2021年新疆部分地区规模化猪场O型口蹄疫病毒抗体检测与分析

为了解2021年新疆不同地区规模化猪场O型口蹄疫的免疫水平,本试验采用液相阻断酶联免疫吸附试验(LPBELISA)方法对采自3个地区的7家规模化猪场的353份血清样品进行抗体检测与分析。结果显示,O型口蹄疫病毒抗体平均阳性率为76.77%(271/353),达到国家规定标准(70.00%);3个地区的O型口蹄疫病毒抗体阳性率均高于70.00%;7个猪场中,仅有B场的抗体阳性率为62.96%,低于国家规定标准,该场需要及时加强免疫,并科学合理地调整其免疫程序。本结果可为新疆地区猪场O型口蹄疫的防控提供依据。

基于聚硫堇的一次性O型口蹄疫抗原酶免疫传感器的研制

将O型口蹄疫酶标抗体掺杂于有机-无机溶胶凝胶中,并修饰于聚硫菫的丝网印刷碳电极表面,从而制备一次性口蹄疫病毒抗原(FMDV-Ag)酶免疫传感器。试验中采用直接免疫分析法检测口蹄疫病毒抗原。根据免疫反应前后还原峰电流下降的百分率K值的大小实现对抗原的检测。在优化条件下,免疫传感器检测抗原的线性范围为77～388ng/mL,最低检出限为32ng/mL。免疫电极具有较好的特异性、重现性(RSD=5.6%)、稳定性(10d后电流响应为初始值的89.5%)和准确性(与AGP符合率为95%)。因此,该免疫传感器有望用于O型口蹄疫抗原的快速检测。

两种口蹄疫O型、A型抗体检测试剂盒检测猪口蹄疫抗体的应用研究

为研究两种口蹄疫抗体检测试剂盒的应用适用性,对50份血清分别用口蹄疫液相阻断ELISA检测试剂盒和固相竞争ELISA检测试剂盒进行了检测,并比较了两种试剂盒的阳性检出率、特异性、稳定性及检测值与中和抗体的线性关系。结果表明,两种试剂盒在应用方面各有优劣,口蹄疫固相竞争ELISA检测试剂盒具有操作简便、耗时短、成本低的优点,更适用于基层兽医实验室进行口蹄疫抗体定性检测;口蹄疫液相阻断ELISA检测试剂盒可测定血清中的具体抗体效价值,更适用于口蹄疫抗体定量检测。

临西县猪瘟病毒、口蹄疫病毒O型和A型抗体血清学检测与分析

为了解河北省临西县部分猪场猪瘟病毒和口蹄疫病毒疫苗免疫效果,本研究于2022年从临西县部分猪场采集血清样品550份,采用ELISA法分别检测猪瘟、口蹄疫病毒O型和A型抗体合格率,并进一步统计和分析数据。结果显示,该地区猪群口蹄疫O型和A型抗体合格率均超过90%,而猪瘟抗体合格率为77.3%,均达到国家70%以上合格率的要求。进一步分析发现,所有猪场/发育阶段猪群口蹄疫O型和A型抗体合格率差异较小,所有猪场合格率均高于80%;但不同猪场和发育阶段猪群猪瘟抗体合格率存在差异,部分猪场猪瘟抗体阳性率低于70%;保育猪和育肥猪较母猪群抗体阳性率低,分别为70.39%和66.67%。以上研究结果表明,临西县口蹄疫O型、A型和猪瘟疫苗免疫效果均较好,超过国家制定的最低标准,但仍然有个别猪场或猪群存在猪瘟疫苗抗体合格率不高的现象,应引起重视。

牛羊O型口蹄疫ELISA试验的抗体检测

口蹄疫是由口蹄疫病毒引发的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。口蹄疫是人畜共患传染病,被国际兽医组织确定为一类传染病,主要侵害偶蹄兽,它的临诊特征为体温升高、精神不振、流涎,在唇部内面、齿龈、舌面、蹄部、乳房处皮肤出现水疱,水疱逐渐破裂后,体温达到正常。

渭南市部分地区奶山羊O型口蹄疫与小反刍兽疫抗体检测与分析

为了掌握渭南市部分地区奶山羊O型口蹄疫与小反刍兽疫的实际免疫效果,及时发现存在问题及潜在风险,为科学防控口蹄疫与小反刍兽疫提供可靠依据。本研究对规模奶山羊场和散养户不同免疫程序下羊O型口蹄疫和小反刍兽疫免疫抗体进行检测和分析,从检测结果来看,规模场与规模场之间、散养户和散养户之间、规模场与散养户之间都存在较大差异。建议个别场区在进行实验室检测后二次免疫和补免,以达到疫病防控在目的。

O型口蹄疫疫苗免疫牛抗体消长动态的LPB-ELISA检测

分别按一次免疫、首免后第15 d加强免疫和首免后第60 d加强免疫程序,对3组试验牛(每组牛20头)用O型口蹄疫疫苗进行了免疫。免疫后不同时间点用液相阻断ELISA(LPB-ELISA)测定了免疫牛O型口蹄疫抗体效价。结果,首免后第15 d加强免疫牛和第60 d加强免疫牛抗体水平较高,50%保护牛所占比例分别为56.3%和63.1%,完全受保护的牛所占比例分别为34.3%和29.5%。第60 d加强免疫牛的保护率要高于第15 d加强免疫牛和一次免疫牛的保护率。结果表明,首免后第60 d加强免疫是最理想的免疫程序。

CpG DNA重组质粒对猪O型口蹄疫病毒抗原的免疫佐剂效应

作者应用含CpG基序序列的重组质粒（即CpG DNA）作为免疫佐剂,评价其对猪O型口蹄疫病毒抗原疫苗的免疫增强效果。结果表明：CpG DNA重组质粒与猪口蹄疫灭活病毒抗原疫苗配伍免疫小鼠,CpG DNA重组质粒对小鼠具有较强的免疫佐剂效应,能促进口蹄疫病毒抗原诱导产生较高水平的特异性抗体,其抗体滴度是空载体疫苗对照的2倍。CpG DNA重组质粒与商品化猪口蹄疫灭活疫苗配伍免疫试验猪,其增强抗原诱导的特异性抗体滴度最高可达标准疫苗的4倍以上,也显著高于空载体疫苗对照 与病毒纯化抗原配伍免疫动物,攻毒后其免疫保护效力的PD50高达13.00,远高于标准疫苗对照（PD504.69）。在CpG DNA重组质粒剂量选择试验中,含低剂量的CpG DNA疫苗（50、200μg.头份-1）都比高剂量组（500μg.头份-1）诱导的抗体滴度高,其中50和200μg.头份-1的CpG DNA剂量,在接种后14~32 d诱导的抗体滴度高达1∶1500,是标准疫苗的4~5倍,而500μg.头份-1剂量诱导的抗体仅是标准疫苗的2倍,说明CpG DNA重组质粒在低剂量时即可发挥强烈的佐剂效应。研究表明CpG DNA对猪O型口蹄疫病毒抗原疫苗有较强的免疫佐剂效应,且使用剂量低,应用前景广阔。

O型口蹄疫病毒不同基因型联合RT-PCR检测方法的建立

在比较国内外口蹄疫病毒 (FMDV)流行毒株序列的基础上 ,设计了检测 FMDV的 PCR引物及 O型 FMDV不同基因型即中国型 (Cathay)与乏亚株 (Pan Asia)的二联 PCR引物。在确定单项 RT- PCR反应条件的基础上 ,建立、优化了二联 RT- PCR反应体系和条件 ,并进行了相关病毒检测试验。结果表明 ,建立的检测 O型 FMDV不同基因型中国型与泛亚株的二联 RT- PCR,有效、特异且敏感 ,为 FMD的诊断。

O型口蹄疫抗体金标检测试纸条判定标准的确立

本试验旨在迅速、准确检测口蹄疫阴性血清和阳性血清,确立O型口蹄疫抗体金标检测试纸条的判定标准。通过3批次O型口蹄疫抗体金标检测试纸条,对180份猪、牛、羊口蹄疫阴性血清,197份猪、牛O型口蹄疫弱阳性血清,317份猪、牛、羊O型口蹄疫阳性血清,223份牛Asia 1、A型口蹄疫阳性血清,600份田间血清样品进行检测,同时用O型口蹄疫液相阻断ELISA和O型口蹄疫正向间接血凝2种方法检测相同的血清样品。对3种方法检测的结果进行分析,并且将试纸条的检测线和质控线的显色情况与O型口蹄疫液相阻断ELISA的抗体滴度相比较。确立了试纸条的诊断标准:试纸条抗体滴度1∶2-为口蹄疫抗体阴性;试纸条抗体滴度1∶8+为O型口蹄疫阳性血清。根据试纸条的显色结果与液相阻断ELISA的结果的关系,绘制了比色卡。试纸条的判定标准检测血清结果与液相阻断ELISA和正向间接血凝结果分别进行统计学分析,试纸条与液相阻断ELISA和正向间接血凝相关性分别为y=1.142x+0.7421,y=1.1845x+0.8623;相关系数(r)分别为0.9221和0.9033。结果显示,O型口蹄疫抗体金标检测试纸条的判定标准的确立和比色卡的绘制,实现半定量分析,更加迅速、准确,适于实验室、基层兽医站和养殖场使用。

鉴别口蹄疫病毒O型、A型、AsiaⅠ型三重RT-PCR检测方法的建立

为建立鉴别口蹄疫病毒O型、A型、AsiaⅠ型的RT-PCR快速检测方法,根据GenBank中已登录的口蹄疫病毒(FMDV)O型、A型、AsiaⅠ型高度保守的2 B基因序列设计了1条共用反转录引物,根据3个血清型的VP1特异性基因序列,设计了3对型特异性引物对;以FMDV样本总RNA反转录产物为模板,建立了鉴别FMDV O、A、AsiaⅠ型三重RT-PCR检测方法。该方法灵敏度高,最低检测限均为100拷贝/μL;重复性和稳定性好;特异性强,与其他7个对照病原核酸均呈现阴性反应;可检测出10份疑似临床样品中3个血清型的FMDV感染样品。表明本试验成功建立了鉴别FMDV O型、A型、AsiaⅠ型三重RT-PCR检测方法,可用于临床上FMDV O型、A型、AsiaⅠ型的分型鉴别检测。

O型口蹄疫疫苗免疫家畜抗体水平的检测

准确监测是防控口蹄疫的重要环节。采集某地区乡镇规模化养殖场及散养户的牛、羊、猪血清,采用正向间接血凝试验进行O型口蹄疫疫苗免疫抗体水平的检测。结果显示,该地区牛、羊的口蹄疫疫苗免疫合格率平均为76%,猪的口蹄疫疫苗免疫合格率平均为60%;规模化养殖场较个体散养户免疫效果好;牛口蹄疫O型灭活苗的免疫效果好于牛口蹄疫AsiaⅠ-O型双价灭活疫苗的免疫效果。

三株O型口蹄疫病毒单克隆抗体的抗原识别位点分析

用抗O型口蹄疫病毒(FMDV)单克隆抗体杂交瘤细胞株(4A9、4C3、9F12)制备腹水并进行纯化,经ELISA检测,单抗4A9、4C3和9F12的腹水效价分别为1∶25600、1∶102400和1∶51200,SDS-PAGE分析显示,3株纯化单抗均以IgG重链和轻链为主,其分子质量分别约为45ku和25ku。单抗4A9、4C3和9F12的饱和度分别为1∶40、1∶40和1∶1000,叠加试验所得增值指数分别为0.27%、13.05%、13.34%,均小于50%。Western-blotting结果显示,3株单抗均可与O型FMDV结构蛋白VP1发生特异性反应。表明,此3株单抗均识别O型FMDV VP1蛋白上的同一个抗原位点,存在干扰现象。

O型口蹄疫病毒抗体化学发光免疫分析检测方法的建立

为建立动物血清中O型口蹄疫病毒抗体化学发光免疫分析检测方法,通过获得的O型口蹄疫病毒VP1融合蛋白与相关单克隆抗体,制备了O型口蹄疫病毒抗体竞争化学发光检测试剂盒。结果表明:该方法能够定量检测猪、牛、羊血清中的O型口蹄疫病毒VP1蛋白抗体,与其他偶蹄类动物病原无交叉反应,具有良好的重复性;对该方法的特异性指标、敏感性指标进行了验证,同国产O型口蹄疫抗体检测试剂盒进行了比较,阳性样品符合率92.62%,阴性样品符合率92.14%,总符合率92.45%;重复性试验组内与组间变异系数分别低于10%和15%。综上,该研究建立的O型口蹄疫病毒抗体化学发光免疫分析检测方法特异性高、敏感性强,操作简单、快速,具有较高的应用推广价值。

O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的原核表达与抗原性分析

研究分析了O型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1与当前猪FMDV疫苗血清的免疫反应性。将VP1基因克隆至原核表达载体pET32c,并在大肠埃希菌BL21中得到了表达,Western blot分析表明该重组蛋白与豚鼠O型FMDV标准阳性血清具有良好免疫反应性。目的蛋白经纯化后用ELISA分析其与猪疫苗血清的免疫反应性,结果显示该重组VP1蛋白(rVP1)只能与部分O型FMDV疫苗血清反应。推测当前使用的不同O型FMDV疫苗毒株在VP1重要中和抗原位点G-H环(134 aa^158 aa)与C末端(200 aa^213 aa)存在较大差异。

O型口蹄疫抗体不同检测方法的检测结果比较分析

为更好开展O型口蹄疫免疫质量评估,客观评价不同抗体检测方法的相关性和特点,试验选择猪、牛、羊血清样品299份和2个规模猪场日常检测血清样品180份,采用正向间接血凝(IHA)、液相阻断ELSIA(Lp B)和VP1结构蛋白ELISA(VP1)三种方法进行0型口蹄疫免疫抗体检测。结果显示,采用IHA方法检测的免疫抗体更符合临床实际免疫变化规律。采用合成肽疫苗免疫的猪场不宜采用IHA方法检测抗体,但可采用Lp B和VP1方法检测,两种方法检测结果符合率较高。