暖宫七味丸对环磷酰胺诱导的卵巢早衰小鼠卵巢功能的影响

目的:观察蒙药暖宫七味丸对环磷酰胺诱导的卵巢早衰小鼠是否有保护作用。方法:将动情周期正常的雌性小鼠随机分为5组:空白对照组,环磷酰胺组,暖宫七味丸低剂量组、中剂量组和高剂量组。除空白对照组以外,其余各组小鼠腹腔注射环磷酰胺制备卵巢早衰模型[首剂量50 mg/kg,之后按8 mg/(kg·d),共14 d],造模结束后空白对照组和环磷酰胺组给予0.1 mL生理盐水灌胃,暖宫七味丸低、中、高剂量组分别予0.25、0.5、0.8 g/kg灌胃,连续14 d。每日监测各组小鼠的体质量变化及动情周期改变,干预结束后采集小鼠血清检测抗苗勒氏管激素(AMH)、雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)水平,取卵巢组织切片染色后分析。结果:与空白对照组比较,环磷酰胺组小鼠体质量下降,动情周期消失,血清E2和AMH水平显著降低,FSH水平显著提高(P<0.01),卵巢切片见闭锁卵泡明显增加,间质纤维化。与环磷酰胺组比较,暖宫七味丸各剂量组小鼠体质量无明显差异;中、高剂量组小鼠动情周期明显恢复;而高剂量组小鼠的血清E2水平显著提高(P<0.05),AMH及FSH水平未见明显变化(P>0.05),卵巢组织及结构有一定程度改善。结论:蒙药暖宫七味丸能在一定程度上改善环磷酰胺所致损伤的卵巢功能,采用高剂量治疗14 d明显恢复动情周期,改善血清激素水平,修复卵巢受损组织,对卵巢早衰起一定治疗作用。

暖宫七味丸的药效学研究

目的研究暖宫七味丸对子宫功能的影响及镇痛作用。方法观察药物对大鼠离体及在体子宫收缩的影响;采用苯甲酸雌二醇、缩宫素诱发的雌性小鼠子宫痉挛性疼痛和醋酸性疼痛的扭体反应,观察暖宫七味丸的镇痛作用。结果暖宫七味丸能使大鼠离体及在体子宫平滑肌松弛,并具有明显镇痛作用。结论暖宫七味丸对子宫平滑肌的影响及镇痛作用是用于治疗月经不调、气滞腰痛、小腹冷痛的重要药理基础。

暖宫七味丸的质量标准研究

目的修订暖宫七味丸的质量标准。方法采用显微鉴别方法,鉴别暖宫七味丸中豆蔻、天冬、肉豆蔻、沉香、手掌参及丁香;采用GC法,鉴别暖宫七味丸中豆蔻的主成分桉油精;采用HPLC法,测定暖宫七味丸的总丁香酚含量。结果显微鉴别及气相色谱鉴别专属性强。含量测定丁香酚线性范围为0.08560～3.264μg;样品的平均加样回收率为95.87%(n=6)。结论此方法简便、准确,重复性好,可作为暖宫七味丸的质量控制方法。

暖宫七味丸联合针刺治疗子宫肌瘤临床研究

目的:观察暖宫七味丸联合针刺疗法保守治疗子宫肌瘤的临床疗效。方法:将120例行保守治疗的子宫肌瘤患者按随机数字表法分为2组各60例。对照组采用常规西医保守治疗,观察组在对照组治疗方案的基础上给予针刺联合暖宫七味丸口服治疗。观察比较2组临床疗效、中医证候评分、血液流变学、血清炎症因子、不良反应发生率等情况。结果:临床疗效总有效率观察组88.33%,对照组73.33%,差异有统计学意义(P <0.05)。治疗后,观察组中医证侯腹部包块、带下增多、月经紊乱、面色灰暗等评分均低于对照组,血液流变学指标包括血浆黏度、红细胞聚集指数均低于对照组,血清炎症因子指标包括血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平均低于对照组,组间比较,差异均有统计学意义(P <0.05)。不良反应发生率观察组16.67%,对照组11.67%,组间比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论:暖宫七味丸联合针刺疗法保守治疗子宫肌瘤临床疗效显著,能改善患者的中医证候,降低患者的血液流变学和血清炎症因子水平,治疗安全性好。

基于HPLC指纹图谱和多成分含量测定结合化学计量学的暖宫七味丸质量评价研究

目的 建立HPLC指纹图谱与多成分含量测定方法,结合化学计量学分析,评价暖宫七味丸(Nuangong Qiwei Pills,NQP)的质量。方法 采用RP-HPLC法,色谱柱为Grace Alltima HP C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-水,梯度洗脱;体积流量为1.0 mL/min;检测波长为220 nm。对4家生产企业14批NQP进行指纹图谱及4种指标性化学成分含量测定,利用化学模式识别法通过SPSS 20.0对含量测定数据进行聚类分析和通过SIMCA 14.1软件对NQP 4种定量成分进行主成分分析(principal component analysis,PCA)并将共有峰按峰面积进行差异性分析。结果 建立了NQP指纹图谱,共匹配出21个共有峰,分别归属沉香、丁香、肉豆蔻、豆蔻4味药材,指纹图谱相似度>0.98;对照品指认沉香四醇(6号峰)、丁香酚(8号峰)、肉豆蔻木脂素(14号峰)、去氢二异丁香酚(20号峰)4种化学成分,质量分数分别为0.120~0.416、1.574~5.018、0.103~0.205、0.093~0.139 mg/g;当平方欧式距离为15时,14批样品通过聚类分析分成3类,PCA结果与聚类分析结果一致;通过对共有峰峰面积为变量进行正交偏最小二乘-判别分析建模分析,RX2为0.696,Q2为0.597,均大于0.5,建立的模型稳定可靠,对照品指认的4种化学成分均为重要差异性标志化合物。结论 指纹图谱及含量测定方法准确可靠,可用于NQP质量控制及综合评价。

基于“化学物质组-血中移行成分-药动学”的蒙药暖宫七味丸质量标志物研究

目的研究蒙药暖宫七味丸的化学物质组、血中移行成分及药动学,筛选出暖宫七味丸潜在的质量标志物。方法综合运用UPLC-Triple-TOF-MS/MS、GC-MS技术结合数据库及对照品对比,鉴别暖宫七味丸的化学物质组、血中移行成分;使用UPLC-Q-TRAP-MS/MS研究其体内药动学特征。结果采用UPLC-Q-TOF-MS/MS鉴别出暖宫七味丸中的76个化学成分,采用GC-MS鉴别出35个化合物。经大鼠ig给药后鉴别出19个吸收进入血中的原型成分,其中,沉香四醇、绿原酸、科罗索酸表现出良好的可测性,且具有明显的药动学特征。结论沉香四醇、绿原酸、科罗索酸在暖宫七味丸的化学物质组-血中移行成分-药动学研究中具有良好的可测性和可追溯性,可作为暖宫七味丸潜在的质量标志物。

基于网络药理学的蒙药暖宫七味丸治疗原发性痛经作用机制及实验验证研究

目的利用网络药理学方法,探究暖宫七味丸治疗痛经的作用机制并采用痛经模型大鼠对其进行实验验证。方法使用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、中医药整合药理学研究平台(TCMIP)和网络药理学在线数据库(TCMID)结合文献报道确定暖宫七味丸的活性成分,通过Swiss Target Prediction在线平台得到活性成分对应的靶点。利用DisGeNET数据库和GeneCard数据库确定原发性痛经的相关靶点,手动筛选化合物-疾病的共同靶点,将潜在共同靶点蛋白上传至Biogrid平台,获取药物-疾病靶蛋白相互作用(PPI)网络,利用Cytoscape 3.7.2软件对PPI网络进行网络图优化和拓扑学分析。利用DAVID 6.8数据库对潜在靶点进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析及基因本体论(GO)注释分析。动物实验验证采用缩宫素致痛经大鼠模型观察暖宫七味丸高、中、低剂量(2.0、1.0、0.5 g·kg^(−1))的镇痛作用,采用Western blotting方法观察暖宫七味丸高、低剂量(2.0、0.5 g·kg^(−1))对痛经模型大鼠子宫组织环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达的影响,并测定各组大鼠子宫组织中前列腺素F2α(PGF2α)水平。通过大鼠离体子宫肌张力实验观察暖宫七味丸水溶液(22.5、11.25 mg·mL^(−1))对大鼠子宫收缩幅度和收缩频率的影响。结果网络药理学预测结果显示,暖宫七味丸治疗痛经的潜在靶点有68个,PPI核心靶点有IL-6、PTGS2、TNF和TP53等。涉及到的通路有炎症相关的信号通路、癌症通路和雌激素信号通路等,涉及到的生物功能有炎症反应、一氧化氮的生物调节过程和对激素的反应和对血管的调节功能等。动物实验结果显示,与模型组比较,暖宫七味丸高、中、低剂量组和阳性药组大鼠的扭体反应次数显著减少(P<0.01、0.001),同时扭体反应的潜伏期均明显延长(P<0.01、0.001);暖宫七味丸高、低剂量组痛经模型大鼠子宫组织中过氧化物合成酶2(PTGS2)相关蛋白COX-2表达显著下调(P<0.001)),同时子宫组织中PGF2α水平显著降低(P<0.001)。暖宫七味丸高、低剂量水提液对大鼠子宫收缩幅度和频率均有显著的抑制作用(P<0.001)。结论暖宫七味丸可以通过下调PTGS2靶点进而调控子宫肌张力起到治疗痛经的效果。

氯米芬联合暖宫七味丸治疗不孕多囊卵巢综合征的前瞻性对照研究

目的:探讨氯米芬联合暖宫七味丸治疗不孕多囊卵巢综合征的有效性及安全性。方法:前瞻性选取2014年4月至12月我院收治的有生育需求的不孕多囊卵巢综合征患者160例,按数字表随机法分为联合组(n=80)和对照组(n=80)。对照组单纯口服氯米芬治疗,联合组在对照组的基础上进行暖宫七味丸治疗。比较两组疗效、治疗前后的内分泌激素水平、子宫内膜厚度、卵巢体积、月经情况、随访1年妊娠情况及不良反应和并发症发生情况。结果:联合组治疗有效率和随访1年妊娠率分别为97.50%和53.75%,均高于对照组的88.75%和20.00%(P<0.05)。与对照组比较,联合组治疗后的血清黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、睾酮(T)、胰岛素(INS)等内分泌激素水平降低,卵巢体积减小,子宫内膜厚度变薄,月经改善率升高(P<0.05)。与治疗前比较,两组治疗后的血清内分泌激素水平均降低,卵巢体积减小,子宫内膜厚度变薄(P<0.05)。两组治疗及随访期间均无卵巢过度刺激综合征、消化道反应等不良反应和并发症的发生。结论:氯米芬联合暖宫七味丸治疗不孕多囊卵巢综合征疗效显著,可有效调节激素水平,减小子宫内膜厚度和卵巢体积,促进排卵,改善月经状况,提高妊娠率,且无明显的不良反应和并发症发生,具有良好的有效性及安全性,值得临床推广应用。