基于Fe(Ⅲ)和邻苯二胺显色反应快速检测硫化物

比较了不同金属离子(Fe^(2+)、Fe^(3+)、Cu^(2+)、Zn^(2+)、Al^(3+)、Na^(+)、Ca^(2+)、Mg^(2+)、K^(+)、Ag^(+)、Cr^(3+))对邻苯二胺(OPD)的氧化能力,基于Fe^(3+)能直接氧化OPD产生黄色发荧光的产物而构建了Fe^(3+)-OPD显色体系。结合硫化物的还原性以及对金属离子较强的亲和性,开发了一种通过比色法选择性检测硫化物的方法。结果表明,在pH 4.0NaAc-HAc缓冲液中,Fe^(3+)-OPD显色体系的吸光度和荧光强度与NaHS的浓度分别在10~200μmol/L和5~150μmol/L范围内呈线性关系,荧光法的检出限可达0.1μmol/L,体系内其他还原性物质及硫醇对NaHS的检测无干扰。将Fe^(3+)-OPD显色体系结合纸芯片构建的纸基比色体系蓝色分析色道值(B值)与NaHS的浓度在20~150μmol/L范围内呈线性关系,检出限为2μmol/L,并可用于定量检测加标自来水和胎牛血清中的硫化物。

双底物酶促反应的热动力学研究

利用微量热方法研究了辣根过氧化物酶(HRP)催化H_2O_2氧化邻苯二胺(OPD)的反应。在298.15K,50mM,pH=7.4的磷酸盐缓冲体系中反应消耗1mol H_2O_2的焓变为227.99kJmol^(-1),而消耗1mol OPD的焓变为439.21kJmol^(-1),HRP对底物H_2O_2的米氏常数K_m(H_2O_2)=2.92mM,对底物OPD的米氏常数K_m(OPD)=0.51mM。

SDS水相胶束体系中酶促反应的热动力学研究

在298.15K十二烷基硫酸钠(SDS)的水相胶束体系中,利用微量热方法研究了辣根过氧化物酶(HRP)催化H2O2氧化邻苯二胺(OPD)的反应.SDS作为一种蛋白质变性剂,不仅能够使HRP变性失去部分活性,而且还能使HRP对底物OPD的米氏常数Km(OPD)和最大反应速率都比其在缓冲体系中小;而在SDS溶胶中,OPD相对过量时,HRP对底物H2O2不符合米氏机理.