B→O血型转变工具酶α-半乳糖苷酶cDNA克隆及表达

α-半乳糖苷酶是实现 B→O血型转变、制备通用型血的关键工具酶 .利用反转录 PCR方法从中国海南 Catimor咖啡豆中克隆α-半乳糖苷酶 c DNA,插入嗜甲基酵母 P.pastoris分泌表达载体 p PIC9K中 ,转化 P.pastoris GS1 1 5,筛选高表达重组菌株 .经甲醇诱导表达 7d后 ,发酵液总蛋白分泌量约 1 .2 mg/ml,SDS- PAGE呈现约 41 k D特异表达带 ,与专一性底物对 -硝基 -苯基 -α- D-吡喃半乳糖苷反应证明 ,表达产物具有 α-半乳糖苷酶活性 ,最高达到 1 8U/ml.初步实验表明 ,表达的 α-半乳糖苷酶可酶解 B型红细胞 ,成功实现 B→O血型转变 .

原核基因工程制备新型重组α-半乳糖苷酶应用于人B→O血型改造的研究

本研究利用基因工程方法制备脆弱类杆菌来源的新型α-半乳糖苷酶并将其应用于人B→O血型改造。在获得了能够表达细菌α-半乳糖苷酶工程菌株的基础上,从诱导时间、诱导剂浓度两个方面对工程菌株的诱导条件进行优化,获得细菌α-半乳糖苷酶的最佳可溶性表达条件;超声上清经过阳离子交换层析和阴离子交换层析等方法进行纯化。利用纯化后的α-半乳糖苷酶在磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中处理B型红细胞2小时,制备O型红细胞。结果表明细菌α-半乳糖苷酶最佳诱导表达条件为:37℃、起始D600为0.8,IPTG浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为2小时。纯化后α-半乳糖苷酶的纯度为电泳纯,比活由纯化前的0.42 U/mg提高到了2.1 U/mg。该酶在26℃、接近中性的pH条件(6.8)下经2小时可将B型红细胞改造成O型红细胞,需要的酶量为225μg/ml红细胞。结论:建立了重组细菌α-半乳糖苷酶的表达纯化工艺,制备的重组α-半乳糖苷酶可有效地将B型红细胞改造成O型红细胞,为B→O血型改造提供了更有效的工具酶。

肺血栓栓塞症规律抗凝治疗后复发与患者ABO血型的关系

目的探讨肺血栓栓塞症(PTE)规律抗凝治疗至少3个月后复发与患者ABO血型的关系。方法回顾性分析2008年1月至2019年12月于首都医科大学附属北京安贞医院住院治疗的287例急性PTE患者的临床资料,根据PTE复发情况分为未复发组(147例)和复发组(140例)。收集患者首次就诊时的一般资料。比较2组暂时性危险因素比例、危险分层比例、治疗情况及ABO血型分布情况。结果2组患者性别、年龄、身高、体质量、吸烟史及饮酒史比较,差异均无统计学意义(均P>0.05),复发组体重指数≥30.00 kg/m2比例低于未复发组,差异有统计学意义(P<0.05)。复发组合并高血压、高脂血症比例均低于未复发组(均P<0.05)。2组其他合并疾病比例比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。复发组暂时性危险因素比例低于未复发组[5.7%(8/140)比20.4%(30/147)],差异有统计学意义(P<0.001)。2组危险分层、起始溶栓治疗比例及抗凝疗程比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。复发组O型血比例低于未复发组[15.7%(22/140)比34.0%(50/147)],差异有统计学意义(P<0.001),且复发组中A型血比例最高[40.7%(57/140)]。结论规律抗凝治疗至少3个月后,O型血患者PTE复发风险较低。

M蛋白血症与A、B、O血型的相关性分析

目的探讨M蛋白血症与A、B、O血型的相关性。方法随机收集本院门诊和住院病人的血标本7058例,同时采用琼脂糖凝胶电泳技术检测血清蛋白电泳及A、B、O血型鉴定,检出在球蛋白区出现M蛋白异常条带的病例122例,统计M蛋白血症在A、B、O血型系统中的分布频率,分析其与血型抗原表达之间的相关性。结果122例M蛋白血症患者A、B、O血型抗原分布特征为:A>B>O>AB。不同血型间M蛋白发生率,经χ2检验,P<0.01。结论M蛋白血症与A、B、O血型系统之间存在相关性,表明不同血型所代表的免疫遗传性状与M蛋白血症之间有一定关系。

B→O血型改造装置控制系统的研制(英文)

B→O血型改造在平战时紧急条件下的输血方面具有重大意义。解放军军事医学科学院章扬培教授课题组利用基因工程,成功实现了B型血向O型血的转变,从而使国内的血型改造研究获得重大突破。为实现B→O血型改造过程的标准化、自动化,研制了一套B→O血型改造装置,实现了B→O血型改造工艺的自动化,将单次血型改造时间缩短到了手工操作的1/4,并且实现了工艺流程的标准化和密闭性,在使用一次性无菌管路耗材的情况下,从外部条件上满足了B→O血型改造结果用于临床的要求,为B→O血型改造在临床上的广泛推广奠定了基础。文章重点介绍了B→O血型改造装置控制系统的研制情况,包括软件及硬件系统的设计。该控制系统为 B→O血型改造过程提供了一种安全、高效的途径。

B→O血型改造装置控制系统的研制

为实现B→O血型改造过程的标准化、自动化,研制了一套B→O血型改造装置。重点介绍了B→O血型改造装置控制系统的研制,包括软件及硬件系统的设计。该控制系统为B→O血型改造过程提供了一种安全、高效的途径,为B→O血型改造在临床上的广泛应用奠定了基础。

中学生ABO血型与学习成绩相关性的初步研究

应用医学统计学方法 ,从生物医学的角度对中学生 ABO血型与学习成绩的关系进行了初步研究 。

周围型非小细胞肺癌的CT征象与ABH(O)血型抗原表达的相关性研究

目的 探讨周围型非小细胞肺癌 (NSCLC)的CT征象与ABH(O)血型抗原 (BGA)表达的相关性。材料与方法 对 72例经手术病理证实的周围型NSCLC患者术前进行CT扫描 ,并用SP法对肿瘤标本BGA进行免疫组化染色。结果 ( 1)肿瘤BGA表达阴性率随着病理分级的增加而增高 (P <0 .0 1) ,且在有淋巴结转移或肺外浸润组中明显升高 (P <0 .0 0 5 )。 ( 2 )CT征象中 ,肿块最大径 >3cm组其肿瘤BGA表达阴性率比≤ 3cm组高 (P <0 .0 0 5 ) ;有纵隔淋巴结增大组其肿瘤BGA表达阴性率高于无纵隔淋巴结增大组 (P <0 .0 0 5 ) ;胸膜受累胸膜外脂肪线消失组其BGA表达阴性率高于胸膜外脂肪线存在组 (P <0 .0 0 5 ) ;具有含气支气管征或空泡征的肺腺癌BGA表达阴性率低于无此征象的肿瘤 (P <0 .0 5 ) ,肿瘤BGA表达阴性组的强化曲线与阳性组间有差别 ,前者CT值在达到了强化峰值后有下降更快的趋势 (P≤ 0 .0 5 )。结论 CT显示肺癌瘤体 >3cm ,含气支气管征、空泡征、胸膜受累胸膜外脂肪线消失。

O型血型孕妇血浆中IgG抗体效价与孕妇年龄、孕期、孕次关系探讨

目的探讨O型血型孕妇IgG抗A(B)抗体效价与孕妇年龄、孕期、孕次的关系,预防母婴血型不合HDN发生。方法选取2012年5月～2013年5月在我院产前诊断中心接受检查的302例O型血型孕妇,其中丈夫均为非O型。采用微柱凝胶法检测孕妇血浆中IgG抗A(B)抗体效价,分析孕妇年龄、孕期和孕次与孕妇血浆IgG抗A(B)抗体效价的关系。结果 302例夫妻ABO血型不合O型血型孕妇血浆IgG抗A(B)抗体效价随孕妇年龄、孕次的增长而升高,即母婴血型不合新生儿发生HDN的患病率也随之升高。结论监测夫妻ABO血型不合的O型血型孕妇不同孕龄、孕期、孕次和血浆中IgG抗A(B)抗体效价,可预测ABO-HDN的发生。

1例O,ccdee血型的家系调查

O型Rh阴性(O,ccdee)血型在人群中分布极少,作为受血者,临床选择同型供血者较为困难,血型为O,ccdee的女性,与新生儿溶血病更具有密切的关系。笔者在临床上发现1例O,ccdee,患者曹×,妊娠6次,先后5次流产,第2眙婴死于溶血病,无输血史。在其姐妹7人中,已婚的两个妹妹各有2次正常生育史,无流产史。为查明原因,笔者对其家系之间的血型遗传关系进行了调查,现报告如下。

肠出血型大肠埃希菌O157:H7 Tir基因的原核表达

目的:高效表达出血型大肠埃希菌O157:H7转位紧密黏附素受体Tir(translocation inti min receptor)的C末端蛋白,并初步鉴定其活性。方法 :对EHEC O157:H7标准株EDL933 Tir完整的编码区基因序列和氨基酸序列进行生物信息学分析,选取C末端基因(命名为Tir-C),构建原核表达质粒PET-30a(+)-Tir-C,转至E.coli BL21/DE3中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测相对分子质量,Western blot鉴定免疫原性。结果:PCR扩增出675 bp的目的片段,构建的质粒经酶切鉴定及测序与预期一致。目的蛋白在裂解上清中有表达,纯化浓度达500μg/mL,并有较好的免疫原性。结论:成功表达了有抗原活性的重组Tir-C蛋白,为研究0157:H7疫苗奠定了基础。

“O”型血型孕妇IgG抗体效价对新生儿溶血影响

目的:探讨"O"型血型孕妇IgG抗体效价对HDN发病的影响。方法:对248例"O"型血型孕妇行产前IgG抗A(B)抗体效价检测,且检测所生新生儿血清总胆红素水平,评价"O"型血型孕妇血清IgG抗体效价对HDN影响。结果:248例夫妻中,随着孕妇血清IgG抗A(B)抗体效价的升高,其所生新生儿发生HDN的患病率也在升高,差异有统计学意义(P<0.01),新生儿胆红素水平也随着母亲抗体效价的提高而差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HDN的发生与"O"型血型孕妇血清中IgG抗A(B)抗体效价相关,效价越高,HDN的发生率越高,当抗体效价≥512时,新生儿血清总胆红素水平随效价升高而增高。

用α-半乳糖苷酶制备可供输注的人通用型O型红细胞

研究的目的是将人群中28％的B型血改造成通用O型血,提高O型血的储存和使用比例,以缓解战争、 恐怖袭击、突发事件等紧急状态下对O型血的大量需求。用α-1.3半孔糖苷酶作为B→O血型改造的工具酶,摸索 改造一个使用单位B型血红细胞(100 ml)的最佳条件。结果实现了在密闭、无菌条件下使用50 U／ml工具酶,pH 5.6,26℃ 2小时,进行B→O的血型改造。结论:改造后的通用型O型血红细胞符合生物制品检定规程的要求, 并可在4℃存放21天。

具血型转换功能的咖啡α-半乳糖苷酶基因的克隆与表达

从大粒种咖啡(Coffea liberica)和中粒种咖啡(Coffea canephora)中分离克隆到了α-半乳糖苷酶(α-D-galactosidase)cDNA的开放阅读框架即编码区,分别记为Gal-D与Gal-Z,长度与已发表的小粒种咖啡cDNA编码序列相同均为1 089 bp,同源性与已发表的小粒种咖啡cDNA编码序列相比分别为98.7%和99.27%。将克隆到的Gal-D与Gal-Z用巴斯德毕赤氏酵母Pichia pastoris表达载体pPICZαA(分泌甲醇诱导型)和pGAPZαA(分泌组成型)成功地构建了如下酵母表达载体:pPICZαA/Gal-Z,pPICZαA/Gal-D和pGAPZαA/Gal-D,并转入酵母宿主菌GS115进行了发酵表达研究。实验得出工程菌株pPICZαA/Gal-D/GS115的重组表达产物酶活最高可达48.22(U/mL),对发酵产物进行了SDS-PAGE电泳,得到一条清晰的主条带。

实验动物山羊血型鉴定初探

目的:旨在分析研究山羊是否具有与人类相似的不同血型。方法:用一次性EDTA-K2真空管,采集河北省邢台县当地山羊全血样本。采用微柱凝胶卡鉴定血型,正定型检测山羊A B O血型的A抗原、B抗原及Rh系统的D抗原;反定型检测抗-A、抗-B及A B O血型系统以外抗体。结果:正定型抗-A、抗-B及抗-D试剂血清与山羊红细胞在微柱凝胶血型卡中,凝集反应均为阴性;反定型山羊血清与试剂A细胞、B细胞均为阴性反应。山羊血型正定型为O型,Rh(D)血型为阴性;反定型也似O型;但对照管与O型红细胞发生凝集反应,推测山羊血清中存在着抗人红细胞的种族抗体。结论:山羊红细胞上无抗原,正反定型类似人类红细胞A B O系统的O型、Rh(D)阴性;但山羊血清中有抗人类红细胞的种族抗体。

4178例O型血孕妇血清IgG型抗A(B)抗体效价检测的分析

目的探讨O型血孕妇血清中IgG型抗A(B)抗体效价的异常率及其临床意义。方法采用微柱凝胶法对夫妇进行ABO及Rh D血型检测,再采用经典抗人球蛋白法对夫妇ABO血型不合的O型血孕妇血清进行IgG型抗A(B)抗体效价检测。结果在4178例O型血孕妇中,IgG型抗A(B)抗体效价≥1∶64者2184例(52.3%),其中1∶64者745例(17.8%)、1∶128者639例(15.3%)、1∶256者438例(10.5%)、1∶512者340例(8.1%)、1∶1024者20例(0.5%)、1∶2048者2例(0.05%)。在2184例IgG型抗A(B)抗体效价异常的孕妇中,妇夫血型为O-A型效价≥1∶64者833例(20.0%)、为O-B型效价≥1∶64者916例(21.9%)、为O-AB型效价≥1∶64者435例(10.4%)。结论孕妇为O型,丈夫为A型、B型及AB型者均有发生新生儿溶血病的可能性,产前对O型血孕妇及时进行IgG型抗A(B)抗体效价检测,有助于预防或降低母婴血型不合所致新生儿溶血病的发生率。

大肠杆菌O157:H7 IntC300 B细胞抗原表位的综合预测

目的预测肠出血型大肠杆菌O157∶H7 IntiminC端300氨基酸片段(IntC300)的B细胞抗原表位。方法采用计算机软件和网络服务器分析IntC300的亲水性、β-转角、柔韧性、表面可及性和抗原指数,判断其B细胞抗原表位。结果B细胞抗原表位可能在20-36、76-88、189-198、262-279和284-296残基或其附近。结论对EHEC O157∶H7 IntC300 B细胞抗原表位的综合预测,为研究诊断性单克隆抗体及多肽疫苗提供了理论工具。

用ELISA法进行AB型体液(斑)与A型、B型混和体液(斑)的血型测定和鉴别

在法医物证检案工作中，经常会遇到ABO型血型的判定，一般通过吸收试验、解离试验、以及混和凝集试验就能够进行分型。但在实际工作中，遇到的检材多数並非单一的体液，而是两种或者两种以上体液的混和斑。特别是强奸案的鉴定，阴道内提取的检材常常是由男性精液和女性阴道分泌物的混合物，要从混和斑中判断各自的血型，目前仍较困难。