原发性肝细胞癌中核因子κB、核仁蛋白14的表达及与临床特征的关系

目的分析原发性肝细胞癌组织中核因子κB(NF-κB)、核仁蛋白14(NOP14)的表达及与临床特征的关系。方法收集92例原发性肝细胞癌患者的肿瘤组织及癌旁组织,检测NF-κB、NOP14的表达水平,并对NF-κB、NOP14与临床特征的相关性进行分析。结果肿瘤组织中NF-κB、NOP14相对表达量均明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Ⅱ~Ⅲ期、有门静脉癌栓、有淋巴结转移、低分化原发性肝细胞癌患者的肿瘤组织中NF-κB、NOP14相对表达量均明显高于Ⅰ期、无门静脉癌栓、无淋巴结转移、中高分化原发性肝细胞癌患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。NF-κB、NOP14表达与原发性肝细胞癌患者TNM分期、门静脉癌栓、淋巴结转移及分化程度均呈正相关(P﹤0.01)。结论NF-κB、NOP14在原发性肝细胞癌组织中呈异常高表达;相关性研究发现NF-κB、NOP14表达水平变化与原发性肝细胞癌患者临床特征存在密切关联,在原发性肝细胞癌病理生理发生发展过程中起调节作用,检测NF-κB、NOP14表达水平对评估原发性肝细胞癌患者病情具有重要意义。

核蛋白14对黑素瘤新生血管形成的影响及机制研究

目的分析核蛋白14(NOP14)对黑素瘤血管形成的影响。方法收集2016年1月至2018年12月在广州市第一人民医院经病理确诊的40例黑素瘤患者的黑素瘤组织,免疫组化检测NOP14和CD31[以微血管密度(MVD)表示]的表达。将黑素瘤细胞A375和SK-MEL-1细胞分别分为4组,分别转染空载体(空载体组)、NOP14过表达载体(NOP14组)、靶向NOP14的siRNA(siNOP14组)和阴性对照siRNA(siNC组)。荧光定量PCR和Western印迹检测各组NOP14 mRNA和蛋白的表达,Western印迹和ELISA检测细胞及其培养基中血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体(VEGFR)的表达。利用Transwell小室构建以上各组A375、SK-MEL-1细胞与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养模型,利用CCK8、Transwell小室和Matrigel血管拟态实验检测共培养后各组HUVEC的增殖、迁移、侵袭和管腔形成能力。采用线性回归模型分析黑素瘤组织中NOP14表达水平与MVD的关系,多因素方差分析检验细胞增殖活性的差异,其余实验指标的两组之间比较采用独立样本t检验。结果NOP14高表达组(20例)黑素瘤组织MVD为44±13,中表达组(17例)为58±16,低表达组(3例)为62±11,且NOP14表达和MVD呈负相关(r=-0.525,P=0.017)。与空载体组相比,NOP14组A375和SK-MEL-1细胞及培养基中VEGF和VEGFR的表达水平均显著降低(P<0.05)。与siNC组相比,siNOP14组A375和SK-MEL-1细胞及培养基中VEGF和VEGFR的表达水平均显著升高(P<0.05)。在A375与HUVEC共培养模型中,与空载体共组相比,NOP14组HUVEC的增殖活性(F=131.85,P<0.05)和迁移细胞数[22±5比63±8,t=7.07,P=0.002)、侵袭细胞数(14±5比45±10,t=4.94,P=0.008)及分支节点数(8±2比14±3,t=5.06,P<0.001)均显著下降;与siNC组相比,siNOP14组HUVEC的增殖活性(F=79.92,P<0.01)和迁移细胞数(152±30比59±4,t=5.36,P=0.006)、侵袭细胞数(134±21比50±8,t=6.40,P<0.001)及分支节点数(27±3比15±4,t=6.10,P<0.001)显著升高。在SK-MEL-1细胞与HUVEC共培养模型中,各组HUVEC的增殖、迁移和侵袭活性以及管腔形成能力和与各组A375细胞共培养的HUVEC变化趋势一致。结论黑素瘤组织中NOP14表达和MVD呈负相关,NOP14具有抑制黑素瘤血管新生的作用。

胰腺癌小鼠模型中核仁蛋白14和CD31表达与肿瘤进展的相关性研究

目的探讨胰腺癌小鼠模型中核仁蛋白14（NOP14）和CD31的表达水平与肿瘤进展的相关性。方法收集2013年1月至2015年12月经北京协和医院病理学检查证实伴肝转移的5例胰腺导管腺癌患者的临床病理资料，通过免疫组化方法检测胰腺癌原发肿瘤和相应肝转移灶中NOP14的表达水平；利用慢病毒表达载体感染胰腺癌细胞株，构建NOP14稳定下调的细胞株，实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测NOP14抑制率；利用胰腺癌小鼠模型分析NOP14敲低组（n＝8）和对照组（n＝8）肿瘤组织中CD31标记的肿瘤微血管密度（MVD）及其与肿瘤大小和转移的关系。采用Mann Whitney U检验对组间数据进行统计学分析，应用Pearson或Spearman相关系数分析变量间的相关性。结果NOP14在胰腺癌肝转移灶中的表达水平较原发肿瘤明显升高（2.09±0.45比1.31±0.27，P＝0.028）；实时荧光定量PCR和免疫印迹法证实胰腺癌稳定转染细胞株中NOP14的表达水平分别下调了86%和78%；胰腺癌小鼠皮下和原位移植模型中NOP14敲低组MVD值（61.40±13.85和38.33±10.91）低于对照组（85.53±14.59和59.33±15.37）（P ＝0.041、P ＝0.037），且与肿瘤大小（r＝0.842，P〈0.01）和转移（r＝0.726，P＝0.008）呈正相关。结论NOP14在胰腺癌肝转移灶中表达上调，可能通过促进肿瘤微血管形成导致胰腺癌的生长和转移。