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表达PRRSV强弱毒Nsp2的Marc-145细胞系的建立及Nsp2蛋白对PRRSV复制的影响 被引量:2
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作者 王凤雪 刘准 +3 位作者 温永俊 冷雪 李真光 武华 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期1-6,共6页
为探讨Nsp2蛋白对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的影响,采用体外克隆法构建表达高致病性PRRSV TJ株和其致弱毒TJM株Nsp2基因的真核表达质粒pEGFP-TJ Nsp2和pEGFP-TJMNsp2,含有增强式绿色荧光蛋白表达盒,瞬时转染重组质粒到Marc-14... 为探讨Nsp2蛋白对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的影响,采用体外克隆法构建表达高致病性PRRSV TJ株和其致弱毒TJM株Nsp2基因的真核表达质粒pEGFP-TJ Nsp2和pEGFP-TJMNsp2,含有增强式绿色荧光蛋白表达盒,瞬时转染重组质粒到Marc-145细胞系单层,利用G418抗性筛选建立细胞系,通过PCR和RT-PCR鉴定。PRRSV感染筛选的细胞系,检测病毒TCID50。结果建立稳定表达TJ株和TJM株Nsp2基因的猴肾细胞系Marc-145-TJ Nsp2和Marc-145-TJM Nsp2;在表达PRRSV TJ株和TJM株Nsp2蛋白的Marc-145细胞上感染PRRSV病毒,在复制早期病毒时增殖速度快,即Nsp2蛋白对PRRSV复制早期有正向调控作用,并且强毒的Nsp2此作用更明显。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp2蛋白 细胞系 复制
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轮状病毒SA11株NSP2蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
2
作者 陈肖宏 闻晓波 冉旭华 《黑龙江八一农垦大学学报》 2021年第1期15-20,共6页
构建轮状病毒SA11株NSP2蛋白原核表达质粒,纯化重组蛋白并制备多克隆抗体。根据GenBank中登录的轮状病毒SA11株NSP2基因组序列(LC178571.1)设计特异性引物,用PCR方法扩增并将其连接至pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-28a-NSP2,转化... 构建轮状病毒SA11株NSP2蛋白原核表达质粒,纯化重组蛋白并制备多克隆抗体。根据GenBank中登录的轮状病毒SA11株NSP2基因组序列(LC178571.1)设计特异性引物,用PCR方法扩增并将其连接至pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-28a-NSP2,转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,并通过SDS-PAGE和Western blot鉴定。将纯化后的重组蛋白与ISA206佐剂乳化免疫豚鼠,制备NSP2多克隆抗体,并通过ELISA测定抗体效价。重组蛋白以包涵体的形式表达,相对分子质量为35 kDa,ELISA法测定多克隆抗体效价>1∶5000。成功表达了轮状病毒SA11株NSP2蛋白并获得其多克隆抗体,为NSP2蛋白结构与功能的研究奠定基础。 展开更多
关键词 轮状病毒 nsp2蛋白 原核表达 多克隆抗体
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猪繁殖与呼吸综合征病毒GS15株NSP2蛋白多位点缺失病毒的拯救与体外生长特性分析
3
作者 张兴民 张婧 +13 位作者 孙普 李娇阳 崔占鼎 李国秀 王健 李平花 袁红 李坤 曹轶梅 付元芳 李冬 赵志荀 曾巧英 卢曾军 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期2307-2322,共16页
【目的】本实验室前期在高致病性毒株PRRSV/GSWW/2015的感染性克隆上,拯救获得了非结构蛋白(non-structural protein 2,NSP2)第519-565位和第628-747位氨基酸双缺失的工程病毒(r GS15-?2)。本研究旨在在双缺失病毒的感染性克隆上,构建... 【目的】本实验室前期在高致病性毒株PRRSV/GSWW/2015的感染性克隆上,拯救获得了非结构蛋白(non-structural protein 2,NSP2)第519-565位和第628-747位氨基酸双缺失的工程病毒(r GS15-?2)。本研究旨在在双缺失病毒的感染性克隆上,构建拯救获得NSP2三个位点缺失的工程病毒。【方法】在前期双缺失病毒感染性克隆的基础上,利用融合PCR方法分别构建缺失NSP2第323-364位和第372-433位优势抗原表位的两个3个位点缺失的重组质粒。经脂质体介导,转染Marc-145细胞拯救病毒,通过电子显微镜观察、免疫荧光实验、测定病毒滴度、绘制生长曲线等方法对缺失病毒的生长特性进行分析。【结果】成功获得拯救病毒r GS15-?3-1和r GS15-?3-2。电子显微镜下可以观察到直径大小为50-80 nm的病毒粒子;免疫荧光实验检测表明,拯救病毒与亲本病毒GS15一致,都能检测到PRRSV N蛋白表达;缺失区域RT-PCR扩增鉴定,拯救病毒传至40代缺失标记稳定存在;r GS15-△3-1与r GS15-△3-2病毒滴度分别为2.00×10^(6.0)TCID_(50)/m L和2.25×10^(5.8)TCID50/m L,与亲本病毒相比病毒滴度差异显著(P<0.05);生长曲线分析表明拯救病毒复制水平低于亲本病毒达到最高滴度的培养时间比亲本病毒延迟24 h。【结论】本研究通过对PRRSV基因2型非结构蛋白NSP2多位点缺失病毒的体外生长特性分析,为研制新型PRRSV标记疫苗奠定了基础,也为猪繁殖与呼吸综合征的防控提供新的策略。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 感染性克隆 非结构蛋白2(nsp2) 缺失标记 生长特性
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猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2基因及其编码蛋白的研究进展 被引量:2
4
作者 李莲 陈希文 周杰珑 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第8期59-62,共4页
猪繁殖与呼吸综合征病毒( Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)主要引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道障碍,给世界养猪业造成了重大的经济损失。PRRSV的变异性极大,而整个基因组中变异最大的部分就是Nsp2区域... 猪繁殖与呼吸综合征病毒( Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)主要引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道障碍,给世界养猪业造成了重大的经济损失。PRRSV的变异性极大,而整个基因组中变异最大的部分就是Nsp2区域,即使是在同一亚型的毒株中其核苷酸同源性也仅为78%~88%。其编码的Nsp2蛋白是一个多功青甚蛋白,不仅能促进病毒的复制,而且还可以降低I型干扰素产生及抑制信号转导通路。另外,Nsp2蛋白还可以作为发展标记疫苗和弱毒疫苗的潜在靶基因。现将Nsp2的这些特性作一简要综述,以期为进一步阐明PRRSV的致病机理和免疫特性等提供重要的理论基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 变异 nsp2基因 nsp2蛋白 病毒复制 疫苗
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辛德毕斯病毒nsP2蛋白研究进展 被引量:1
5
作者 朱武洋 梁国栋 《国际病毒学杂志》 2008年第2期-,共5页
nsP2是辛德毕斯病毒一种重要的非结构蛋白,具有蛋白酶活性、三磷酸激酶活性、RNA解旋酶等活性.nsP2蛋白与该病毒基因组复制、多聚蛋白水解等过程有关,更为重要的是该蛋白在调节宿主细胞对病毒感染反应的过程中起重要作用.本文就辛德毕... nsP2是辛德毕斯病毒一种重要的非结构蛋白,具有蛋白酶活性、三磷酸激酶活性、RNA解旋酶等活性.nsP2蛋白与该病毒基因组复制、多聚蛋白水解等过程有关,更为重要的是该蛋白在调节宿主细胞对病毒感染反应的过程中起重要作用.本文就辛德毕斯病毒nsP2蛋白的结构、功能及相关进展作一综述. 展开更多
关键词 辛德毕斯病毒 nsp2蛋白
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禽传染性支气管炎病毒Nsp2蛋白与宿主蛋白eIF2α的互作鉴定 被引量:1
6
作者 李念灵 李永新 +8 位作者 樊顺怡 申玉玺 李淑芸 夏静 王安东 崔敏 韩新锋 黄勇 余松城 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期4047-4056,共10页
Nsp2蛋白是冠状病毒的非结构蛋白,在病毒早期感染中具有重要作用。【目的】为初步筛选可能与禽传染性支气管炎病毒(avian infectious bronchitis virus,IBV)Nsp2蛋白互作的宿主蛋白,鉴定Nsp2蛋白与真核翻译起始因子2α亚基(eIF2α)的相... Nsp2蛋白是冠状病毒的非结构蛋白,在病毒早期感染中具有重要作用。【目的】为初步筛选可能与禽传染性支气管炎病毒(avian infectious bronchitis virus,IBV)Nsp2蛋白互作的宿主蛋白,鉴定Nsp2蛋白与真核翻译起始因子2α亚基(eIF2α)的相互作用。【方法】以pCAGGs-Flag-Nsp2和pCAGGs-Flag载体转染后的鸡胚肾(CEK)细胞为研究对象,利用免疫共沉淀(Co-IP)和液相色谱-串联质谱(LC⁃MS/MS)技术筛选出可能与IBV Nsp2蛋白发生互作的宿主蛋白eIF2α,通过免疫共沉淀和间接免疫荧光试验进一步验证二者相互作用。【结果】经免疫共沉淀与质谱分析后筛选到97个可能与Nsp2蛋白互作的宿主蛋白,其中宿主抗病毒反应的关键蛋白eIF2α与Nsp2蛋白的相互作用通过免疫共沉淀和间接免疫荧光试验,表明二者存在直接互作关系,并共定位于细胞质中;此外,Nsp2蛋白表达和IBV感染都能显著提高宿主内源性eIF2α的转录水平。【结论】利用免疫共沉淀联合质谱技术筛选到CEK细胞中存在的97种可能与IBV Nsp2互作的候选蛋白,利用免疫共沉淀与间接免疫荧光证明候选蛋白eIF2α与Nsp2蛋白在细胞质中存在直接互作,同时发现Nsp2蛋白过表达和IBV感染会导致CEK细胞内eIF2α的转录水平显著增强。本研究为进一步探索冠状病毒非结构蛋白Nsp2的生物学功能奠定了基础,并提供了IBV入侵宿主时Nsp2蛋白的作用机制研究的新线索。 展开更多
关键词 禽传染性支气管炎病毒 nsp2蛋白 质谱 免疫共沉淀 互作蛋白 EIF2Α
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猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞中非结构蛋白Nsp2表达分析 被引量:4
7
作者 温贵兰 张涵淞 +5 位作者 扈鸿霞 章先 张毅 王晓杜 李肖梁 方维焕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1109-1116,共8页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白Nsp2对病毒复制和致病具有重要作用,本研究旨在分析Nsp2在Marc-145细胞内的分布与表达。构建nsp2含PL2区域基因片段的原核表达载体,重组... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白Nsp2对病毒复制和致病具有重要作用,本研究旨在分析Nsp2在Marc-145细胞内的分布与表达。构建nsp2含PL2区域基因片段的原核表达载体,重组蛋白纯化后作为免疫抗原,制备Nsp2特异性单克隆抗体。将携带nsp2基因的真核表达载体转染至Marc-145及HEK293细胞,或将PRRSV感染Marc-145细胞后不同时间点收集细胞样品。免疫荧光观察Nsp2在转染细胞中的亚细胞定位,免疫印迹分析Nsp2在真核细胞中的表达。筛选获得了1株稳定分泌特异性抗Nsp2的单克隆杂交瘤细胞株,能用于免疫荧光和印迹分析。重组真核表达质粒转染Marc-145与HEK293细胞后,Nsp2主要定位于细胞质中,免疫印迹检测到约为120与50ku的蛋白条带。PRRSV感染Marc-145细胞4h即可检测到Nsp2的表达,主要定位于细胞核周围,随着感染时间延长Nsp2分布范围逐渐扩大至整个细胞质。病毒感染8h,可检测到120ku左右的Nsp2蛋白条带,感染后12h可检测到70和50ku左右的Nsp2蛋白,且蛋白表达量随感染时间延长显著增多。PRRSV感染细胞中Nsp2的表达与剪切分析,为深入研究该蛋白在病毒复制和致病中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 非结构蛋白nsp2 表达与剪切方式
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百脉根结瘤信号通道蛋白NSP1和NSP2的相互作用 被引量:4
8
作者 胡晓晶 储晓洁 +2 位作者 康恒 朱辉 张忠明 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期132-137,共6页
豆科植物百脉根是研究共生固氮体系的模式植物之一,对其根瘤菌共生信号转导途径和作用机制的研究,有助于揭示根瘤菌与豆科植物共生关系建立和共生体形成的奥秘。本研究利用酵母双杂交系统和体外蛋白质相互作用技术,证明百脉根GARS类家... 豆科植物百脉根是研究共生固氮体系的模式植物之一,对其根瘤菌共生信号转导途径和作用机制的研究,有助于揭示根瘤菌与豆科植物共生关系建立和共生体形成的奥秘。本研究利用酵母双杂交系统和体外蛋白质相互作用技术,证明百脉根GARS类家族转录因子结瘤信号通道蛋白NSP1和NSP2在体外体内均可以相互作用,并将相互作用的位点定位在NSP1的GRAS结构域的LHRII区域和NSP2的LHRI区内。 展开更多
关键词 百脉根 结瘤信号通道蛋白nsp1 结瘤信号通道蛋白nsp2 共生信号转导 酵母双杂交
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猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2蛋白原核表达纯化及其蛋白酶活性分析 被引量:1
9
作者 瞿洪仁 李耀东 +1 位作者 侯艳红 严景华 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1502-1509,共8页
【目的】表达并纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白2(Nsp2),分析Nsp2的蛋白酶活性。【方法】本研究通过PCR分别扩增nsp2基因的N端和C端,利用原核表达载体pET21a(+)表达Nsp2蛋白的N端和C端(即Nsp2-N和Nsp2-C),通过Ni-NTA琼脂糖亲和层... 【目的】表达并纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白2(Nsp2),分析Nsp2的蛋白酶活性。【方法】本研究通过PCR分别扩增nsp2基因的N端和C端,利用原核表达载体pET21a(+)表达Nsp2蛋白的N端和C端(即Nsp2-N和Nsp2-C),通过Ni-NTA琼脂糖亲和层析和凝胶过滤的方法纯化两个重组蛋白。预测Nsp2-N含有半胱氨酸蛋白酶结构域,本研究利用western blot检测其顺式酶切蛋白酶活性;并人工合成潜在的十肽底物,利用体外多肽酶切实验检测其反式酶切蛋白酶活性。成功获得Nsp2-N和Nsp2-C蛋白的可溶性表达,纯化后纯度高达90%,预测的Nsp2-N蛋白酶结构域在顺式切割和反式切割下均无法发挥蛋白酶活性。【结论】推测Nsp2-N中所预测的蛋白酶结构域其活性的发挥还需要其他宿主因子的辅助作用,为进一步鉴定其生物活性和筛选抗病毒药物研究提供基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 非结构蛋白nsp2 亲和层析 凝胶过滤
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稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP_2细胞株的建立及其对p65核转位影响的研究 被引量:1
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作者 温贵兰 张升波 +1 位作者 李昌红 徐丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期851-853,867,共4页
为建立一株稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白2(NSP_2)的细胞株,本研究通过脂质体2000介导的方法将携带有PRRSV NSP_2基因序列的真核表达载体(pcDNA3.1-5'Flag-Nsp_2)瞬时转染于HEK293细胞,应用G418筛选、间接免疫荧... 为建立一株稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白2(NSP_2)的细胞株,本研究通过脂质体2000介导的方法将携带有PRRSV NSP_2基因序列的真核表达载体(pcDNA3.1-5'Flag-Nsp_2)瞬时转染于HEK293细胞,应用G418筛选、间接免疫荧光(IFA)与western blot方法进行鉴定,获得了1株稳定表达NSP_2的阳性细胞株,命名为NSP_2-11C1-HEK293;将TNF-α作用于该细胞株,采用IFA分析稳转细胞内NSP_2对p65入核的影响。IFA结果显示NSP_2主要在细胞浆中围绕细胞核表达,在细胞中的表达率达95%以上;western blot结果显示出现120 ku的蛋白条带,与预期相符。结果表明本研究获得了一株稳定表达NSP_2的阳性细胞株,在该稳转细胞内NSP_2对p65的入核并没有影响,这为进一步研究揭示PRRSV的致病机理奠定基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 非结构蛋白nsp2 稳定表达
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hPRRSV GD07株Nsp2基因真核表达载体的构建和表达
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作者 牛晓芸 王艳丽 +1 位作者 钟望 贺东生 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第6期22-25,共4页
为了深入研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2蛋白的免疫特性、结构与功能,试验根据GenBank公布的PRRSV CH-1a株Nsp2基因的核苷酸序列设计1对特异性引物,PCR扩增目的基因,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1(+)... 为了深入研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2蛋白的免疫特性、结构与功能,试验根据GenBank公布的PRRSV CH-1a株Nsp2基因的核苷酸序列设计1对特异性引物,PCR扩增目的基因,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1(+)-Nsp2,并对其进行经PCR、双酶切鉴定及DNA序列测定;将构建的重组质粒转染到Marc-145细胞中,用SDS-PAGE、Western-blot对表达产物进行鉴定。结果表明:RT-PCR扩增出的Nsp2基因大小与预期一致,经SDS-PAGE及Western-blot鉴定Nsp2蛋白在Marc-145细胞中成功表达。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS) 非结构蛋白-2(nsp2) 真核表达
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2016—2017年广东省猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因遗传变异分析 被引量:1
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作者 王艳午 覃燕灵 +5 位作者 董建国 于林洋 刘燕玲 张乐宜 吴志君 宋长绪 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第23期96-101,共6页
为了深入了解2016—2017年广东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NSP2基因的遗传变异情况,试验采用RT-PCR法对从广东省规模化猪场采集的106份疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的肺脏病料进行鉴定,并对分离的PRRSV毒株NSP2基因构建遗传进化... 为了深入了解2016—2017年广东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NSP2基因的遗传变异情况,试验采用RT-PCR法对从广东省规模化猪场采集的106份疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的肺脏病料进行鉴定,并对分离的PRRSV毒株NSP2基因构建遗传进化树,以及进行同源性分析和氨基酸序列比对。结果表明:经RT-PCR法检测有12份病料为阳性,阳性率为11.32%;分离毒株均为美洲型毒株,有11株毒株与高致病性猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(Highly-pathogenicPRRSV,HP-PRRSV)毒株在同一分支上,1株毒株与以NADC30为代表的毒株在同一分支上;同源性分析显示,PRRSVNSP2基因序列与VR-2332的同源性为53.0%~76.7%,与CH-1a的同源性为51.9%~92.5%,与HuN4的同源性为51.3%~98.2%,与JXA1的同源性为51.6%~98.3%,与NADC30的同源性为51.5%~92.2%,与JXA1-P80的同源性为50.9%~98.3%;氨基酸序列比对结果显示,与美洲型代表株VR-2332和低致病性毒株CH-1a相比,除GDth毒株外其余11株PRRSV毒株在高变区均有多处氨基酸位点发生突变。说明2016—2017年广东地区PRRSV流行株以高致病性毒株为主,并且出现NADC30样毒株。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 肺脏 高致病性 病毒分离 非结构蛋白2(nsp2) 流行病学分析
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Nuclear localization of Sindbis virus nonstructural protein nsP2
13
作者 WANG XIAOZHONG,MINGXIAO DINGDepartment of Biology, Bejing University, Beijing 100871,China 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 1993年第1期27-37,共11页
In early infection, approximately 10% of nonstruc-tural protein nsP2 of Sindbis virus was transported into the nuclei of virus-infected BHK-21 cells. Nuclear nsP2 was dominantly associated with nuclear matrix. During ... In early infection, approximately 10% of nonstruc-tural protein nsP2 of Sindbis virus was transported into the nuclei of virus-infected BHK-21 cells. Nuclear nsP2 was dominantly associated with nuclear matrix. During the course of infection, increasing amounts of nsP2 accumulated in the nuclear fraction. A prominent accumulation of nuclear nsP2 occurred early in infection, from 1 h to 3 h postinfection. Meanwhile, a weak NTPase activity was found to be associated with the immunocomplexed nsP2. Nuclear localization of nsP2 and its possible role were discussed in relation to the inhibition of host macro-molecular synthesis. 展开更多
关键词 Sindbis virus nonstructural protein nsp2 nuclear matrix.
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A组轮状病毒非结构蛋白NSP2的研究进展 被引量:2
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作者 范耀春 李传印 陈元鼎 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第2期214-216,共3页
A组轮状病毒非结构蛋白NSP2在病毒复制过程中起重要作用。本文就NSP2蛋白编码基因和基因型、蛋白的表达、结构、功能及其免疫学性质的研究进展作一综述。
关键词 轮状病毒 nsp2蛋白 表达 结构 功能 免疫学性质
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一种包被抗原稳定剂的研制及其特性鉴定 被引量:2
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作者 张茂林 段铭 +5 位作者 关振宏 单晶辉 卢强 孟锐奇 刘红全 何秀苗 《湖北农业科学》 北大核心 2010年第7期1667-1668,1673,共3页
以纯化的狂犬病病毒2μg/mL包被酶标板,将乳糖、麦芽糖、蔗糖和海藻糖分别以5%(W/V)的终浓度加到1%BSA+4%PEG的PBS中,所制备的溶液作为封闭剂,研究其对于37℃贮存板的稳定性,从中选取最佳的封闭剂组合,并研究其对于乙肝表面抗原、猪瘟病... 以纯化的狂犬病病毒2μg/mL包被酶标板,将乳糖、麦芽糖、蔗糖和海藻糖分别以5%(W/V)的终浓度加到1%BSA+4%PEG的PBS中,所制备的溶液作为封闭剂,研究其对于37℃贮存板的稳定性,从中选取最佳的封闭剂组合,并研究其对于乙肝表面抗原、猪瘟病毒E2抗原和猪繁殖与呼吸综合征nsp2基因原核表达产物在包被状态下的稳定性。结果显示,以1%BSA+4%PEG+5%蔗糖的PBS溶液的封闭效果最佳,该封闭剂对于乙肝表面抗原、猪瘟病毒E2抗原和猪繁殖与呼吸综合征nsp2基因原核表达产物也具有良好的稳定性。 展开更多
关键词 抗原 稳定剂 狂犬病病毒 乙肝表面抗原 猪瘟病毒E2蛋白 猪繁殖与呼吸障碍综合征nsp2蛋白
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株致弱毒株特异性抗原表位的鉴定 被引量:1
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作者 姜一峰 周艳君 +10 位作者 田志军 安同庆 肖燕 韦天超 王瑜 彭金美 于海 李国新 闫丽萍 张善瑞 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第3期1-7,共7页
通过对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,HP-PRRSV)HuN4株亲本毒及其不同代次传代毒株Nsp2(Nonstndural protein2)蛋白氨基酸序列比较分析,发现不同代次的Nsp2... 通过对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,HP-PRRSV)HuN4株亲本毒及其不同代次传代毒株Nsp2(Nonstndural protein2)蛋白氨基酸序列比较分析,发现不同代次的Nsp2蛋白存在4处氨基酸点突变,针对每个突变点分别人工合成编码短肽的核苷酸序列,经原核表达后进行Western blot分析。结果表明表达的融合蛋白F65-11(749KGEPVSDQPAK759)能够特异性的与HuN4-F40、HuN4-F65和HuN4-F112感染猪的血清发生反应,而与HuN4F5感染猪的阳性血清和CH-1a株阳性血清不发生反应,证实第4个氨基酸点突变(S754)处存在一个免疫优势抗原表位。将该表位肽段由N端和C端逐步缩短继续鉴定,当N端缩短到第5个氨基酸(754SDQPAK759)C端缩短到第3个氨基酸(749KGEPVSDQ757)时,表达的融合蛋白不能与PRRSV阳性血清反应,最终推测该抗原表位必需氨基酸为753VSDQ756。选取GenBank中提交的部分高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的Nsp2氨基酸序列,对该表位氨基酸所在位置进行序列比较,分析结果显示位于Nsp2蛋白749→759位氨基酸序列高度保守,F65-11变异位点C754→S754为HuN4株系列传代毒株所特有。本研究结果证实抗原表位F65-11可以作为鉴别HuN4-F112弱毒疫苗所诱导产生的特异性抗体的候选抗原。 展开更多
关键词 PRRSV HuN4株 非结构蛋白nsp2 抗原表位
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