肠道沙门菌O:4(B)菌群脉冲场凝胶电泳分子分型

为了明确2010年食源性疾病监测中分离的肠道沙门菌O:4(B)菌群的PFGE分子型别,探讨其多态性及其与分子流行病学关系,我们将分离获得的29株O:4(B)血清型沙门菌进一步鉴定培养,挑取单个菌落增菌,供试菌株基因组DNA用限制性内切酶XbaⅠ消化酶切后进行脉冲场凝胶电泳分型,所得结果用Bionumerics5.1软件进行聚类分析。实验结果表明,根据电泳指纹图谱,可将29株肠道沙门菌O:4(B)菌群分为24个PFGE型别,菌株间的相似值在56.31%～100%之间,同一血清型别的沙门菌有多个PFGE型别。脉冲场凝胶电泳对O:4(B)群沙门菌有较高的分型能力,可有效的应用于食物中沙门菌溯源分析及分子流行病学研究。

同时感染雏鸡群的两种血清型沙门菌的鉴定及药敏试验

沙门菌是肠杆菌科中的一个大属，目前已有2500种以上血清型，它们广泛存在于人和各种动物的肠道内。在自然界中，家禽是其最主要的贮存宿主。禽沙门菌病是由沙门菌属中的某一种或多种沙门氏菌引起的禽类急性或慢性疾病的总称，由鸡白痢和鸡伤寒沙门菌引起的疾病分别称为鸡白痢和鸡伤寒，而由有鞭毛能运动的沙门菌引起的疾病则称为禽副伤寒。本试验系应用细菌学和PCR检测技术，对安徽省濉溪县一起可疑雏鸡沙门菌病进行细菌分离鉴定，从而确定病型类别，并对分离菌株实施血清学分型和药物感受性分析。

沙门菌常见O抗原和H抗原荧光PCR检测方法评估

目的:评估沙门菌常见A^F血清群O抗原和H抗原荧光PCR检测方法对不同血清型沙门菌的检测效果。方法:选用不同血清型沙门菌制备模板,运用沙门菌O抗原A^F群及不同H抗原荧光PCR检测试剂盒对这些菌株进行扩增检测,分别计算不同血清型检测结果的灵敏度、特异度、检测下限、假阳性率、假阴性率、Kappa值等指标并进行分析。结果:对7种不同沙门菌O抗原的检测灵敏度为85.71%~100.00%,特异度为66.67%~100.00%;对7种不同沙门菌H抗原的检测,H1,5及Hi-l的灵敏度不高,分别为35.71%及57.14%,但特异度均较高(87.50%~100.00%);经Fisher精确检验,除H1,5阳性检测的P>0.05(P=0.162),其余为P<0.05;C1、C2、D1、E、F血清群及H抗原1,6、1,7、g,s,t、g,m的检测结果与血清凝集结果的一致性较高(Kappa值均大于0.75),而H1,5及Hi-l的检测结果与血清凝集结果的一致性很差(Kappa值分别为0.302及0.492);试剂盒对不同O/H抗原核酸检测扩增效率较好,最低检出限为7~137608拷贝/反应。结论:除H1,5抗原外,该荧光PCR检测试剂盒对沙门菌O/H抗原不同血清型的检测效果较好,优于传统血清凝集方法,可显著提高血清型鉴定时效,有利于疾病或暴发的早期发现。

沙门氏菌的检验

福州动检局陈宝钦等近年来对从秘鲁等8个国家和地区进口的鱼粉等动物产品中抽样检查,沙门氏菌检出率达4.9％,所检出的53株沙门氏菌分属于B、C1、C2、E1、E4、G、K、N和O等9个血清群20个血清型,其中A—F血清群的占58.49％,以哈瓦那和塞罗型沙门氏菌最多。一些动检局还从进口产品中在国内首次分离到沙门氏菌新血清型,如法尔肯泽型。

B族链球菌感染孕妇CCL-1、ASO、hs-CRP、PCT表达意义

目的分析B族链球菌感染孕妇趋化细胞因子配体1(CCL-1)、抗链球菌溶血素O(ASO)、高敏C-反应蛋白(hs-CRP)、降钙素原(PCT)表达意义。方法选取2021年1月-2023年1月聊城市第二人民医院收治的89例B族链球菌感染孕妇为研究组,随机选取同期正常孕妇(无B族链球菌感染)96名为对照组。分析B族链球菌感染孕妇药敏结果,研究组、对照组阴道菌群、妊娠结局,研究组不同妊娠结局血清CCL-1、ASO、hs-CRP、PCT水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析其对研究组妊娠不良结局的预测价值。结果B族链球菌对氨苄西林、青霉素、头孢克洛、头孢曲松、利奈唑胺、头孢噻肟、万古霉素敏感。与对照组比较,研究组阴道酸碱度(pH)值>4.5、阴道清洁度Ⅲ~Ⅳ占比更高(P<0.05)。相比于对照组,研究组羊水污染、胎膜早破、早产、胎儿窘迫、新生儿感染等妊娠不良结局发生率更高(P<0.05)。妊娠不良结局组血清CCL-1、ASO、hs-CRP、PCT水平高于妊娠结局良好组(P<0.05)。分析血清CCL-1、ASO、hs-CRP、PCT对研究组妊娠不良结局的预测价值,曲线下面积(AUC)、敏感性、特异性均较高,联合检测为最高(P<0.05)。结论B族链球菌感染可影响妊娠期孕妇阴道菌群、妊娠结局,其对不同抗菌药物的耐药性不同,不良妊娠结局的发生提高血清CCL-1、ASO、hs-CRP、PCT水平,联合检测对其预测价值较高。

部分地区种鸡群沙门菌流行情况以及净化技术探讨

种鸡场沙门菌病是一种严重危害我国种禽业健康发展和家禽产品公共卫生安全的人畜共患病。包括以垂直传播为主的鸡白痢和人畜共患的肠炎沙门菌等其他血清型沙门菌病。肠炎沙门菌等人畜共患沙门菌,是引起食源性疾病最重要的病原体,主要感染食品动物如猪、鸡等,然后通过食物链传递给人类。全球每年有超过1亿人感染沙门菌,大约15.5万人死亡。目前,不断有沙门菌危害人畜安全的报道。

痢疾志贺氏菌亚群的比较基因组学研究与进化分析

利用大肠杆菌K12MG1655株全基因组ORFs和痢疾志贺氏菌A1型Sd51197株特异性ORFs探针制备的芯片,研究了痢疾志贺氏菌13个血清型代表株的基因组组成.结果显示,该血清群成员的基因组中包含有2654个保守的源于大肠杆菌ORFs;共同缺失了219个涉及前噬菌体基因、分子伴侣、特异性O抗原合成等大肠杆菌原有的基因;并通过水平转移获得了一些特异性基因,如Ⅱ型分泌系统相关组分、铁转运相关因子等.根据基因组组成所作的进化树,发现A1,A2,A8和A10这四型菌与其他痢疾志贺氏菌亲源关系较远.研究所得结果为进一步深入探索痢疾志贺氏菌的生理过程、致病性和进化奠定了基础.

奶牛乳房炎致病大肠埃希菌的分型及外膜蛋白酶OmpT的抗原性验证

目的对奶牛乳房炎致病大肠埃希菌(E.coli)进行分型及外膜蛋白酶T(outer membrane protease,OmpT)的抗原性验证。方法采用凝集试验测定黑龙江省分离的84株致病E.coli的O血清型,PCR扩增种系分类群标记基因法对84株E.coli进行分型;经BLAST比对筛选ompT基因后,PCR验证ompT基因的普遍性;克隆A、B1、D群代表株ompT基因,测序后进行同源性比对;构建B1群E.coli 2002-1株ompT基因重组表达质粒pET-32a-ompT,转化E.coliRosetta,IPTG诱导表达;表达的重组蛋白经亲和层析纯化后,Western blot法鉴定重组蛋白的抗原性。结果 84株奶牛乳房炎致病E.coli中共鉴定出血清型51株,覆盖42个O血清型,归属A种系进化群10株,占11.90%;B1种系进化群74株,占88.10%;无肠外强致病的B2和D群。各型E.coli均可扩增出ompT基因。4亚群代表株ompT基因具有高度保守性,同源性达97%以上。重组表达质粒pET-32a-ompT经PCR及双酶切鉴定,证明构建正确。表达的重组蛋白相对分子质量约55 000,诱导4 h,目的蛋白的表达量最高,约占菌体总蛋白的29.8%。纯化的重组OmpT蛋白纯度为87.6%,与4亚群E.coli免疫血清均可发生特异性反应。结论种系进化是对奶牛乳房炎致病E.coli分型的理想方法,外膜蛋白酶OmpT在E.coli各种系进化群中抗原性良好,可作为研制E.coli蛋白亚单位疫苗的候选抗原。

1例食用羊蹄发生腹泻的报道

目的:探讨食源性疾病(食物中毒)的诊断、治疗方法及流行病学调查的研究分析,对突发食品卫生事件处理的快速反应能力,制订有效方法减少食源性疾病的发生。方法:采用流行病学等方法分析18名均有共同进食同一商贩的熟食羊蹄的患者资料。结果:从2份患者吃剩的羊蹄中检出沙门菌属B群鼠伤寒沙门菌,该菌株生化特性和血清学检测完全一致。结论:根据流行病学调查结果和实验室检验结果及我所食品卫生监督员集体讨论,认定18人食用羊蹄后发生的疾病是食源性疾病(食品中毒)。

以霍乱毒素B亚单位为载体的甲型副伤寒多糖结合疫苗理化及生物学特性

目的制备甲型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi A,SPA)O特异多糖(O-specific polysaccharide,OSP)-霍乱毒素B亚单位(cholera toxin B subunit,CTB)结合疫苗,并初步探讨其理化及生物学特性。方法 SPA OSP多糖原液(简称OSP多糖)经溴化氰活化,己二酰肼(ADH)衍化,在碳二亚胺(EDAC)作用下与CTB偶联,结合物经Sepharose4FF柱纯化,获得多糖-蛋白结合物,对其理化指标、血清特异性、免疫原性及血清体外杀菌力进行检测。结果制备的SPA OSP-CTB结合物(简称OSP-CTB结合物)衍化度为(2. 63±0. 13)%、多糖回收率为(74±0. 2)%;鉴别试验显示OSP-CTB结合物与SPA O诊断血清、CTB抗体均有阳性沉淀线产生;免疫小鼠血清中OSP-CTB结合物抗体滴度显著增长,阳转率达100%,血清体外杀菌抗体滴度为1∶64。结论用溴化氰活化多糖制备的SPA OSP-CTB结合物具有良好免疫原性,可进一步进行疫苗研发。