Num1和Pil1超表达菌株构建及互作关系探究

为了研究Num1和Pil1之间是否存在互作,构建了Pil1超表达菌株,并通过酵母四分体解离技术成功构建得到用于免疫共沉淀试验的超表达Pil1和Num1的菌株。通过免疫共沉淀试验对Num1与Pil1的互作关系进行初步研究,并对试验中遇到问题的可能原因进行了分析。这些结果为研究Pil1是否参与细胞膜上Num1簇的形成奠定了基础。

Cdh1和Num1过表达菌株的构建

[目的]研究Cdh1和Num1之间是否存在相互作用,构建用于Cdh1和Num1免疫共沉淀试验的过表达菌株。[方法]首先在酵母菌株YWL630中用GAL1和3HA对CDH1进行标记,构建GAL1-3HA-CDH1NUM1-GFP菌株,再利用酵母四分体解离的方法使菌株YWL63和YWL490分别与该菌株杂交并进行四分体解离,从而得到所需菌株。[结果]成功构建不同基因型和配型的重组酵母菌株,其中YT52成功过表达了约340kD的Num1,YT53成功过表达了340kD的Num1和75kD的Cdh1,YT57成功过表达了75kD的Cdh1。[结论]经过同源重组的方法成功标记CDH1并诱导蛋白过表达,通过酵母四分体解离的方法构建用于Cdh1和Num1互作试验的过表达菌株,为揭示APC/C是否介导Num1的降解及机制奠定基础。

汉语同形量词论析——以甲骨文、金文及民间契约文书为研究材料

N1+MUN+N2格式是量词就近取材创造原则最初的一种体现,至迟到殷周时代,伴随着量词的产生而出现。N2作为量词初级阶段的产物,具备量词的性质和功能,但因弊端甚多,最终只是昙花一现,留下为数不多的一些例证。依照其与所计量名词同形的特点,将N2确定为同形量词较为合适。

芽殖酵母Sik1蛋白在纺锤体定位中的功能

为了探究芽殖酵母蛋白Sik1在有丝分裂纺锤体定位中的功能,利用同源重组技术将SIK1的内源启动子替换成GAL1启动子,得到基因组位点过表达SIK1的菌株,同时使菌株表达GFP-Tub1,以便观察纺锤体;接着在12℃低温条件下培养细胞以促进双核细胞的产生,细胞经乙醇固定、DAPI染色后在荧光显微镜下观察细胞核分裂及纺锤体定位;最后检测SIK1过表达对细胞生存能力的影响.结果表明:过表达Sik1会干扰纺锤体定位,但对细胞核迁移没有明显影响.在16℃低温胁迫条件下,过表达Sik1降低了纺锤体定位突变体kar9Δ的生长活力却部分恢复了num1Δ细胞的生长,说明Sik1可能在Dynein通路中起作用.