新疆雪白睡莲资源调查与生物学特性研究

通过查阅文献、走访调查、实地踏勘、抽样调查等方法对新疆特有植物雪白睡莲(Nymphaea candida Presl)适生区、资源状况及生物学特性进行了研究,基本弄清楚了雪白睡莲在伊犁、阿尔泰、巴州3个地区居群的资源状况、生境与生物学特性。为雪白睡莲种质资源的保护与合理开发利用提供了依据。

高效液相色谱联用质谱法对睡莲花中4种成分的鉴定和含量测定

目的建立睡莲花中4种成分(没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷、槲皮素)的高效液相色谱联用质谱(HPLC-UV-MS/MS)鉴定和含量测定方法。方法采用Agilent C_(18)反相色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分析,以流动相A为0.2%的冰乙酸水溶液,流动相B为甲醇进行梯度洗脱,检测波长为270 nm,柱温为30℃,流速为1 mL·min^(-1);质谱条件:电喷雾负离子扫描模式(ESI-)。结果通过睡莲花中4种成分的一级和二级质谱与对照品对比,鉴定药材中的目标化合物,4个化合物在浓度范围内线性关系良好(R^(2)≥0.9990),平均加样回收率为98.87%~103.25%。结论本法能准确、可靠的对睡莲花中4种化学成分进行鉴定和含量测定,可用于睡莲花的质量控制,为其药效物质基础研究提供科学依据。

雪白睡莲花酚类成分研究

采用大孔树脂、硅胶、ODS RP-18和Sephadex LH-20柱从雪白睡莲的干燥花蕾中分离得到7个酚类成分,通过理化性质和波谱学方法鉴定化合物的结构,分别为:isostrictiniin(1)、老鹤草素(2)、鞣花酸(3)、短叶苏木酚(4)、Annulatin 3'-O-β-D-xyloside(5)、短叶苏木酚酸甲酯(6),1,2,3,4,6-五没食子酰基葡萄糖(7)。这些化合物均为首次从该植物中分离得到,化合物1,2,5和6首次从该属植物中分得。

维药睡莲花中的黄酮醇苷类成分分析

目的对维药睡莲花的黄酮醇苷类成分进行研究。方法采用硅胶、聚酰胺和Sephadex LH-20柱进行分离,利用理化性质和波谱学方法鉴定化合物的结构。结果分得六个黄酮醇苷类化合物,分别为黄芪苷(Ⅰ)、槲皮素3-O-甲基-3′-O-β-D-吡喃木糖苷(Ⅱ)、槲皮素3′-O-β-D-吡喃木糖苷(Ⅲ)、异槲皮苷(Ⅳ)、山萘酚3-O-β-D-芸香糖苷(Ⅴ)、芦丁(Ⅵ)。结论化合物Ⅰ、Ⅳ、Ⅵ为首次从该植物中分离得到,其中化合物Ⅳ为首次从该属植物中分离得到。

雪白睡莲花中烟花苷的提取工艺研究

对烟花苷的提取工艺进行了研究。以烟花苷含量为评价指标,考察乙醇浓度、料液比、提取时间、提取次数对烟花苷提取率的影响。在单因素试验基础之上,设计四因素三水平正交试验,确定提取睡莲花烟花苷的最佳工艺条件为:乙醇浓度70%,料液比1∶30(g/m L),提取时间0.5 h,提取次数3次。在此工艺条件下,睡莲花中烟花苷的平均含量为(3.213±0.029)mg/g。

睡莲花提取物对酪氨酸酶的抑制作用及其动力学研究

采用紫外分光光度计测定多巴醌,得到了睡莲花提取物对酪氨酸酶的抑制率;以L-酪氨酸为底物,采用酶动力学的方法研究了睡莲花提取物对酪氨酸酶单酚酶活性的抑制作用及抑制机制。结果表明,睡莲花提取物对酪氨酸酶具有明显抑制作用,其中30%乙醇洗脱部位抑制效果最好,其对酪氨酸酶单酚酶活性的抑制作用表现为可逆反竞争型抑制;50%乙醇洗脱部位对酪氨酸酶单酚酶活性的抑制作用表现为可逆性抑制,低浓度时为混合型,高浓度时为竞争型。

睡莲花总黄酮对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的防治作用

探讨睡莲花总黄酮(NCTF)对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制。60只昆明种小鼠随机分为6组:正常组、模型组、联苯双酯组(150 mg/kg)和NCTF低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg),灌胃给药,连续7 d。末次给药1 h后,除正常组腹腔注射大豆油0.2 m L/10 g外,其余各组均腹腔注射0.12%的CCl4大豆油溶液0.2 m L/kg。禁食8 h后,摘眼球取血,分离血清,检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转胺酶(AST)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ);解剖取肝脏、脾脏,计算肝、脾指数,制备肝匀浆,检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO),留取肝左叶行病理组织学检查。与模型组比较,NCTF(100、200 mg/kg)能显著降低小鼠血清ALT、AST、TNF-α和IL-6水平以及小鼠的肝、脾指数(P<0.05);并可明显提高小鼠肝组织匀浆SOD、GSH-Px的活性(P<0.05),显著降低MDA和NO水平(P<0.05)。病理组织学检查结果显示不同剂量NCTF均可减轻小鼠的肝组织损伤程度。结果说明NCTF对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与抗氧化和抑制炎症因子的释放有关。

睡莲花烟花苷对半乳糖胺致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:研究睡莲花烟花苷对D-半乳糖胺(D-Gal)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:将60只昆明小鼠随机分为正常组,模型组,阳性对照联苯双酯组,烟花苷(25、50和100 mg/kg)给药组,共6组,每组10只。阳性对照联苯双酯组和烟花苷给药组按10 m L/kg每日灌胃给药1次,正常组和模型组每日灌胃等体积蒸馏水,连续灌胃7 d,末次给药1 h后,正常组小鼠腹腔注射生理盐水0.02 m L/g,其他各组腹腔注射D-Gal(800 mg/kg,按0.02 m L/g)造模。造模8 h后摘眼球取血,测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白细胞介素IL-1β(IL-1β)、白细胞介素(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(INF-γ)水平。颈椎脱臼处死小鼠,摘取肝脏、脾脏称取质量,计算脏器系数,取0.3 g肝组织制备匀浆,检测肝匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)及一氧化氮(NO)含量。并取肝左叶距边缘0.5 cm处小块组织,进行肝组织病理学检查。结果:与模型组比较,烟花苷在(50、100 mg/kg)剂量时,小鼠血清ALT和AST水平均显著降低(P均<0.01),血清中促炎因子IL-1、IL-6、TNF-α和INF-γ水平降低(P<0.05);肝脏、脾脏系数降低(P<0.05),肝匀浆中SOD和GSH活力均显著升高(P均<0.05),MDA和NO含量均显著降低(P均<0.05);肝病理检查结果显示与模型组比较,烟花苷各剂量组肝细胞损伤程度明显减轻,炎性细胞浸润显著减少,其中烟花苷50和100 mg/kg组较25 mg/kg组受损程度较轻、修复情况较好。结论:烟花苷对D-Gal致小鼠急性肝损伤具有保护作用,其作用与促进抗氧化酶、抑制促炎因子的表达有关。

睡莲花总黄酮超声提取工艺研究

目的以黄酮含量为评价指标,优选睡莲花超声提取最佳工艺。方法单因素实验考察乙醇浓度、料液比、超声提取时间、超声提取次数、超声功率对药材黄酮提取效果的影响,并通过正交实验确定最佳提取工艺。结果乙醇浓度、料液比、提取次数和提取时间对黄酮的提取率有显著影响。超声提取维药睡莲花中黄酮类化合物的最佳工艺条件为:乙醇浓度80%,料液比1∶16,超声提取5次,提取时间30 min。结论所优选的提取工艺稳定,重复性良好。

睡莲花isostrictiniin对CCl_4致小鼠急性肝损伤防护作用及其体外抗氧化活性研究

目的研究睡莲花isostrictiniin的体外抗氧化能力和对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤的防治作用。方法采用总抗氧化能力测定(FRAP法)、DPPH·清除实验和还原能力测定探讨睡莲花isostrictiniin的抗氧化活性。通过CCl4所致小鼠急性肝损伤模型评价isostrictiniin的肝保护作用,将60只健康昆明种小鼠随机分为6个组:空白组、模型组、联苯双酯组(150mg/kg体质量)、isostrictiniin低、中、高剂量组(25、50、100mg/kg体质量),连续灌胃7d。最后次给药l h后,除空白组腹腔注射花生油溶液(0.1mL/10g体质量),其它各组小鼠腹腔注射0.10%的CCl_4花生油溶液按(0.1mL/10g体质量)。结果睡莲花isostrictiniin具有较好的总抗氧化能力,浓度范围在10~50μg/mL其FRAP值大于同浓度下Vc的FRAP值;且该化合物具有较强还原能力,随着浓度的增大,吸光值也增大。Isostrictiniin对DPPH·清除能力的IC_(50)值为8.95μg/mL,接近于Vc(IC506.33μg/mL)的清除能力。与模型组比较,isostrictiniin中、高剂量组(50、100 mg/kg)血清ALT、AST水平及肝脾脏指数降低,差异有统计学意义(P<0.01);肝组织匀浆中MDA和NO的含量降低,SOD和GSH的活性升高,差异有统计学意义(P<0.01)。病理组织学检查结果可知isostrictiniin中、高(50、100mg/kg)剂量可以降低CCl4对小鼠肝脏组织的病理损伤。结论睡莲花isostrictiniin有较好的抗氧化活性,对CCl4所致小鼠急性化学性肝损伤具有良好的防治作用。

睡莲酚对H2O2致LO2细胞损伤的保护作用

目的研究睡莲酚对H2O2致正常肝(LO2)细胞损伤的保护作用。方法将LO2细胞分为药物组(给予6.25、12.50、25.00、50.00、100.00μg/mL的睡莲酚)、空白组(给予完全培养液),置于37℃、5%CO2环境下分别培养24、48和72 h后,采用MTT法检测样品对LO2细胞的毒性。0.6 mmol/L H2O2处理LO2细胞4 h构建H2O2损伤LO2细胞模型。用含6.25、12.50、25.00μg/mL的睡莲酚的培养液干预损伤肝细胞,MTT法测定细胞活力,并检测天冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酸氨基转移酶(ALT)、丙二醛(MDA)、氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)的水平。结果睡莲酚在6.50~25.00μg/mL的浓度范围内给药24、48和72 h,对正常人体肝(LO2)细胞无毒性作用。与空白组比较,给药组细胞的存活率达到90%以上,差异无统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,给药组该范围内可抑制H2O2对LO2细胞的损伤,升高细胞活力,差异有统计学意义(P<0.05);H2O2致急性损伤肝细胞的ALT、AST、MDA和NO水平均降低,SOD活力升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论睡莲酚对氧化应激致肝细胞损伤有保护作用。

睡莲花总酚酸超声提取工艺研究

目的以药材中总酚酸含量为评价指标,优选维药睡莲花超声提取最佳工艺。方法单因素实验考察乙醇浓度、料液比、超声提取时间、超声次数,超声功率对药材中总酚酸含量的影响,并通过正交实验确定最佳提取条件。结果乙醇浓度、料液比、超声提取时间对总酚酸的提取率有显著影响。结论超声提取维药睡莲花中酚酸类化合物的最佳提取工艺条件为:乙醇浓度70%,料液比1∶20,超声功率30W,提取时间40 min。

3种新疆产药材的降血糖作用研究

研究香茅草、芡实、睡莲花3种新疆产药材的降糖作用。通过测量3种药物提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性抑制率,进而探究其体外降糖作用;同时,研究3种药物提取物对腹腔注射葡萄糖所致小鼠快速高血糖模型的影响。3种药物提取物都具有一定的体外降糖能力,且睡莲花提取物和芡实提取物对这2种酶活性的抑制作用具有一定的选择性,每毫升2 g生药的香茅草提取物和芡实提取物对α-淀粉酶的抑制率分别为88.3%和79.8%,每毫升1 g生药的睡莲花提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制率为76.0%;睡莲花提取物可以预防正常小鼠的血糖升高,并且与另外2种药物相比,能显著降低正常小鼠的血糖曲线下面积。3种新疆产药材均表现出一定的体外降糖作用,且睡莲花提取物可以预防正常小鼠血糖升高,有一定的调节血糖作用。

维药睡莲花生药学检测及其没食子酸含量测定

为提升维药睡莲花的质量控制标准,补充了睡莲花花苞切片的显微鉴别,新建了睡莲花的TLC鉴别,优化了睡莲花中没食子酸含量的HPLC检测方法。结果表明,睡莲花花苞切片显微形态特征明显,睡莲花药材粉末特征细胞显微形态清楚;TLC图谱斑点清晰,Rf值与对照品一致;没食子酸浓度在1.5625~100μg·mL^-1之间与峰面积呈良好的线性关系(R^2=1),精密度实验RSD为0.4072%,平均加标回收率为98.53%(RSD=1.98%,n=6)。

维药睡莲花没食子酸的含量测定

目的：建立维药睡莲花药材中没食子酸的含量测定方法,为其质量控制提供科学依据。方法：采用HPLC法测定,色谱条件：Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）,流动相为甲醇：0.05ml/l磷酸二元梯度洗脱,流速：1.0ml/min,柱温：30℃,检测波长为273nm。结果：没食子酸在0.00196~0.0784mg/ml的范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9999）,加样回收率为98.12%,RSD为1.79%（n=6）;样品溶液在32h内稳定。结论：该方法操作简便、重复性好,可用于规范和控制维药睡莲花药材的质量。

睡莲花总黄酮对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的防治作用

目的研究睡莲花总黄酮(NCTF)对四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化的防治作用。方法 Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、NCTF低、中、高剂量(50、100、200 mg/kg)组和秋水仙碱(0.2 mg/kg)组。除对照组大鼠sc花生油外,其余各组分别于大鼠背部sc 50%CCl4花生油溶液(0.1 mL/100 g),2次/周,连续12周。除对照组和模型组ig 0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液外,其余各组于造模第2天按设定剂量ig药物(1.0 mL/100 g),1次/d,连续12周。实验结束后,收集大鼠血样、肝脏及脾脏组织,测定大鼠肝脾指数;通过HE染色和Masson染色观察肝组织病理变化;通过免疫组化法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;通过全自动生化仪检测大鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)水平;通过生化法检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和一氧化氮(NO)水平;通过放射免疫分析法检测血清透明质酸(HA)水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清层连蛋白(LN)、III型前胶原(PCIII)、IV型胶原(CIV)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)水平;采用碱水解法处理肝组织后测定其羟脯氨酸(Hyp)水平。结果与对照组相比,模型组大鼠精神萎靡、肝脾指数增大,肝组织炎性细胞浸润并呈现出明显的纤维化,血清ALT、AST、ALP、HA、LN、PCⅢ、CIV、MDA和NO水平显著升高(P<0.05、0.01),血清TP、ALB、GSH和SOD水平显著下降(P<0.01);肝组织α-SMA和Hyp表达明显上调(P<0.01)。与模型组比较,NCTF组能明显改善大鼠状态和肝脾指数(P<0.05、0.01),改善大鼠肝组织病理学损伤和纤维化;显著降低大鼠血清ALT、AST、ALP、MDA、NO水平及大鼠肝组织α-SMA、Hyp的表达(P<0.05、0.01),显著提高血清TP、ALB、GSH、SOD水平(P<0.05、0.01);并能显著抑制HA、LN、PCⅢ、CIV型蛋白表达及TNF-α、IL-1β、IL-6的水平(P<0.05、0.01)。结论 NCTF具有较好的抗肝纤维化作用,其作用机制与抗氧化、调节胶原合成、抑制促炎因子表达相关。