O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶与肿瘤预见性化疗新策略

克服肿瘤细胞的耐药性是化疗需要解决的重大课题.本项目通过分析20株中国人肿瘤细胞中O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(简写MGMT)的活性与对烷化剂亚硝脲耐药性的关系的实验;通过使用亚硝脲药物治疗移植高和低MGMT肿瘤细胞的荷瘤裸鼠实验;通过向对烷化剂亚硝脲敏感、耐药的细胞分别转导MGMT cDNA以及MGMT反义RNA的实验;证明肿瘤细胞中的MGMT水平决定了细胞对烷化剂、亚硝脲类药物的耐药性,MGMT高的肿瘤细胞耐药,MGMT低的细胞敏感.通过细胞和裸鼠实验证明链脲菌素(Streptozotocin,简写STZ)或O6-苄基鸟嘌呤(简写O6-BG)可以降低细胞内的MGMT活性,克服细胞对烷化剂亚硝脲的耐药性.在研究工作的基础上,我们提出了肿瘤预见性个体化化疗的新策略,即对MGMT低的肿瘤直接使用烷化剂亚硝脲化疗,对MGMT高的肿瘤首先使用链脲菌素降低MGMT酶活性,然后使用烷化剂亚硝脲化疗.

扶正增效方放射增敏与肿瘤细胞内O^6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶的关系

目的探讨扶正增效方放射增敏与肿瘤细胞内 O^6-甲基鸟嘌呤 DNA 甲基转移酶(O^6-MT)关系。方法建立裸鼠人肺腺癌 PAa 模型,分为6组,从接种日始,Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ组裸鼠每天灌服0.6g 扶正增效方水煎剂,Ⅰ、Ⅲ组灌服等量无菌生理盐水,35天Ⅴ、Ⅵ组腹腔注射2mg STZ,36天予Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组瘤体10Gy X 线照射,测瘤体直径、O^6-MT 含量、MGMT 染色及细胞病理学镜检。结果 6组中O^6-MT 含量工组最高,Ⅵ组最少,Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组与Ⅰ组相比差异显著,Ⅳ、Ⅵ组相比差异也显著;MGMT 染色强度变化与 O^6-MT 含量一致。瘤体生长Ⅰ、Ⅱ组瘤体放疗第4天起明显增大,Ⅲ组第6天明显增大,与Ⅰ、Ⅱ组相比增长减慢;Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组瘤体在第4天明显减少,以第Ⅵ组最明显;病理学镜检Ⅲ组见小的散在坏死灶,Ⅳ、Ⅴ组坏死区域较Ⅲ组增加,Ⅳ组与Ⅴ组相似;Ⅵ组坏死区域明显增多增大。通过对 O^6-MT 活性、MGMT 染色强度与病理学镜检、瘤体大小对比,细胞内 O^6-MT 含量与放射敏感性密切相关,O^6-MT 含量低组别放疗效果好。结论 O^6-MT含量决定其放射敏感性,据 O^6-MT 活性高低预测其放射敏感性;扶正增效方放射增敏一个重要途径是抑制 DNA 甲基转移酶活性而实现的。

潮汕地区食管癌患者O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因多态性的分析

背景与目的初步研究中国食管癌高发区之一潮汕地区食管癌患者和正常人群O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因编码84、143及160位密码子的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)。材料与方法应用双色荧光杂交微阵列技术分别检测潮汕地区100例食管鳞状细胞癌患者及65例健康对照外周血MGMT基因84位密码子(C2740214T)单核苷酸多态性;用同样的方法检测76例食管鳞状细胞癌患者和50例健康对照MGMT基因143位密码子(A2798995G)、160位密码子(G2799046A)单核苷酸多态性。结果基因型分布符合Hardy-Weinberg定律。统计分析显示食管鳞状细胞癌组与对照组84位密码子2740214C和2740214T等位基因频率差异无统计学意义(P=0.402),2740214CT基因型在病例组和对照组中所占的比例分别为16%和12.3%,2740214TT基因型在病例组中所占的比例是2%。食管鳞状细胞癌组变异基因型拥有者(CT+TT)高于对照组,但差异无统计学意义(P=0.327),2740214TT基因型仅见于个别肿瘤患者,而在正常对照中未发现。143位密码子A2798995G位点仅在对照组中发现一例杂合子,其余均为野生型纯合子,病例组与对照组基因型和等位基因频率差异均无统计学意义。160位密码子G2799046A位点检测在所有的病人和对照中均为野生型纯合子。结论潮汕地区食管鳞状细胞癌患者和正常人群中存在MGMT基因多态性,84位密码子C2740214T位点的突变型纯合子仅见于肿瘤患者,可能与食管鳞状细胞癌有关。

O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶基因表达与胃癌发生的关系

目的研究人胃癌组织O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)基因的表达特点及其与胃癌发生的关系。方法应用加强型原位杂交方法及寡核苷酸探针高效标记技术对76例胃癌组织、73例癌旁组织、20例正常胃组织进行MGMT基因标记检测,同时应用自动图像分析系统进行定量分析。结果胃癌组织MGMT基因阳性表达率为40.8%(31/76),低于正常胃组织的60.0%(12/20),MGMT表达强阳性率为32.3%(10/31),也明显低于正常组织的83.3%(10/12),差异均有显著性意义(P<0.01或P<0.05);癌旁组织MGMT基因阳性表达率为46.6%(34/73),MG-MT表达强阳性率为41.1%(14/34),与胃癌组织差异无显著性意义。定量分析示,胃癌组织MGMT阳性表达的积分吸光度、阳性单位值明显低于正常组织(P<0.05)。胃癌组织与癌旁组织、早期胃癌与进展期胃癌组织、癌旁不同程度不典型增生之间MGMT表达无明显差异。结论人体胃组织存在高度表达的MGMT基因,胃癌发生与MGMT基因表达水平降低有关,MGMT基因异常表达是胃癌形态学改变出现之前的早期行为。

O^6-甲基鸟嘌呤DNA转移酶在神经胶质瘤中的表达及其与亚硝脲耐药的关系

目的 :探讨O6 甲基鸟嘌呤DNA转移酶 (MGMT)在人脑神经胶质瘤中的表达情况及其与亚硝脲耐药之间的关系。方法 :采用免疫组化法对人脑神经胶质瘤石蜡标本中MGMT进行了检测 ,并与临床应用亚硝脲的疗效评价结果进行了比较。结果 :116例神经胶质瘤中MGMT阳性表达率为 6 7.2 %。MGMT阳性表达率最高者为髓母细胞瘤 (10 0 % ) ,表达率最低者为少枝胶质细胞瘤 (35 .7% )。在使用亚硝脲治疗的患者中 ,MGMT阳性表达与亚硝脲化疗效果呈显著负相关 (P <0 .0 5 )。肿瘤细胞的耐药程度与MGMT表达强度无关 ,只与其是否阳性有关。结论 :不同病理类型的神经胶质瘤对亚硝脲的耐药和敏感性明显不同。化疗前检测神经胶质瘤MGMT的表达情况 ,对预测化疗敏感性、指导临床使用亚硝脲化疗具有重要意义。

近红外光谱法非破坏性同时测定海洛因、O^6单乙酰吗啡、乙酰可待因

提出了近红外漫反射光谱快速无损测定缴获白粉中海洛因、O6单乙酰吗啡、乙酰可待因含量新方法。采用GC-MS分析了缴获88份白粉中这3组分的质量百分含量范围分别为12.15%~79.54%,0.4%~18.56%,0.23%~9.11%。以交叉验证误差均方根(RMSECV)为指标,确定各组分用于建模的最优近红外波段和光谱预处理方法,采用偏最小二乘算法建立近红外光谱与这三组分GC-MS分析值之间的校正模型,并以此预测了35个白粉样本。δ代表预测样本NIR值/GC-MS值,海洛因、O6单乙酰吗啡、乙酰可待因δ值的均值为100.63%,100.35%和98.71%,RSD分别为3.96%,7.02%,8.54%。该方法快速无损,结果可靠。

O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶在大肠癌中的表达及意义

目的:检测大肠癌组织中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)的表达情况及其在肿瘤发生发展中的作用和临床意义。方法:采用SABC免疫组化法检测79例大肠癌标本中MGMT的表达情况。结果:大肠癌中MGMT阳性率为53.16%(42/79),其阳性表达与性别、癌细胞浸润深度无关(P>0.05),与患者年龄、淋巴结转移情况有关(P<0.05)。结论:检测MGMT的表达情况对于大肠癌恶性程度的判断及临床化疗方案的制定具有指导作用。

O^6-苄基鸟嘌呤增强BCNU体外和体内抗肿瘤作用的研究

探讨Ｏ６－苄基鸟嘌呤（Ｏ６－ＢＧ）对Ｏ６－烷基鸟嘌呤－ＤＮＡ烷基转移酶（Ｏ６－ＡＧＴ）阳性（或ｍｅｒ＋）的人胃癌细胞ＢＧＣ－８２３和人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１对ＢＣＮＵ细胞毒作用敏感性的影响及其与ＢＣＮＵ合用治疗移植瘤的协同效果。方法：应用ＭＴＴ试验检测Ｏ６－ＢＧ与ＢＣＮＵ合用的细胞毒作用，转移酶活性用从３Ｈ－甲基ＤＮＡ底物转移的Ｏ６－［３Ｈ］甲基鸟嘌呤数表示。结果：１．５～６．０ｍｇ·Ｌ－１的Ｏ６－ＢＧ预先作用２ｈ后，ＢＧＣ－８２３和ＳＭＭＣ－７７２１细胞对ＢＣＮＵ的敏感性明显增加；０．７５～６．０ｍｇ·Ｌ－１的Ｏ６－ＢＧ可完全快速地抑制两种肿瘤细胞的转移酶活性并持续１２ｈ；腹腔注射９０ｍｇ·ｋｇ－１的Ｏ６－ＢＧ预处理２ｈ后给予２５ｍｇ·ｋｇ－１的ＢＣＮＵ治疗，可使动物皮下接种的人胃癌移植瘤生长延迟３８．６ｄ以及人肝癌移植瘤生长延迟３８．７ｄ，并且可明显抑制肿瘤组织的转移酶活性。结论为Ｏ６－ＢＧ与ＢＣＮＵ合用于ｍｅｒ＋的肿瘤具有明显的治疗效果。

中国人肿瘤细胞中O^6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶活性与对嘧啶亚硝脲敏感性的关系

分析了20株中国人肿瘤细胞的O^6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O^6-MT)活性及对嘧啶亚硝脲ACNU的敏感性,发现两者间有较好的线性关系,O^6-MT低,对ACNU敏感,提示O^6-MT可作为使用ACNU对肿瘤化疗时的一项予见性指标。

铂类络合物引起的DNA O^6-AGT的耗竭及染色体损伤

本文测定了KB,CHL,HL-60和L1210细胞DNA鸟嘌呤O^6-烷基转移酶(O^6-AGT)活性。结果表明,KB细咆有较高的O^6-AGT活性,系Mer^+细胞。而CHL,HL-60和L1210细胞的O^6-AGT活性低,属于Mer^-细胞。在此基础上我们观察了顺铂(DDP)、宁辛铂(樟脑胺氯乙酸铂,CCP)和碳铂(JM-8)对KB(Mer^+)细胞O^6-AGT的影响及Mer^+和Mer^-细胞的杀伤及微核的诱发作用。结果表明,三种络合物在等毒性浓度下对O^6-AGT耗竭程序是CCP>DDP>JM-8,但这种耗竭与杀细胞作用无明显相关性而与微核诱发作用相关。此结果提示铂类络合物对DNA鸟嘌呤O^6的损伤可能是其致痛致突变的原因之一。

O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶与肿瘤

DNA修复酶O6 -甲基鸟嘌呤 -DNA甲基转移酶 (MGMT)是机体修复烷基加合物的关键酶。该酶结构与功能异常与肿瘤发生、发现、有效治疗及肿瘤耐药性等方面都有着密切的联系 ,本文综述了近年来的研究进展。

乳腺癌组织中O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶的表达

采用原位杂交方法检测30例乳腺癌组织O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)表达水平。结果显示,MGMT阳性率为93.4%(28/30),其中高表达28.6%(8/28),中、低表达71.4%(20/28)。乳腺癌组织MGMT的表达与临床分期无关。

肺癌患者O^6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因多态性研究

目的 检测人类O6 甲基鸟嘌呤 DNA甲基转移酶 (MGMT)基因 5个外显子的单核苷酸多态 (SNPs)及其与肺癌的关系。方法 采用聚合酶链式反应 (PCR) 单链构像多态性 (SSCP) DNA直接测序法对 10 0例正常人和 6 0例肺癌患者外周血白细胞进行MGMT基因SNPs研究。结果 在正常人群和肺癌患者中检测到MGMT基因的第 3、4外显子上存在着SNPs ,即第 3外显子上第 2 5 0位碱基C被T所取代 ,导致错义突变 (CTTTTT ,使Leu84Phe) ;第 4外显子上第 2 80位碱基C被T取代 ,导致同义突变 (TTCTTT ,均编码Phe)。这两个位点的SNPs在两组人群间的检出率差异无显著性(P >0 0 5 )。结论 MGMT基因第 3、4外显子上存在着SNPs ,其多态改变与肺癌形成的关系较弱。

O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶研究进展

C^(?)-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶是细胞中一种重要的DNA损伤修复酶,它在抵御烷化剂所致的细胞突变和死亡中扮演重要的角色。本文综述近年来关于这个酶的研究进展,内容包括酶及其基因,酶与细胞突变,酶与肿瘤化疗的关系。

O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的:研究DNA修复酶(O-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法:乳腺癌和腺瘤标本共计143例,10%福尔马林固定,石蜡包埋,采用SABC免疫组织化学方法检测MGMT表达。结果:MGMT在乳腺癌和乳腺腺瘤中的阳性率分别为57.85%和13.64%,组间比较具有显著性差异。MGMT在乳腺癌中的表达与患者的年龄、淋巴结转移有关。结论:MGMT的异常表达与乳腺癌的淋巴结转移有关;MGMT可以作为判断乳癌发生和预后的重要指标;检测其表达可以指导临床上化疗方案的制定。

O^6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶基因多态性与肿瘤易感性的关系

【目的】通过比较表达在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中野生型和突变型O6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶(AGT)对二氯乙基亚硝脲(BCNU)细胞毒性作用的反应差异,探测AGT错译突变体的功能意义。【方法】将野生型及不同突变型AGTcDNA分别转染CHO细胞,选择稳定表达AGT的细胞株,用BCNU作用细胞,以存活细胞簇的数量作为判断细胞毒性标准。【结果】表达AGTLeu84Phe和Leu84Phe/Ile143Val/Lys178Arg突变体的细胞对BCNU的毒性作用抵抗力显著减弱,与此不同的是,其余突变体Ile143Val、Lys178Arg、Ser184Asn以及Ile143Val/Lys178Arg对BCNU毒性作用的抵抗性较野生型AGT无明显差异。【结论】AGTLeu84Phe突变体在修复BCNU造成的DNA损伤过程中酶活性降低。提示AGT基因多态性可能与肿瘤易感性有关。

O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因多态性与新疆哈萨克族食管癌易感性关系的研究

目的为探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因多态性与新疆哈萨克族食管癌易感性的关系。方法运用病例-对照研究的方法,PCR-RFLP技术检测新疆哈萨克族食管癌51例及非癌对照109例的MGMT84C>T和MGMT135G>T单核苷酸多态(SNPs)的基因型。结果MGMT84C>T位点的三种基因型CC,CT,TT,在哈萨克族食管癌中所占比例分别为76.5%(39/51)、17.6%(9/51)、5.9%(3/51),对照组分别为77.0%(84/109)、18.3%(20/109)、4.6%(5/109),两组间分布差异不显著(P=0.938,P>0.05);MGMT135G>T位点的三种基因型GG,GT,TT,在哈萨克族食管癌中所占比例分别为90.2%(46/51)、7.8%(4/51)、2.0%(1/51),对照组分别为82.6%(90/109)、16.5%(18/109)、0.9%(1/109),两组间分布差异不显著(P=0.295,P>0.05);MGMT84C>T位点和MGMT135G>T位点联合分析,在食管癌组0突变等位基因与1-4突变等位基因所占比例分别为68.6%(35/51)、31.4%(16/51);对照组分别为:63.3%(69/109)、36.7%(40/109),两组间分布差异也不显著(P=0.511,P>0.05)。结论MGMT84C>T和MG-MT135G>TSNPs与哈萨克族食管癌易感性可能无关联。

抑制O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶活性与肿瘤细胞对亚硝脲药物敏感性关系的研究

80％以上的肿瘤细胞为O^6-甲基鸟嘌吟-DNA甲基转移酶(O^6-MT)活性较高的Mer^+型,能够修复亚硝脲药物(NU)造成的DNA烷化损伤,对NU不敏感。本实验证明,用0.75,0.50和0.25mmol/L甲基亚硝脲(MNU)分别处理Mer^+型的HeLaS3,SMMC-7721和表现Mer^-型特征的Cc801,均能明显降低细胞中O^6-MT活性,从而显著提高了三种细胞对嘧啶亚硝脲和双氯乙亚硝脲的敏感性,提示降低O^6-MT活性是使用NU对Mer^+型肿瘤进行有效治疗的前提。

启东县、青浦县鸭肝中O^6—甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶活力比较

O^6—甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O^6—AT)厂是体内修复酶,特异性地修复O^6-烷基化鸟嘌吟,这一具有前致变性的结构,其值的高低在一定程度上可反映机体对某些亚硝胺类化合物的敏感性。本文报道了测定肝癌高发区江苏省启东县和肝癌相对低发区上海市青浦县二个地区鸭乙型肝炎病毒(DHBV)感染阳性与阴性的鸭肝中O^6—AT活性,结果显示启东鸭肝的O^6—AT酶活性明显低于青浦的。提示启东家鸭对亚硝胺类物质比较敏感。这可能和启东鸭肝癌的高发有关系。