高于高浓度下。

大豆NRT2家族基因的鉴定、特征及表达模式

硝酸盐转运蛋白2 (Nitrate transporter 2, NRT2)是一种高亲和硝酸盐转运蛋白,在许多植物对硝酸盐的吸收和转运过程中发挥重要作用。本研究旨在对大豆NRT2基因家族进行全基因组鉴定和生物信息学分析。结果表明,大豆中有6个NRT2基因,分布在5条染色体上。根据进化关系可将大豆NRT2家族基因分为两类,每类中的基因结构和保守结构域分布相似。GmNRT2启动子区域均含有大量的光响应元件,这表明GmNRT2基因的表达可能受光信号调控。表达模式分析发现,大豆NRT2家族基因主要在根和根毛中表达,表明该家族基因与氮素吸收可能有着紧密的关系。本研究结果为大豆NRT2家族基因生物学功能研究提供了一定基础。

高粱高亲和硝酸盐转运蛋白NRT2/3基因家族鉴定、表达与DNA变异分析

硝态氮是作物吸收无机氮素的主要形态,硝酸盐转运蛋白2(nitrate transporter 2,NRT2)作为高亲和性的转运蛋白,以硝酸盐作为特异性底物,在可利用的硝酸盐受限时,高亲和性转运系统被激活,在硝酸盐吸收、转运过程中发挥着重要作用。大多数NRT2不能单独转运硝酸盐,需在硝酸盐同化相关蛋白2(nitrate assimilation related protein 2,NAR2)的协助下才能完成硝酸盐的吸收或转运。作物氮利用效率受环境条件影响,品种间存在差异,因此培育高氮素利用效率品种有重大意义。高粱(Sorghum bicolor)具有耐贫瘠特性,对土壤中的氮素吸收和利用效率较高。本研究结合高粱基因组数据库对NRT2/3基因家族成员基因结构、染色体定位、理化性质、二级结构与跨膜结构域、信号肽与亚细胞定位、启动子区顺式作用元件、系统进化、单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的识别与注释及选择压力进行了全面分析。通过生物信息学分析,筛选出5个NRT2s(命名为SbNRT2-1a、2-1b、SbNRT2-2–4)基因和2个NAR2s(SbNRT3-1–2)基因,较谷子略少。分布在3条染色体上,分为4个亚家族,同一亚族中基因结构高度相似;高粱NRT2/3亲水性平均值均为正值,表明均为疏水性蛋白;α-螺旋和无规则卷曲占二级结构总量的比例大于70%;亚细胞定位均在质膜上,其中NRT2s蛋白不含信号肽,NRT3s蛋白含信号肽;进一步对其跨膜结构域进行分析,发现NRT2s家族成员跨膜结构域个数均大于10个,而NRT3s家族成员跨膜结构域个数为2个;高粱与玉米(Zea mays)NRT2/3s的共线性较好;蛋白结构域显示存在MFS_1和NAR2蛋白结构域,可执行高亲和力硝酸盐转运;系统进化树分析可知,高粱与玉米和谷子的NRT2/3基因亲缘关系更近;基因启动子顺式作用元件分析发现,SbNRT2/3基因的启动子区均具有数个植物激素和逆境应答元件,可以响应高粱生长和环境变化;基因表达热图显示低氮条件下在根诱导表达的是SbNRT2-1a、SbNRT2-1b和SbNRT3-1,推测可在高粱根部表达并调控对硝酸盐的吸收或转运过程。在SbNRT2-4和SbNRT2-1a等发现多个非同义SNP变异;选择压力分析表明,高粱NRT2/3基因家族在进化过程中受纯化选择作用。SbNRT2/3基因表达及蚜虫侵染影响与基因在不同组织中的表达分析结果一致,SbNRT2-1b和SbNRT3-1在感染蚜虫品系5-27sug根部表达显著,高粱蚜虫侵染叶片显著降低了SbNRT2-3、SbNRT2-4和SbNRT3-2的表达水平。本研究初步对高粱全基因组NRT2/3基因家族进行鉴定、表达与DNA变异分析,为高粱氮高效研究提供了基础。

硝酸盐转运蛋白NRT2在植物中的功能及分子机制研究进展

氮素作为植物生长发育所需的大量元素,对植物生长发育及作物产量具有重要作用。施入氮肥是植物及作物的主要氮素来源。面对当下过度施肥造成面源污染加剧的现状,提高作物氮素利用效率,实现“减肥增产”的绿色增产增效模式,是促进我国农业可持续发展及保障国家粮食安全的重要措施。当土壤氮匮缺时,硝酸盐转运蛋白NRT2家族成员对根系吸收及转运硝酸盐至关重要,其中NRT2.1在植物缺氮时主要负责根部的硝酸根吸收。该文重点总结了模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)及重要粮油作物中NRT2家族蛋白特别是NRT2.1的功能及调控机理研究进展,旨在为后续挖掘NRT2在提高作物产量方面的潜力及分子调控机制研究提供重要依据。

白菜NRT2基因的克隆及表达模式分析

以白菜(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)品种‘苏州青’为试材,采用RT-PCR技术,获得1个高亲和硝酸盐转运蛋白基因(NRT2)的cDNA序列,全长1 593 bp,推断其编码530个氨基酸,命名为BcNRT2。序列分析表明:BcNRT2基因与甘蓝型油菜BnNRT2基因和拟南芥AtNRT2.1基因核苷酸序列的相似性分别为98%和90%,氨基酸序列的相似性分别为99%和95%,表明植物中NRT2基因保守度较高。实时定量PCR表达分析表明,BcNRT2在白菜根部的表达量最高,为诱导型表达。低浓度NO3-(0.2 mmol.L-1 KNO3)处理0.5 h后其表达量迅速上升,BcNRT2可能为NO3-感受器。高浓度NO3-(20 mmol.L-1 KNO3)处理后其表达量更高,持续时间较长,可能是受到低亲和硝酸盐转运蛋白NRT1.1的调控而产生的高水平响应。原生质体的瞬时表达显示,BcNRT2蛋白位于细胞膜上。

茶树高亲和硝酸盐转运蛋白家族基因NRT2的鉴定与表达

NRT2(Nitrate transporter 2)基因家族在植物硝酸盐吸收、转运过程中发挥着重要作用,然而茶树(Camellia sinensis)中NRT2基因家族至今未得到全面鉴定.从茶树基因组(‘舒茶早’和‘云抗10号’)中共鉴定出6个NRT2家族成员(分别命名为CsNRT2.1-2.6),并对其编码区、启动子序列和表达模式进行全面分析.CsNRT2s的开放阅读框长度1503-1599 bp,编码500-532个氨基酸,具有保守的MFS结构域.进化分析表明,CsNRT2s家族成员分属4个亚族.利用RT-PCR技术克隆得到CsNRT2.1-2.6上游长度分别为2415、1860、1743、2379、2043和2383 bp的启动子序列.顺式元件分析表明,CsNRT2s启动子中含有光、逆境、激素以及植物生长调控等响应元件.利用qRT-PCR技术对CsNRT2s的表达情况进行分析,未检测到CsNRT2.2/2.3/2.4在茶树新梢中的表达;低氮处理条件下,CsNRT2s在茶树根部和新梢中的表达呈现不同的变化趋势,其中,CsNRT2.1在茶树根部和新梢中的表达量显著上升(P<0.05).推测CsNRT2.1可能主要参与低氮条件下茶树中硝态氮的吸收转运.

铵硝比例对不同基因型小白菜硝酸盐积累影响机理研究

本研究以前期工作中筛选出的硝酸盐积累量存在显著差异的2个不同基因型小白菜品种为材料,在人工气候箱水培条件下研究了不同铵硝比例对小白菜硝酸盐积累量、硝酸还原酶活性(NRA)和硝酸盐吸收基因NRT1和NRT2的表达量的影响。结果表明,不同铵硝比例对小白菜硝酸盐积累量有显著影响,且存在基因型差异。四月慢对硝酸盐吸收、积累及同化利用的能力都强于华冠青梗菜,尤其是在高NO3-比例处理时。与华冠青梗菜相比,四月慢对NO3-的同化利用的能力更不易受铵硝比例的影响。NRT1和NRT2主要在根部表达,且NRT1的表达量显著高于NRT2,NRT1和NRT2的表达量变化规律只能在一定程度上解释小白菜不同基因型间硝酸盐积累量的差异,小白菜不同基因型品种间硝酸盐积累量差异的机理还需要进一步研究。

长期有氧运动对老年大鼠主动脉中Nrf2介导的抗氧化通路的影响

目的探讨长期有氧运动对老年大鼠主动脉中核因子E2相关因子(Nrf)2介导的抗氧化通路的影响。方法 23月龄大鼠分为运动组和非运动组,12 w之后取材用于检测,2月龄大鼠作为对照组。结果老年大鼠经过长期有氧运动后,体重明显下降,比目鱼肌中柠檬酸合酶活性显著增加,平均动脉压显著降低,而血糖无明显变化;主动脉厚度/长度比值和主动脉厚度显著下降,羟脯氨素含量显著减少;主动脉对乙酰胆碱刺激引起的内膜依赖的舒张反应明显增强;主动脉中Nrf2蛋白表达增加,同时Nrf2的靶标基因NAD(P)H醌氧化还原酶(NQO1)、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)1、血红素加氧酶(HMOX)-1 mRNA水平明显增加。另外,经过长期有氧运动年老组大鼠主动脉二氢乙啶(DHE)染色的荧光强度明显降低,提示长期有氧运动可以减轻老年大鼠主动脉氧化应激反应。结论长期有氧运动上调老年大鼠主动脉Nrf2介导的抗氧化通路,从而减轻主动脉氧化应激反应,改善老年大鼠主动脉功能。

马铃薯硝态氮转运蛋白基因的克隆及表达分析

该研究以马铃薯双单倍体‘DM’为材料,克隆到高亲和性硝态氮转运蛋白基因StNRT2.1的全长cDNA(JGI登录号PGSC0003DMT400002924),并对其进行表达模式和生物信息学分析,为深入探索StNRT2.1基因的生物学功能以及提高马铃薯对氮素的利用效率奠定理论基础。结果表明:(1)通过同源克隆与PCR扩增获得StNRT2.1基因cDNA全长片段,并构建pCEGFP-StNRT2.1表达载体;测序结果显示其实际所编码的蛋白质序列与数据库中目的基因蛋白质序列完全一致,表明成功克隆到StNRT2.1基因且未出现错义突变。(2)StNRT2.1基因位于马铃薯第11号染色体,cDNA序列全长1 593 bp,编码530个氨基酸,预测蛋白相对分子质量约为57.60 kD,理论等电点为9.36。(3)生物信息学分析显示,StNRT2.1由20种氨基酸组成,其中甘氨酸(Gly)所占比例最多,达到10.8%,并且主要由228个α-螺旋、27个β-折叠、87个延伸链和188个无规则卷曲构成;StNRT2.1存在功能保守结构MFS_1(PF07690)和12个跨膜螺旋结构域,且N端和C端均位于细胞膜内; StNRT2.1位于质膜上且不具有信号肽,可能为非分泌型膜蛋白。(4)以氮充足(7.5 mmol/L)水平作为对照,马铃薯幼苗经无氮(0 mmol/L)和低氮(0.75 mmol/L)处理3周后呈现出叶片发黄及植株矮化等明显表型差异。(5)qRT-PCR结果显示,在无氮条件下,马铃薯根组织中StNRT2.1基因表达量升高3.98倍,说明StNRT2.1可能为诱导型高亲和转运蛋白。

参附注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠Nrf2信号通路的影响

目的:探讨参附注射液治疗在大鼠脑缺血再灌注损伤中的保护作用及其对Nrf2信号通路的影响。方法:将68只雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组、缺血再灌注损伤加参附注射液(8 mg/kg)治疗组,采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,再灌注后24 h对大鼠进行行为学评分后处死并取脑,采用免疫印迹法检测参附注射液对Nrf2、HO-1、NQO1和cleaved-caspase-3蛋白表达的影响,尼氏法检测脑缺血再灌注损伤后的神经元损伤程度。结果:参附注射液治疗可以显著增加核内Nrf2蛋白的表达(P<0.05),显著增加脑缺血再灌注损伤围脑组织中HO-1、NQO-1的表达量(P<0.05),明显减少cleaved-caspase-3蛋白的表达和受损神经元的个数,显著改善神经功能评分(P<0.05)。结论:参附注射液可以通过上调Nrf2信号通路从而在脑缺血再灌注损伤中发挥神经保护作用。

EGCG对高糖诱导的HK-2细胞氧化应激损伤的保护作用

探究表没食子儿茶素没食子酸脂(EGCG)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞HK-2氧化应激损伤的保护作用及其相关机制。用EGCG干预可以显著提高HK-2细胞抗氧化能力,抑制高糖诱导的细胞内ROS水平升高,提高细胞活力(P<0.05),并呈现剂量依赖效应。同时,研究发现EGCG能显著诱导HK-2细胞Nrf2核转位,并且其下游的Ⅱ相解毒酶HO-1蛋白表达水平也相应提高,Nrf2 mRNA的表达含量也相应升高(P<0.05)。说明EGCG可能通过激活Nrf2/ARE通路,发挥对高糖诱导的HK-2细胞氧化应激损伤的保护作用。

PI3K/Akt信号通路在大鼠过度训练致急性肾损伤中的作用及山莨菪碱的干预效应

目的:探讨PI3K/Akt信号通路在过度训练致急性肾损伤中的变化和作用,以及山莨菪碱是否通过PI3K/Akt信号通路起到肾脏保护作用。方法:将60只大鼠随机分为四组:正常对照组(NC)、过度训练组(OT)、过度训练+山莨菪碱组(OTA)、过度训练+渥曼青霉素组(OTW)。除NC组外,其余各组分为建模后即刻、6 h和24 h三个亚组。通过一次性游泳力竭运动建立过度训练模型。OTW和OTA组于建模前20分钟分别腹腔注射渥曼青霉素25μl/kg和山莨菪碱10 mg/kg。于相应时点检测血肌酐、尿素、肌酸激酶水平;Western blot法检测肾组织Akt、p-Akt、Nrf2表达;TUNEL法检测肾脏细胞凋亡。结果:与NC组相比,OT组出现肾功能损伤和细胞凋亡,p-Akt、Nrf2表达上调(P<0.05)。与OT组相比,OTA组部分时点肾功能改善,细胞凋亡减少,p-Akt、Nrf2表达进一步上调(P<0.05)。OTW组总体表现与OTA组相反(P<0.05)。各组间Akt表达无明显差异。结论:在过度训练致急性肾损伤中,PI3K/Akt通路激活增多,进而减少过氧化反应,改善肾功能,抑制细胞凋亡。山莨菪碱可通过该通路发挥肾脏保护作用。

外源性硫化氢通过Keapl—Nrf2信号通路减轻胃缺血再灌注引起的黏膜损伤

目的观察外源性硫化氢（hydrogensulfide，H：S）供体NariS预处理对大鼠胃缺血再灌注（gastricische—mia—reperfusion，GI—R）损伤的影响及其可能的作用机制。方法雄性Sprague—Dawley（SD）大鼠，实验分3组：假手术（Sham）组、GI—R组和NaHS组。采用夹闭腹腔动脉30min再灌注1h方法建立GI—R损伤模型。GI～R后处死各组大鼠，采用AdobePhotoshop软件分析计算GI～R引起的胃黏膜损伤面积，苏木精一伊红染色后光镜下观察GI—R引起的胃黏膜损伤深度，化学比色法检测大鼠胃黏膜中过氧化氢（H2O2）和谷胱甘肽（GSH）含量，免疫印迹法测定大鼠胃黏膜组织中Keapl、Nrt2、超氧化物歧化酶（SOD2）和黄嘌呤氧化酶（XOD）的表达，免疫组化法检测大鼠胃黏膜Keapl和Nrf2表达。结果GI—R组胃黏膜损伤明显、损伤深度较深，NaHS组胃黏膜损伤面积和深度较GI—R组明显缩小和减少。与GI—R组相比，NaHS预处理后能增加胃黏膜组织中GSH、Nrf2、SOD2水平（P〈0．05），降低H2O2、Keapl、XOD水平（P〈0．05）。结论外源性Hs预处理可以通过Keapl—Nrf2信号通路减轻大鼠胃缺血再灌注引起的黏膜损伤。

硫辛酸通过Nrf2-ARE信号通路对百草枯中毒大鼠急性肺损伤保护作用的研究

目的研究硫辛酸（LA）对百草枯中毒大鼠急性肺损伤抗氧化相关转录因子核因子相关因子2（nuclear factor—erythroid 2-related factor，Nrf-2）和亚铁血红素氧化酶1（heine oxygenase1，HO-1）表达的影响，探讨硫辛酸保护百草枯肺损伤的作用机制。方法SPF级SD雄性大鼠随机（随机数字法）分为正常组（n=12）、百草枯中毒组（PQ组，n=30）和百草枯中毒＋硫辛酸干预组（LA组，n=30），正常组分为6h和72h亚组，PQ组和LA组大鼠分为6h、12h、24h、48h、72h五个亚组（每个亚组各6只）。PQ组以腹腔注射百草枯25mg／kg，LA组在给予百草枯25mg／kg染毒0．5h后尾静脉给予LA100mg／kg。正常组给予等量生理盐水腹腔注射。测定体质量及肺系数，观察各组肺部组织病理变化（HE染色）及Nrf-2，HO-1的表达（免疫组化法）；同时检测酶学指标谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活力变化。采用组间单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验。结果LA组体质量在48h和72h时点[（191．02±0．82）g和（183．37±7．74）g]降低明显少于PQ组同时点[（183．85±2．07）g和（173．13±4．34）g]（P〈0．01或P〈0．05）；LA组肺系数在24h，48h，72h时点[（6．83±0．48）mg／g、（7．61±0．28）mg／g和（8．29±0．36）mg／g]明显低于PQ组同时点[（7．39±0．53）mg／g、（8．48±0．23）mg／g和（9．06±0．10）mg／g]（P〈0．01或P〈0．05）；Nrf-2蛋白水平的表达LA组在48h，72h时点[（3．99±0．50）和（3．51±0．12）]高于PQ组[（1．33±0．22）和（1．62±0．41）]（均P〈0．01）；LA组HO-1蛋白水平的表达在72h时点（1．76±0．17）高于PQ组（1．31±0．15）（p〈0．01）；LA组GSH—Px活力在24h，48h，72h时点明显高于PQ组同时点（P〈0．01或P〈0．05）；SOD活力在5个时点均明显高于pQ组同时点（均P〈0．01）。结论Nff2-ARE通路参与百草枯中毒致急性肺损伤病理生理过程，硫辛酸可能通过Nrt2-ARE通路保护百草枯中毒大鼠急性肺损伤。