雪白睡莲花酚类成分研究

采用大孔树脂、硅胶、ODS RP-18和Sephadex LH-20柱从雪白睡莲的干燥花蕾中分离得到7个酚类成分,通过理化性质和波谱学方法鉴定化合物的结构,分别为:isostrictiniin(1)、老鹤草素(2)、鞣花酸(3)、短叶苏木酚(4)、Annulatin 3'-O-β-D-xyloside(5)、短叶苏木酚酸甲酯(6),1,2,3,4,6-五没食子酰基葡萄糖(7)。这些化合物均为首次从该植物中分离得到,化合物1,2,5和6首次从该属植物中分得。

睡莲花总黄酮对CCl4致小鼠肝纤维化的保护作用

研究睡莲花总黄酮(NCTF)对四氯化碳(CCl4)诱导小鼠肝纤维化的保护作用。将72只雄性KM小鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组(0.1 mg/kg)和NCTF低中高剂量组(50、100、200 mg/kg),每组12只。除正常组外其余各组小鼠腹腔注射10%的CCl4橄榄油溶液(2次/周)。造模次日,除模型组和正常组灌胃等量生理盐水外,各给药组按剂量给予受试药物,连续8周。末次给药后,禁食16 h后眼眶取血,摘取肝脏脾脏。HE和Masson染色观察肝病理组织学变化;ELISA及生化法检测肝纤四项及AST等生化指标;RT-PCR法检测肝组织IKKα、IκBα和NF-κB p65 mRNA表达。结果显示,与模型组比较,NCTF中、高剂量组可显著降低小鼠血清AST、ALT和ALP含量以及肝纤维化指标LN、HA、PCIII、IV-C的表达(P<0.05),并能降低促炎因子IL-6和TNF-α水平(P<0.05);肝组织Hyp水平也得到明显降低(P<0.05)。病理组织学观察NCTF给药组的肝细胞损伤及胶原纤维沉积明显少于模型组(P<0.05)。此外,与模型组相比,NCTF能显著降低肝组织IKKα、IκBα和NF-κB p65 mRNA的表达(P<0.05)。以上结果说明NCTF具有抗肝纤维化作用,其机制可能与其减少细胞间质胶原沉积、降低促炎因子表达和调节NF-κB信号通路相关。

维吾尔药材睡莲花的生药鉴定

目的 :为用药准确和进一步开发利用植物资源 ,制订药材标准提供依据。方法 :应用性状、显微、薄层及其紫外鉴别方法。结果 :详细描述了该生药的性状及显微特征 ;薄层板上斑点明显 ;紫外吸收光谱在 2 71.2 0 nm处有明显吸收。结论

高效液相色谱联用质谱法对睡莲花中4种成分的鉴定和含量测定

目的建立睡莲花中4种成分(没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷、槲皮素)的高效液相色谱联用质谱(HPLC-UV-MS/MS)鉴定和含量测定方法。方法采用Agilent C_(18)反相色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分析,以流动相A为0.2%的冰乙酸水溶液,流动相B为甲醇进行梯度洗脱,检测波长为270 nm,柱温为30℃,流速为1 mL·min^(-1);质谱条件:电喷雾负离子扫描模式(ESI-)。结果通过睡莲花中4种成分的一级和二级质谱与对照品对比,鉴定药材中的目标化合物,4个化合物在浓度范围内线性关系良好(R^(2)≥0.9990),平均加样回收率为98.87%~103.25%。结论本法能准确、可靠的对睡莲花中4种化学成分进行鉴定和含量测定,可用于睡莲花的质量控制,为其药效物质基础研究提供科学依据。

维药睡莲花中的黄酮醇苷类成分分析

目的对维药睡莲花的黄酮醇苷类成分进行研究。方法采用硅胶、聚酰胺和Sephadex LH-20柱进行分离,利用理化性质和波谱学方法鉴定化合物的结构。结果分得六个黄酮醇苷类化合物,分别为黄芪苷(Ⅰ)、槲皮素3-O-甲基-3′-O-β-D-吡喃木糖苷(Ⅱ)、槲皮素3′-O-β-D-吡喃木糖苷(Ⅲ)、异槲皮苷(Ⅳ)、山萘酚3-O-β-D-芸香糖苷(Ⅴ)、芦丁(Ⅵ)。结论化合物Ⅰ、Ⅳ、Ⅵ为首次从该植物中分离得到,其中化合物Ⅳ为首次从该属植物中分离得到。

雪白睡莲花中烟花苷的提取工艺研究

对烟花苷的提取工艺进行了研究。以烟花苷含量为评价指标,考察乙醇浓度、料液比、提取时间、提取次数对烟花苷提取率的影响。在单因素试验基础之上,设计四因素三水平正交试验,确定提取睡莲花烟花苷的最佳工艺条件为:乙醇浓度70%,料液比1∶30(g/m L),提取时间0.5 h,提取次数3次。在此工艺条件下,睡莲花中烟花苷的平均含量为(3.213±0.029)mg/g。

睡莲花提取物对酪氨酸酶的抑制作用及其动力学研究

采用紫外分光光度计测定多巴醌,得到了睡莲花提取物对酪氨酸酶的抑制率;以L-酪氨酸为底物,采用酶动力学的方法研究了睡莲花提取物对酪氨酸酶单酚酶活性的抑制作用及抑制机制。结果表明,睡莲花提取物对酪氨酸酶具有明显抑制作用,其中30%乙醇洗脱部位抑制效果最好,其对酪氨酸酶单酚酶活性的抑制作用表现为可逆反竞争型抑制;50%乙醇洗脱部位对酪氨酸酶单酚酶活性的抑制作用表现为可逆性抑制,低浓度时为混合型,高浓度时为竞争型。

雪白睡莲花活性成分对奶牛乳腺炎主要致病菌抑菌和抗炎作用研究

为了研究雪白睡莲花多糖、黄酮对奶牛乳腺炎主要致病菌的抑菌和抗炎作用,采用超声提取法提取雪白睡莲花活性成分(多糖、黄酮),然后采用牛津杯法结合倍比稀释法测定其抑菌圈、最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC),研究其对奶牛乳腺炎主要致病菌(大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、链球菌)的抑制效果;同时,通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验,观察其抗炎作用。结果显示,超声波提取雪白睡莲花多糖、黄酮的提取率分别为51.78%和12.00%;体外抑菌试验可知,金黄色葡萄球菌对多糖高敏,抑菌圈直径为23.01 mm±0.43 mm;雪白睡莲花黄酮对3种致病菌均有抑制作用,且可达高敏或中敏,抑菌圈直径为(13.30±0.27)mm~(24.07±0.72)mm;抗炎试验表明,与空白对照组相比,雪白睡莲花多糖、黄酮均能极显著降低二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀(P<0.01),肿胀抑制率分别为83.11%和65.15%。结果表明,雪白睡莲花多糖和黄酮均具有较好的抑菌抗炎作用,研究结果可为雪白睡莲花活性成分的开发利用奠定一定的理论基础。

雪白睡莲花粗提物对奶牛乳房炎主要致病菌体外抑菌和抗炎作用

为探索雪白睡莲花粗提物的体外抑菌和抗炎效果,用雪白睡莲花水提物、醇提物进行了体外抑菌试验,通过牛津杯法和倍比稀释法进行抑菌圈、最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC)的测定,确定雪白睡莲花粗提物对奶牛乳房炎主要致病菌大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌及链球菌的抑菌活性,并采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法观察其抗炎作用。结果显示,雪白睡莲花水提物和醇提物对金黄色葡萄球菌抑菌效果最好,且水提物抑菌效果优于醇提物;醇提物对金黄色葡萄球菌抑菌效果优于对链球菌的,对链球菌抑菌效果优于对大肠埃希氏菌的。与空白对照组相比,雪白睡莲花水提物、醇提物能明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀(P<0.01),雪白睡莲花醇提物抑制率优于水提物抑制率。研究结果为雪白睡莲花用于治疗感染相关疾病提供理论依据。

睡莲花总黄酮对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的防治作用

探讨睡莲花总黄酮(NCTF)对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制。60只昆明种小鼠随机分为6组:正常组、模型组、联苯双酯组(150 mg/kg)和NCTF低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg),灌胃给药,连续7 d。末次给药1 h后,除正常组腹腔注射大豆油0.2 m L/10 g外,其余各组均腹腔注射0.12%的CCl4大豆油溶液0.2 m L/kg。禁食8 h后,摘眼球取血,分离血清,检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转胺酶(AST)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ);解剖取肝脏、脾脏,计算肝、脾指数,制备肝匀浆,检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO),留取肝左叶行病理组织学检查。与模型组比较,NCTF(100、200 mg/kg)能显著降低小鼠血清ALT、AST、TNF-α和IL-6水平以及小鼠的肝、脾指数(P<0.05);并可明显提高小鼠肝组织匀浆SOD、GSH-Px的活性(P<0.05),显著降低MDA和NO水平(P<0.05)。病理组织学检查结果显示不同剂量NCTF均可减轻小鼠的肝组织损伤程度。结果说明NCTF对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与抗氧化和抑制炎症因子的释放有关。

睡莲花烟花苷对半乳糖胺致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:研究睡莲花烟花苷对D-半乳糖胺(D-Gal)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:将60只昆明小鼠随机分为正常组,模型组,阳性对照联苯双酯组,烟花苷(25、50和100 mg/kg)给药组,共6组,每组10只。阳性对照联苯双酯组和烟花苷给药组按10 m L/kg每日灌胃给药1次,正常组和模型组每日灌胃等体积蒸馏水,连续灌胃7 d,末次给药1 h后,正常组小鼠腹腔注射生理盐水0.02 m L/g,其他各组腹腔注射D-Gal(800 mg/kg,按0.02 m L/g)造模。造模8 h后摘眼球取血,测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白细胞介素IL-1β(IL-1β)、白细胞介素(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(INF-γ)水平。颈椎脱臼处死小鼠,摘取肝脏、脾脏称取质量,计算脏器系数,取0.3 g肝组织制备匀浆,检测肝匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)及一氧化氮(NO)含量。并取肝左叶距边缘0.5 cm处小块组织,进行肝组织病理学检查。结果:与模型组比较,烟花苷在(50、100 mg/kg)剂量时,小鼠血清ALT和AST水平均显著降低(P均<0.01),血清中促炎因子IL-1、IL-6、TNF-α和INF-γ水平降低(P<0.05);肝脏、脾脏系数降低(P<0.05),肝匀浆中SOD和GSH活力均显著升高(P均<0.05),MDA和NO含量均显著降低(P均<0.05);肝病理检查结果显示与模型组比较,烟花苷各剂量组肝细胞损伤程度明显减轻,炎性细胞浸润显著减少,其中烟花苷50和100 mg/kg组较25 mg/kg组受损程度较轻、修复情况较好。结论:烟花苷对D-Gal致小鼠急性肝损伤具有保护作用,其作用与促进抗氧化酶、抑制促炎因子的表达有关。

睡莲花总黄酮超声提取工艺研究

目的以黄酮含量为评价指标,优选睡莲花超声提取最佳工艺。方法单因素实验考察乙醇浓度、料液比、超声提取时间、超声提取次数、超声功率对药材黄酮提取效果的影响,并通过正交实验确定最佳提取工艺。结果乙醇浓度、料液比、提取次数和提取时间对黄酮的提取率有显著影响。超声提取维药睡莲花中黄酮类化合物的最佳工艺条件为:乙醇浓度80%,料液比1∶16,超声提取5次,提取时间30 min。结论所优选的提取工艺稳定,重复性良好。

睡莲花isostrictiniin对CCl_4致小鼠急性肝损伤防护作用及其体外抗氧化活性研究

目的研究睡莲花isostrictiniin的体外抗氧化能力和对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤的防治作用。方法采用总抗氧化能力测定(FRAP法)、DPPH·清除实验和还原能力测定探讨睡莲花isostrictiniin的抗氧化活性。通过CCl4所致小鼠急性肝损伤模型评价isostrictiniin的肝保护作用,将60只健康昆明种小鼠随机分为6个组:空白组、模型组、联苯双酯组(150mg/kg体质量)、isostrictiniin低、中、高剂量组(25、50、100mg/kg体质量),连续灌胃7d。最后次给药l h后,除空白组腹腔注射花生油溶液(0.1mL/10g体质量),其它各组小鼠腹腔注射0.10%的CCl_4花生油溶液按(0.1mL/10g体质量)。结果睡莲花isostrictiniin具有较好的总抗氧化能力,浓度范围在10~50μg/mL其FRAP值大于同浓度下Vc的FRAP值;且该化合物具有较强还原能力,随着浓度的增大,吸光值也增大。Isostrictiniin对DPPH·清除能力的IC_(50)值为8.95μg/mL,接近于Vc(IC506.33μg/mL)的清除能力。与模型组比较,isostrictiniin中、高剂量组(50、100 mg/kg)血清ALT、AST水平及肝脾脏指数降低,差异有统计学意义(P<0.01);肝组织匀浆中MDA和NO的含量降低,SOD和GSH的活性升高,差异有统计学意义(P<0.01)。病理组织学检查结果可知isostrictiniin中、高(50、100mg/kg)剂量可以降低CCl4对小鼠肝脏组织的病理损伤。结论睡莲花isostrictiniin有较好的抗氧化活性,对CCl4所致小鼠急性化学性肝损伤具有良好的防治作用。

高速逆流色谱分离纯化雪白睡莲花中的酚类成分

[目的]采用高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化雪白睡莲花中的酚类成分。[方法]HSCCC分离过程分为两步,分别采用乙酸乙酯∶甲醇∶水(4∶1∶5)和乙酸乙酯∶正丁醇∶水(4∶1∶5)两个体系,固定相均采用上相,流动相均采用下相,流速为2.0 m L/min,主机转速设定为850 r/min,紫外检测波长为254 nm。高效液相色谱(HPLC)检测纯度。[结果]第一步从200 mg的睡莲花提取物中分离得到异槲皮苷(I,41.4 mg)、紫云英苷(II,40 mg)和一混合物85 mg;第二步从混合物中分离纯化得到isostrictiniin(III,50.1 mg)和烟花苷(IV,26.3 mg),上述4种物质的纯度分别为73.53%、92.42%、82.36%和85.65%。[结论]HSCCC可快速的分离纯化雪白睡莲花中的酚类成分。

睡莲酚对H2O2致LO2细胞损伤的保护作用

目的研究睡莲酚对H2O2致正常肝(LO2)细胞损伤的保护作用。方法将LO2细胞分为药物组(给予6.25、12.50、25.00、50.00、100.00μg/mL的睡莲酚)、空白组(给予完全培养液),置于37℃、5%CO2环境下分别培养24、48和72 h后,采用MTT法检测样品对LO2细胞的毒性。0.6 mmol/L H2O2处理LO2细胞4 h构建H2O2损伤LO2细胞模型。用含6.25、12.50、25.00μg/mL的睡莲酚的培养液干预损伤肝细胞,MTT法测定细胞活力,并检测天冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酸氨基转移酶(ALT)、丙二醛(MDA)、氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)的水平。结果睡莲酚在6.50~25.00μg/mL的浓度范围内给药24、48和72 h,对正常人体肝(LO2)细胞无毒性作用。与空白组比较,给药组细胞的存活率达到90%以上,差异无统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,给药组该范围内可抑制H2O2对LO2细胞的损伤,升高细胞活力,差异有统计学意义(P<0.05);H2O2致急性损伤肝细胞的ALT、AST、MDA和NO水平均降低,SOD活力升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论睡莲酚对氧化应激致肝细胞损伤有保护作用。

烟花苷对H2O2致LO2细胞损伤的保护作用

目的探讨雪白睡莲有效成分烟花苷对H2O2致损伤LO2细胞的保护作用。方法取对数生长期的细胞,分为正常组和烟花苷干预组,对于不同质量浓度的烟花苷培养液,采用H2O2(0.6 mmol/L)体外诱导LO2细胞损伤肝细胞,采用四氮唑(MTT)比色法测定并计算细胞活力。检测细胞上清液中谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)含量,评价烟花苷对肝细胞损伤的保护作用。结果给药24,48,72 h后,烟花苷质量浓度在6.25~100μg/m L范围内对正常人肝细胞LO2无毒性作用,且细胞的存活率大于90%;0.6 mmol/L H2O2可改变LO2细胞的形态结构,并抑制其活性;可提高细胞AST和ALT水平,以及MDA和NO含量,降低SOD活性;睡莲花烟花苷可拮抗H2O2对LO2细胞的损伤,并显著降低H2O2致急性损伤肝细胞的ALT和AST的释放量及MDA和NO的含量(P<0.05),提高SOD活力(P<0.05)。结论雪白睡莲烟花苷对H2O2致LO2细胞损伤有保护作用。

睡莲花总酚酸超声提取工艺研究

目的以药材中总酚酸含量为评价指标,优选维药睡莲花超声提取最佳工艺。方法单因素实验考察乙醇浓度、料液比、超声提取时间、超声次数,超声功率对药材中总酚酸含量的影响,并通过正交实验确定最佳提取条件。结果乙醇浓度、料液比、超声提取时间对总酚酸的提取率有显著影响。结论超声提取维药睡莲花中酚酸类化合物的最佳提取工艺条件为:乙醇浓度70%,料液比1∶20,超声功率30W,提取时间40 min。

HPLC 法测定睡莲花中烟花苷和紫云英苷的含量

目的：建立睡莲花中烟花苷和紫云英苷的含量测定方法，为该药材质量标准制定提供依据。方法：采用HPLC 法测定，色谱柱：Phenomenex GeminiC18（250mm ×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈－0.2％磷酸水溶液梯度洗脱；流速：1.0mL／min；柱温：30℃；检测波长：350nm。结果：烟花苷和紫云英苷的线性范围分别为2.56～76.80μg （r2＝9999）、2.0～60.0μg （r2＝9999）；平均回收率（n ＝6）分别为100.06％、99.07％。结论：该方法操作简单、重复性好，可用于控制维吾尔药睡莲花的质量。

3种新疆产药材的降血糖作用研究

研究香茅草、芡实、睡莲花3种新疆产药材的降糖作用。通过测量3种药物提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性抑制率,进而探究其体外降糖作用;同时,研究3种药物提取物对腹腔注射葡萄糖所致小鼠快速高血糖模型的影响。3种药物提取物都具有一定的体外降糖能力,且睡莲花提取物和芡实提取物对这2种酶活性的抑制作用具有一定的选择性,每毫升2 g生药的香茅草提取物和芡实提取物对α-淀粉酶的抑制率分别为88.3%和79.8%,每毫升1 g生药的睡莲花提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制率为76.0%;睡莲花提取物可以预防正常小鼠的血糖升高,并且与另外2种药物相比,能显著降低正常小鼠的血糖曲线下面积。3种新疆产药材均表现出一定的体外降糖作用,且睡莲花提取物可以预防正常小鼠血糖升高,有一定的调节血糖作用。

睡莲多酚提取工艺优化及其抗油脂氧化作用

探究睡莲多酚超声提取的最佳工艺条件,并在进一步纯化基础上,采用烘箱法评价其抗油脂氧化性能。以睡莲多酚提取率为指标,通过考察乙醇体积分数、料液比、超声温度、超声时间对提取的影响,结合正交设计实验优化得出最佳提取工艺:乙醇体积分数50%,料液比1∶50 g/mL,超声温度60℃,超声时间40 min,超声功率90 W,在此条件下睡莲多酚提取率达14.0%。通过大孔树脂聚酰胺联用方法获得了纯化后的睡莲多酚,其多酚质量分数为(79.29±0.75)%。抗油脂氧化实验结果表明:睡莲多酚对葵花籽油、菜籽油和猪油的过氧化均有良好的抑制作用,且其抗氧化性与其添加剂量呈正相关。此外,睡莲多酚分别与VC、和TBHQ复配后对猪油的过氧化均具有一定的协同增效作用,其中VC+睡莲多酚复配组的活性最强。本实验优选的工艺提取效率高,且发现睡莲多酚具有较好的抗油脂氧化能力,可延长食用油脂的货架期,说明该有效部位是一种值得开发的天然抗氧化剂。