花黄色素调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对冠心病大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨花黄色素(SY)调控腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/核转录因子-κB(NF-κB)对冠心病(CHD)大鼠心肌损伤的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为正常对照组(NC组,生理盐水)、模型组(Model组,生理盐水)、SY组(100 mg/kg SY)、EX-527组(47 mg/kg EX-527)、SY+EX-527组(100 mg/kg SY+47 mg/kg EX-527),每组12只,持续4周给予相应药物。试剂盒检测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平和心肌白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;苏木素-伊红(HE)染色法进行心肌组织病理学观察;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测心肌组织AMPK/SIRT1/NF-κB通路相关蛋白表达。结果:与NC组相比,Model组大鼠心肌细胞数量少且排列杂乱,细胞核皱缩,TC、TG、LDL-C、氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显上升(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及磷酸化-AMPK(p-AMPK)/AMPK、SIRT1蛋白水平明显下降(P<0.05)。与Model组比较,SY组大鼠心肌细胞数量增多且排列整齐有序,TC、TG、LDL-C、ox-LDL、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显下降(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及p-AMPK/AMPK、SIRT1蛋白水平明显上升(P<0.05);而EX-527组以上指标呈现相反趋势。与SY组相比,SY+EX-527组大鼠心肌损伤加重,TC、TG、LDL-C、ox-LDL、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显上升(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及p-AMPK/AMPK、SIRT1蛋白水平明显下降(P<0.05)。结论:SY可能通过调控AMPK/SIRT1/NF-κB通路降低氧化应激,减轻炎症反应,对冠心病大鼠心肌损伤起到一定改善作用。

黄河流域国家级文物保护单位时空演变及影响因素

以黄河流域国家级文物保护单位为研究对象,运用核密度估计、最近邻指数等方法,分析国家级文物保护单位的时空演变特征,进而采用皮尔逊相关系数和缓冲区分析方法,探索其影响因素。结果表明:(1)在时间分布上,黄河流域国家级文物保护单位总体呈现增长趋势。(2)在空间分布上,黄河流域国家级文物保护单位分布不均匀,集中分布特征明显。不同类别国家级文物保护单位的集聚程度具有差异性,按集聚程度从高到低分别为古建筑、石窟寺及石刻、近现代重要史迹及代表性建筑、古遗址、古墓葬。(3)在空间演变上,黄河流域国家级文物保护单位呈现中东部集聚、中西部集聚和全区域零散三阶段分布状态,但绝大多数时期分布在黄河流域的中东部。(4)在空间影响因素上,黄河流域国家级文物保护单位的空间分布受到自然因素与社会因素的共同影响。

红花黄色素调节NF-κB/NLRP3信号通路对心肌梗死大鼠心肌细胞焦亡和炎性损伤的影响

目的:探究红花黄色素(CY)调节核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对心肌梗死(MI)大鼠心肌细胞焦亡和炎性损伤的影响。方法:通过冠状动脉左前降支结扎法建立大鼠MI模型。并将72只SPF级雄性大鼠分为:对照组(Control组)、假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、低剂量CY组(CY-L组,20mg/kg)、高剂量CY组(CY-H组,40mg/kg)和高剂量CY+NF-κB激活剂组(CY-H+LPS组,CY 40mg/kg+LPS 10mg/kg),每组12只。造模后腹腔注射给药,1次/d,共28d。给药结束后对各组大鼠进行超声心电图检查,检测心功能变化情况。2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)-伊文斯蓝(EB)法和免疫荧光法检测各组大鼠心肌梗死面积和心肌细胞焦亡比例。苏木素伊红(HE)和马松(Masson)染色观察心肌组织病理学变化。试剂盒检测大鼠心肌中白细胞介素(IL)-1β、IL-18和乳酸脱氢酶(LDH)水平。Western Blot检测心肌组织中NF-κB、NLRP3、cleaved-caspase1、胃泌素D-N(GSDMD-N)蛋白表达。结果:与Sham组相比,Model组大鼠心肌组织病理损伤严重,心功能降低,心肌梗死面积、心肌细胞焦亡比例、心肌组织中IL-1β、IL-18、LDH水平和NF-κB、NLRP3、GSDMD-N、cleaved-caspase1蛋白表达水平显著提高(P<0.05)。与Model组相比,CY-L组、CY-H组大鼠心功能显著提高,心肌组织损伤减轻,细胞焦亡减少,炎症因子IL-1β、IL-18、LDH水平显著下降,NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白表达显著降低(P<0.05)。LPS减弱了高剂量CY对MI大鼠心肌细胞焦亡和炎性损伤的抑制作用(P<0.05)。结论:CY可能通过抑制NF-κB/NLRP3信号通路,减少MI大鼠心肌细胞的焦亡和炎性损伤。

黄河流域非物质文化遗产空间分布格局分析

本文以黄河流域五批次共1 042项国家级非物质文化遗产为研究对象,利用区位熵、最近邻比率、核密度等方法,对其空间分布特征进行研究分析,旨在为黄河流域非遗协同保护发展提供参考。结论如下:(1)黄河流域非遗以传统技艺类为主,传统体育、游艺与杂技和传统医药类较为稀缺;(2)黄河流域非遗空间聚集性较强,主要分布于中下游地区,呈现中心外围扩散结构的多核心“三角形”空间格局。

NGF与CNTF促进周围神经轴浆运输功能恢复的比较研究

目的: 比较神经生长因子 (nervegrowthfator, NGF) 与睫状神经营养因子 (cili aryneurotrophicfactor, CNTF) 对周围神经轴浆运输功能恢复的促进作用。方法: 利用自行研制的梭形双通道桥接管桥接 32只SD大鼠坐骨神经长 10mm缺损。将动物随机分为 2组。A组: 医用几丁糖凝胶组; B组: 医用几丁糖凝胶+NGF和医用几丁糖凝胶 +CNTF。术后 12、16周对再生神经行辣根过氧化物酶和核黄逆行示踪, 并取再生神经行Holmes银染。结果: 术后 12、16周, Holmes银染观察到A组两支管内再生纤维无明显差异, B组CNTF侧再生纤维较NGF侧再生神经外膜薄, 排列整齐, 粗细均匀; 辣根过氧化物酶和核黄显示: 与NGF侧相比,CNTF侧再生神经示踪后, 脊髓内被标记的阳性神经元数目多, 分布稠密。结论: CNTF对周围神经再生纤维形态结构和轴浆运输功能的恢复均优于NGF。

大白鼠外侧隔核的传入性神经纤维联系—HRP、荧光素法研究

本文应用HRP和荧光素标记法对大白鼠外侧隔核的传入性神经纤维联系进行了研究。实验结果表明,外侧隔核的传入神经纤维来源于端脑海马的CA_(1-4)区、杏仁皮质核、内嗅区皮质、斜角带核、视前内侧核、视前外侧核;丘脑的室周核和带旁核;底丘脑的Forel's H_2区和未定带;下丘脑的前核、外侧核、后核以及乳头体上核;中脑的腹侧被盖区。

羟基红花黄色素A对脑缺血大鼠皮层炎症信号转导途径相关因子的抑制作用

羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)是红花中的单体有效成分。本研究采用线栓法制备大鼠永久性脑缺血模型,观察HSYA对永久性脑缺血大鼠炎症信号转导途径相关因子的抑制作用。于缺血后3、6、12和24 h取大脑皮层。Western blotting检测细胞核及胞浆核转录因子κB(NF-κB)p65及胞浆磷酸化IκB-α(pIκB-α)蛋白水平表达;Trans AM试剂盒检测NF-κB DNA结合活性;RT-PCR检测炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10转录水平表达。结果表明,大鼠脑缺血后多次静脉注射HSYA(10 mg.kg-1),能显著抑制p65核转位以及IκB-α的磷酸化,降低NF-κB DNA结合活性,并降低促炎因子TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达,升高抗炎因子IL-10 mRNA表达水平。提示HSYA的抗脑缺血作用可能与其抑制炎症信号途径中NF-κB激活及炎性因子转录水平表达有关。

氨氮胁迫对黄河鲤幼鱼红细胞微核、核异常的影响

以黄河鲤幼鱼为实验动物,研究氨氮暴露对鲤鱼红细胞微核、核异常的影响。结果表明:氨氮可引起鲤鱼红细胞微核及核异常率发生明显变化,随着氨氮暴露浓度的增加,鲤鱼红细胞微核及核异常率呈现规律性上升变化,且方差分析差异显著(P<0.01);随着氨氮暴露时间的延长,红细胞微核率呈现上升趋势,核异常及总核异常率呈现先升再降趋势,方差分析差异不显著(P>0.05)。因此在试验浓度范围内氨氮对鲤鱼红细胞具有明显的遗传毒性,高密度养殖条件下氨氮的毒性不容忽视。

红花黄素A调控核受体TR3胞内移位抑制氧化应激对心肌细胞的损伤

目的探究红花黄素A调控核受体TR3胞内移位抑制氧化应激对心肌细胞的损伤。方法利用H2O2诱导H9c2心肌细胞建立心肌氧化应激模型,不同浓度红花黄素A处理H2O2诱导H9c2心肌细胞24 h,CCK-8法检测心肌细胞存活率,流式细胞法检测心肌细胞凋亡率,比色法检测SOD、MDA水平,免疫荧光法观察TR3在细胞内的定位,Western blot法检测TR3在细胞核和线粒体表达以及凋亡通路蛋白Bcl-2、Bax、cl caspase-9表达。结果与模型组相比,红花黄素A增加H9c2心肌细胞存活率,降低细胞凋亡率,升高SOD水平,降低MDA水平,促进Bcl-2蛋白表达,抑制Bax、cl caspase-9蛋白表达(P<0.05,P<0.01),呈浓度依赖性。随着红花黄色素A的浓度增加,TR3核受体的移位逐渐减小并聚集在细胞核附近。结论红花黄素A能够调控核受体TR3从细胞核向线粒体的转移,并通过抑制线粒体凋亡通路,从而减轻氧化应激对心肌细胞的损伤。

支配牙髓的痛感觉神经元的分离及其电生理特征研究

实验利用全细胞膜片钳技术研究了荧光染料核黄(NY)标记的支配牙髓的痛感觉神经元的电生理特征。将NY注入大鼠的牙髓,急性分离标记的三叉神经节(TG)神经元,即支配牙髓之痛敏神经元,测量NY标记细胞的直径,并和辣根过氧化物酶(HRP)标记的牙髓痛感觉神经元进行比较;同时检测NY标记细胞的膜电位,并进行全细胞膜片钳记录。结果显示:HRP标记细胞为中、小细胞,未见大细胞;而NY标记细胞均为小直径细胞,平均直径为24.25±3.10μm。膜片钳实验共检测了35个NY标记细胞,45.7%(16/35)的细胞对外加药物有反应,静息膜电位为45.48±7.55mV,其中25%(4/16)的细胞对外加ATP(10-4mol/L)有反应,为快去敏感内向电流;87.5%(14/16)的细胞对GABA(10-4mol/L)有反应,为慢去敏感内向电流;37.5%(6/16)的细胞对5-HT(10-4mol/L)有反应,均为快去敏感内向电流。结果提示:利用荧光示踪剂NY可以追踪、分离出支配牙髓的痛感觉神经元,其膜电位接近正常TG神经元的静息电位,且标记细胞对外加药物有反应。结果证明:NY不会影响细胞的生理活性,适用于全细胞膜片钳记录。利用该标记细胞可对痛感觉神经元膜上的受体及离子通道进行深入研究。

延边黄牛卵母细胞去核方法的研究

用改进的Willaden去核法与McGrath-Solter去核方法对延边黄牛卵母细胞进行去核操作,比较其去核操作效率。结果表明,本实验改进的willaden去核法——挤压去核法,无论在去核操作时间(1．0 min／枚,P<0．05)上,还是在去核效率(94%,P<0．01)上都显著地高于McGrath-Solter去核法(1．4 min／枚、72%)。表明改进的Willaden去核方法是一种适用于延边黄牛卵母细胞操作的快速、简单、实用的去核方法。

羟基红花黄色素A通过影响PCNA表达和MEK-ERK1/2信号通路抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的探讨羟基红花黄色素A(HYSA)影响增殖细胞核抗原(PCNA)表达和MEK-ERK1/2信号通路抑制血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的分子机制。方法采用贴块法培养大鼠血管平滑肌细胞,用血小板源生长因子(PDGF)诱导其增殖,采用MTT法检测HYSA对平滑肌细胞增殖的抑制作用;采用Western blot和免疫组织化学方法检测HYSA对PCNA表达及对MEK-ERK1/2信号通路的影响。结果HYSA浓度依赖性地抑制PDGF诱导的VSMC增殖,降低PCNA的表达,阻断PDGF受体的激活和MEK/ERK信号通路的活化,但不影响JNK和p38MAPK的活性。结论 HYSA通过降低PCNA表达和阻断MEK-ERK1/2信号通路抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖。

通过猫脊髓背外侧索下行的单胺能神经元定位研究

将荧光染料核黄(NY)的逆行追踪和单胺荧光组织化学方法相结合,用于对通过猫脊髓背外侧索(DLF)下行纤维的胞体的定位。在4只猫上,于脊髓的T_(2)节段的DLF作单侧横切,并用NY处理以后,其脑干再用Falck和Hillarp的方法处理。在同侧的中缝大核和与之相毗邻的网状大细胞核内,看到被NY标记的5-羟色胺能神经元;在同侧上橄榄核的背外侧、蓝斑和蓝斑下核内,看到被NY标记的去甲肾上腺素神经元。这些结果暗示,DLF下行的单胺能纤维,主要起源于延髓的5-羟色胺能细胞群B_(3)和脑桥的去甲肾上腺素能细胞群A_(5)~A_(7)。

延边黄牛体细胞核移植的研究进展

牛体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)是一套极其复杂的技术体系,它包括卵母细胞的成熟、供核细胞的准备、卵母细胞的显微操作、细胞融合、卵母细胞激活和胚胎培养。因此,许多因素影响着核移植胚胎发育。虽然陆续有克隆牛出生的报道,但是克隆效率依然低下。本综述对延边黄牛体细胞核移植体系的6个方面进行简单综述,以期为探究延边黄牛体细胞克隆的最优化条件、建立最优化的培养体系、提高克隆效率提供参考。

不同融合液对延边黄牛体细胞核移植效率的影响

[目的]探寻适宜延边黄牛体细胞核移植的最佳融合液。[方法]用延边黄牛颗粒细胞为供体细胞。试验1,比较3种浓度(0.25、0.280、.30 mol/L)3种融合液(蔗糖、D-山梨醇、甘露醇)对核移植胚胎融合率及重组胚体外发育的影响。试验2,比较3种0.28 mol/L融合液对核移植效率的影响。[结果]3种浓度的蔗糖、D-山梨醇、甘露醇融合液的融合率和卵裂率差异均不显著,但0.28 mol/L融合液处理的重组胚后期发育相对较好。3组融合液融合率(88.44%、86.83%、86.85%)差异不显著,蔗糖、甘露醇融合液卵裂率(87.98%、86.06%)差异不显著,在0.05水平上显著高于D-山梨醇融合液(78.64%);蔗糖、甘露醇融合液囊胚发育率(22.16%、19.91%)差异不显著,在0.05水平上显著高于D-山梨醇融合液(10.14%)。[结论]适宜延边黄牛体细胞核移植的最佳融合液为0.28 mol/L蔗糖融合液。

羟基红花黄色素A对小鼠肝癌移植瘤NF-κB信号通路的影响

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对小鼠H22肝癌移植瘤NF-κB信号通路的影响。方法建立H22移植性肝癌小鼠模型50只,随机分为HSYA高剂量组(4.5 mg/kg)、HSYA中剂量组(2.25 mg/kg)、HSYA低剂量组(1.125 mg/kg)、阳性对照组(50mg/kg)和生理盐水对照组,给药14d。免疫印迹检测核转录因子-κB(NF-κB)p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκB-α)及NF-κB抑制蛋白(IκB-α)的水平。结果 HSYA高、中、低剂量组能够下调细胞核p65蛋白的表达,抑制活化p65核移位,抑制IκB-α的磷酸化和胞质内IκB-α的降解即降低NF-κB的转录活性,尤以中剂量组效果最显著。结论 HSYA能抑制小鼠肝癌移植瘤NF-κB的转录活性。

预分散C.I.颜料黄14的制备

以3,3'-二氯联苯胺盐酸盐(DCB)和邻甲基乙酰乙酰苯胺(AAOT)为原料,在偶合反应结束后,向制备的C.I.颜料黄14(PY14)水分散液中添加聚乙烯蜡(PEW),考察了PEW添加量、加热温度、加热时间、搅拌转速、pH、PEW粒径对颜料性能的影响。得到较优制备条件为PY14与PEW质量比1.0∶1.0、加热温度80℃、加热时间20 min、40～60目PEW、pH=7.0、转速250 r/min,在该条件下制备出直径为1～2 mm、粒径均一、具有核壳结构和疏水性能的预分散C.I.颜料黄14(预分散颜料PY14)。预分散颜料易于从水相分离,滤饼含水量从PY14颜料的79.29%降低至预分散颜料PY14的59.85%,过滤时间为PY14颜料的1/20;分散过滤值(FPV)从PY14颜料的0.75 MPa/g降低至预分散颜料PY14的0.06 MPa/g;所得颜料不需经过强力粉碎,可抑制粉尘污染的产生;在保持与原颜料相近的色光、饱和度、鲜艳度等颜料性能前提下,提升了颜料的着色力。

超高压处理对大黄鱼鱼糜水分状态和蛋白质结构的影响

为了研究超高压处理大黄鱼鱼糜的凝胶特性,该文利用低场核磁共振、拉曼光谱研究了水浴加热和超高压处理鱼糜凝胶化过程中水分存在状态和蛋白质结构的变化,并分析了它们和鱼糜凝胶特性指标的相关性。结果表明,与水浴加热处理相比,超高压处理能改善鱼糜凝胶特性,使其保水率、弹性、内聚性增大(P<0.05),硬度下降(P<0.05)。但随压力增大,鱼糜的内聚性、弹性、咀嚼性呈下降趋势(P<0.05),保水率变化不显著(P>0.05);低场核磁共振分析显示超高压使鱼糜自由水组分消失,不易流动水的流动性增强(P<0.05),结合水的含量增加(P<0.05);拉曼光谱分析显示超高压使鱼糜蛋白α-螺旋含量显著增加(P<0.05),无规卷曲和β-转角含量显著下降(P<0.05),三级结构也发生变化;相关性分析表明,蛋白质结构、水分状态及含量与鱼糜的质构、保水率之间存在特定相关性。说明不同处理条件下,鱼糜的蛋白质结构和水分状态发生改变,从而表现出相应的质构、保水率等凝胶特性。以上结果可为鱼糜凝胶特性的评价及改进提供检测方法及理论依据。

基于NMR和(1)^H-MRI技术的不同糖度锦绣黄桃耐贮性评价

目的:评价不同含糖量黄桃果实的耐贮性。方法:将不同含糖量的锦绣黄桃贮藏于(2±0.5)℃的冷库中,测定贮藏0,14,21,28,35,(35+3)d的果实呼吸强度、乙烯释放速率、可溶性固形物含量、质构,并利用核磁共振技术(NMR)和质子核磁共振成像((1)^H-MRI)技术测定果实自由水含量和弛豫时间以观察贮藏期间果实变化规律。结果:贮藏期间,低糖组果实果肉组织硬度、果肉紧实度及果实咀嚼性特性下降速率较快,尤其是贮藏后期(14~35 d)水分丧失量较大,耐贮性较差;高、中糖组果实质构品质保持较好,耐贮性好,贮藏前期(0~21 d)水分含量较高且无明显变化,贮藏后期水含量略下降但仍高于低糖组。结论:含糖量高的锦绣黄桃货架期可达3 d,在贮藏期间可保持较高的自由水含量和品质,耐贮性较好,0~14 d为冷藏下的优质保鲜期,21 d为安全保鲜期,28~35 d为品质劣变期。

小麦黄花叶病毒编码VPg蛋白N端结构是VPg与核仁蛋白Fibrillarin互作区域

小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)属于马铃薯Y病毒科大麦黄花叶病毒属成员,其基因组是由两条正义单链RNA组成,共编码10个蛋白。其中,VPg(Viral protein genome-linked)作为病毒末端结合蛋白,与病毒基因组RNA 5’端共价连接。利用软件分析WYMV VPg蛋白氨基酸序列发现其N端具有核定位信号(NLS)序列,C端具有核输出信号(NES)序列。通过激光共聚焦显微镜观察VPg与GFP融合蛋白在烟草细胞中的表达情况发现,GFP-VPg主要定位于细胞核中。利用eYFP(n)标记核仁结构蛋白Fibrillarin与VPg进行双分子荧光互补实验发现,VPg与Fibrillarin互作且定位于细胞核中。根据VPg结构特点构建一系列缺失突变体与Fibrillarin的互作实验验证了它们之间的互作区域发生在N端NLS区域。