罗勒多糖对荷NuTu-19卵巢癌大鼠模型的作用研究

目的:探讨罗勒多糖对荷NuTu-19卵巢癌大鼠模型的作用。方法:建立荷NuTu-19卵巢癌大鼠模型,体内观察罗勒多糖对荷瘤大鼠肿瘤生长及转移行为的影响,取大网膜瘤组织,提取总RNA,经逆转录、荧光标记后与R 20 s大鼠表达谱芯片杂交,经Gene P ix Pro 3.0图像处理软件分析。同时取肿瘤组织,进行常规病理学检测。结果:罗勒多糖处理组肿瘤的数量明显少于对照组,肿瘤体积小于、腹水量显著少于对照组(P<0.05);腹腔脏器转移程度积分与对照组有显著差异(P<0.01);同时采用表达谱芯片技术从药物组肿瘤组织中比较筛选出了268条差异表达基因。结论:罗勒多糖可能是一种抗卵巢癌转移的新型中草药,它对卵巢癌显现的独特效果可能是多个药效靶点综合作用的结果,本研究也显示了表达谱芯片技术在药物效应靶点研究中的优势和价值。

GM-CSF基因修饰的卵巢癌细胞NuTu-19/GM-CSF的构建

目的构建能分泌表达粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)的卵巢癌细胞NuTu-19/GM-CSF。方法将T-h GM-CSF重组质粒转化入感受态大肠杆菌中,筛选出耐药性单克隆菌落送测序。利用PCR技术扩增出GM-CSF目的基因片段,将PCR产物连入pGEM-T easy载体,转化入大肠杆菌中扩增,用SDS碱裂解法提取Teasy-GM-CSF重组质粒,用限制性内切酶酶切Teasy-GM-CSF重组载体,连入经相同酶酶切的pLXSN反转录病毒载体中。用磷酸钙沉淀法转染PA317包装细胞系进行病毒包装,用含有病毒的上清液感染卵巢癌NuTu-19细胞,经G418加压筛选感染成功的NuTu-19/GM-CSF细胞,用免疫细胞化学和ELISA法检测NuTu-19/GM-CSF分泌表达GM-CSF蛋白的情况。结果T-h GM-CSF重组质粒测序结果与GenBank Accession#:NM_000758基因序列对比后确定为人类GM-CSF基因编码序列;PCR产物酶切电泳在Mark 400-500 bp中有一条带,符合GM-CSF基因序列长度;重组Teasy-GM-CSF质粒用EcoRⅠ、BamHⅠ限制性内切酶酶切后,电泳鉴定在400-500 bp之间有一目的条带,重组反转录病毒质粒pLGM-CSFSN酶切电泳有目的条带;G418加压筛选感染后的NuTu-19细胞,14 d后慢慢形成单克隆继续生长;免疫细胞化学检测到感染成功的NuTu-19细胞膜表面有明显的棕褐色颗粒沉淀,ELISA法检测细胞培养上清液中GM-CSF的质量浓度为150 pg/mL。结论成功构建了能分泌表达人GM-CSF蛋白的卵巢癌细胞NuTu-19/GM-CSF,为以后研究卵巢癌免疫治疗提供必备、有效、可靠的工具基础。

压电免疫传感器的质量灵敏度分布优化设计

从石英晶体微天平（QCM）质量灵敏度表达式出发,分析了影响其质量灵敏度分布的因素。在此基础上设计了一种新型电极配置结构的QCM,并利用9MHz的QCM仿真。仿真结果显示,在全电极区域,新型电极结构比圆形电极结构的QCM质量灵敏度分布均匀。最后,采用10 MHz的QCM免疫传感器对卵巢癌进行了实验验证,结果表明,NuTu-19抗体质量在74-370ng内,频率呈线性变化,说明改进电极结构的QCM免疫传感器具有较好的质量灵敏度分布。