UPLC-HRMS法定量分析小鼠组织中的6-氧-甲基鸟嘌呤

为评价4-(N-甲基-N-亚硝氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)的器官致癌性,建立了一种定量分析C57BL/6小鼠组织中DNA甲基化加合物6-氧-甲基鸟嘌呤(6-O-MeG)的超高效液相色谱-高分辨质谱(UPLC-HRMS)方法,并分别对NNK染毒后生理盐水对照组、吡唑处理组和5-甲氧基补骨脂素(5-MOP)处理组小鼠肝脏和肺中6-O-MeG的含量进行了测定。用试剂盒提取组织样品DNA,提取物在80℃下酸解后加入内标6-氧-甲基-d3-鸟嘌呤([CD_3]6-O-MeG),经过HLB固相萃取柱净化后进行UPLC-HRMS分析。结果表明:(1)6-O-MeG在0.05~10.00 ng/mL内线性良好(R^2=0.999 8),检出限0.011ng/mL,回收率92.1%~102.2%,日内和日间精密度分别为1.10%~4.34%和1.89%~6.58%。(2)给药4 h后,吡唑处理组小鼠肝脏和肺中6-O-MeG的含量分别为对照组的2.09和1.87倍,5-MOP处理组则分别为对照组的0.32和0.67倍,表明小鼠体内的CYP2A5在NNK的代谢活化过程中起到重要作用。该方法样品前处理简单、选择性好、灵敏度高,适用于小鼠组织中6-O-MeG的测定。

维生素C对豚鼠DNA氧化及烷化损伤影响的研究

目的:观察维生素C(VC)对DNA氧化损伤及烷化损伤的影响。方法:按体重每日给幼年豚鼠不同剂量(0、7.5、125和250mg/kgbw)的VC灌胃以构建动物模型。20d后采血获取淋巴细胞,用单细胞凝胶电泳法检测淋巴细胞DNA自发损伤和H2O2诱导的氧化损伤;留实验期D20的24h尿,通过毛细管电泳法检测豚鼠尿中O6-甲基鸟嘌呤(O6-MeG)含量。结果:各组豚鼠淋巴细胞DNA自发损伤无明显差异(P>0.05)。10μmol/LH2O2氧化作用下,四组DNA损伤分别为127.3、72.6、121.0和133.0AU;0、125和250mg/kgbw组DNA氧化损伤均较7.5mg/kgbw组加重(P<0.05)。而H2O2浓度增加为25及50μmol/L时,各组DNA氧化损伤均明显加重,但差别不明显。0mg/kgbw组DNA烷化损伤代谢产物O6-MeG的排出量显著高于7.5mg/kgbw组(P<0.05),而与125和250mg/kgbw组无显著差异(P>0.05)。结论:对幼年豚鼠按体重每天补充7.5mg/kgbwVC可有效地降低低浓度H2O2诱导的DNA氧化损伤和减少DNA烷化损伤产物O6-MeG的生成,而较高剂量补充VC(125、250mg/kgbw)则没有明显的保护作用。

O^6-甲基鸟嘌呤DNA-甲基转移酶活性的测定方法

O^6-甲基鸟嘌呤 DNA-甲基转移酶在哺乳动物细胞 DNA 烷化损伤的修复中起着重要作用。本文报道了以~3H-MNU(~3H-甲基亚硝脲)标记的小牛胸腺 DNA 为底物来检测 O^6-甲基鸟嘌呤 DNA-甲基转移酶的方法。该方法可用于哺乳动物细胞 DNA 损伤与修复的研究,并为有预见性地进行肿瘤选择性化疗提供了技术手段。

不同剂量维生素A摄入对大鼠DNA损伤的影响

目的 探讨补充不同剂量维生素A(VA)对DNA氧化及烷化损伤的影响。方法 将Wistar大鼠随机分为 4组 ,分别为VA缺乏组 ,及补充VA11 4 3,4 2 86 ,14 2 86 μgRE(视黄醇当量 ) / (kg·d) 3个剂量组。干预时间为 8周。采用单细胞凝胶电泳法 (SCGE)分析比较不同组之间淋巴细胞DNA氧化损伤 ;用高效毛细管电泳法测定尿中O6-甲基鸟嘌呤 (O6-Methyl-guanine ,O6-MeG)的排出量。结果 DNA损伤分析显示VA缺乏组淋巴细胞DNA自发性损伤明显高于VA补充组 (P <0 0 1)。用H2 O2 诱导淋巴细胞氧化损伤时 ,4 2 86 μgRE/ (kg·d)组的淋巴细胞损伤最轻 (P <0 0 1)。缺乏组大鼠尿中的O6-MeG的排出量随缺乏时间的延长明显升高 (P <0 0 1)。 4 2 86 μgRE/ (kg·d)组O6-MeG的排出量无明显改变。 14 2 86 μgRE/ (kg·d)组至第 8周时 ,O6-MeG的排出量分别为VA缺乏组、11 4 3和 4 2 86 μgRE/ (kg·d)组的 1 38倍 (P <0 0 5 )、3 5 7倍 (P <0 0 1)和 11 75倍 (P <0 0 1)。 结论 较长时间VA缺乏可导致机体DNA自发性损伤、H2 O2 诱导的氧化损伤及DNA烷化损伤均明显增加 ;高剂量 14 2 86 μgRE/ (kg·d)VA补充对DNA损伤不但无防护作用 ,反而增加DNA损伤 ;适量摄入 4 2 86 μgRE/ (kg·d)的VA能有效地增强DNA抗氧化和?

大剂量维生素C对DNA氧化烷化损伤影响

目的观察大剂量摄入维生素C(VC)对DNA氧化损伤及烷化损伤的影响。方法以补充大剂量VC饲料给幼年Wistar大鼠,剂量分别为0,2 000,5 000,10 000mg/kg饲料,不添加VC作为对照组,干预时间为60 d。干预结束后,采用单细胞凝胶电泳法检测和评价淋巴细胞DNA自发损伤和H2O2诱导的氧化损伤;留取尿液用毛细管电泳法检测大鼠尿中O6-甲基鸟嘌呤(O6-methyl guanine,O6-MeG)含量。结果各组大鼠的DNA自发损伤差异无统计学意义(P>0.05)。10μmol/L的H2O2诱发DNA损伤时,随剂量增加,DNA损伤逐渐加重,对照组为59.060AU,2 000 mg/kg饲料剂量组为69.900AU,5000 mg/kg饲料剂量组为75.768AU,比对照组升高28%(P<0.05),10000 mg/kg饲料剂量组为79.655AU,比对照组升高49%(P<0.01)。各组O6-MeG的含量差异有统计学意义(P=0.01),10 000m g/kg饲料剂量组含量最高为2.434 mg/g肌酐,比对照组升高36%(P<0.05)。结论高剂量VC对DNA自发损伤没有影响,而对10μmol/L H2O2的诱导损伤,补充5 000 mg/kg饲料和10 000 mg/kg饲料的VC可加重DNA损伤。给大鼠补充10 000 mg/kg饲料的VC可导致DNA烷化损伤产物O6-MeG生成增多。

绞股蓝提取物对衰老大鼠DNA损伤的影响

背景与目的探讨绞股蓝提取物对衰老大鼠DNA氧化及烷化损伤的影响。材料与方法成年大鼠颈背部皮下注射D-半乳糖100mg/kg构建衰老动物模型,同时设注射等量生理盐水的正常对照组。已建模的大鼠分为人工合成饲料中添加不同剂量的绞股蓝提取物(200、800、4000mg/kg饲料)及维生素E、C(VE+C)各组,8周后采血获取淋巴细胞,用单细胞凝胶电泳法检测淋巴细胞DNA自发损伤及H2O2诱导的氧化损伤;实验结束前1周留取大鼠24h尿液,通过毛细管电泳法检测大鼠尿中O6-甲基鸟嘌呤(O6-MeG)的含量。结果各组大鼠淋巴细胞DNA自发损伤无明显差异(P>0.05)。分别采用5、10和25μmol/LH2O2氧化时,绞股蓝各组及维生素E、C(VE+C)组DNA氧化损伤均明显低于衰老对照组(P<0.05),且绞股蓝800、4000mg/kg组DNA氧化损伤与正常对照组及VE+C组无显著性差别。衰老对照组尿中DNA烷化损伤代谢产物O-6MeG含量较其他各组偏高,但差别无统计学意义。结论D-半乳糖诱导衰老的大鼠模型DNA抗氧化损伤的能力降低,而DNA烷化损伤无明显改变;在本实验条件下,绞股蓝提取物可有效降低H2O2诱导的DNA氧化损伤,对DNA烷化损伤没有明显作用。