一株混合O血清型猪水肿病大肠杆菌的分离与鉴定

从具有典型临床症状和病理剖检变化的病死猪肠系膜淋巴结中分离到的1株革兰阴性细菌,通过菌体形态观察,染色、生化试验、SLT-Ⅱe基因检测、O血清型鉴定、动物试验,其结果证明分离菌为O26、O139、O142混合血清型,产SLT-Ⅱe大肠埃希氏杆菌。SLT-Ⅱe基因序列与GenBank上发表的参考序列(序列号为AY368993)的同源性达100%。用粗提的毒素经腹腔注射小鼠后引起小鼠后肢麻痹、死亡和胃肠水肿。

动物性食品源大肠杆菌O血清型鉴定及其K88菌毛基因检测

本研究对河北省冀东地区农贸市场和超市采集的生猪肉、生鸡蛋和生羊肉等分离得到的20株大肠杆菌进行大肠杆菌血清型鉴定;并检测不同血清型大肠杆菌的K88菌毛基因。采用常规方法进行大肠杆菌的O血清型鉴定,用PCR方法检测K88菌毛基因。分离鉴定的20株大肠杆菌有7种血清型,包括O38、O78、O88、O11、O107、O91、O9,其中O38、O78为优势血清型菌,均占分离菌株的25%(5/20)。在分离的动物性食品源大肠杆菌中有30%(6/20)的菌株K88菌毛基因扩增呈阳性。结果表明,O78、O38为冀东地区动物性食品源大肠杆菌常见血清型,30%(6/20)的菌株K88菌毛基因扩增阳性。

混合O血清型蛋鸡大肠杆菌的分离与鉴定

河南省某鸡场产蛋期的鸡群出现呼吸困难,死亡增多现象;病死鸡剖检可见气囊浑浊、浆膜炎、皮下广泛性出血等。无菌采集肝脏、肺脏等进行鸡胚病毒分离,未分离到病毒。病原菌的分离鉴定,获得1株细菌,分离纯培养、革兰氏染色镜检、PCR鉴定和血清型鉴定,确定为O29和O78混合血清型大肠杆菌。该分离菌对小鼠具有较强的致病性,对阿莫西林、环丙沙星2种药物产生了耐药性,但对头孢曲松、阿奇霉素等7种药物敏感。

四川规模化鸡场鸡致病性E.coli血清型、耐药性和质粒图谱的研究

从四川 1 0个规模化鸡场分离的经生化鉴定、动物回归试验获得 46株鸡致病性E.coli。对 46株鸡致病性 E.coli进行了耐药性、血清型鉴定和质粒 DNA分析的研究。试验结果表明 :鸡致病性大肠杆菌易产生耐药性 ,且多为多重耐药 ;鉴定出 3 6株大肠杆菌的 O血清型共 1 6种 ,占鉴定菌株的 78.3 % ;流行的主要血清型为 O89、O1 41、O1 1 9、O1 2 7和 O1 3 1 ,共 2 2株 ,占定型菌株的 6 1 .6 % ,鸡致病性大肠杆菌血清型多 ,各地血清型种类差异大 ;质粒得率为 1 0 0 % ,来源相同的菌株有相同或相似的质粒图谱和酶切图谱 ,来源不同的菌株质粒图谱一般不同 。

林麝肺源致病性大肠杆菌O因子血清型鉴定及部分耐药基因的PCR检测

为调查林麝肺源致病性大肠杆菌O因子血清型以及相关耐药基因的流行状况,本试验采用玻板凝集反应法进行O因子血清型鉴定;同时用PCR方法检测耐药基因。结果显示:O血清型定型的有16株菌,分别属于9个不同的血清型,其中O78为优势血清型,占定型菌株的43.75%(7/16)。同时,29株菌皆携带多种耐药基因,其中磺胺类耐药基因sul1、sul2、sul3,喹诺酮类耐药基因aac(6')-Ib、qnrB,β-内酰胺酶类耐药基因blaTEM、blaCTX-M,氨基糖苷类耐药基因aac(3)-IIa、ant(3″)-Ia和四环素类耐药基因tet(B)检出率较高,检出率分别为100%、96.55%、96.55%、100%、86.21%、100%、65.52%、100%、96.55%和58.62%。本试验结果对林麝临床科学合理用药有重要指导意义。

小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型特异性单克隆抗体筛选及其应用

目的利用杂交瘤技术筛选出能分泌小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型特异性单克隆抗体的细胞株,用于该型菌株的鉴定。方法采用ELISA方法筛选克隆株,并用玻片凝集法进行单克隆抗体的特异性鉴定。结果筛选到3株能分泌小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌的抗体与经鉴定的18株小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型菌株呈阳性反应,而与其他血清型小肠结肠炎耶尔森菌及常见肠道致病菌无交叉凝集反应;应用于小肠结肠炎耶尔森菌野生株分型鉴定时,能准确鉴定出其中的24株O∶9血清型菌株,与用日本进口分型血清鉴定、PCR毒力基因检测结果相同。结论筛选获得的细胞株产生的单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型鉴定,具有很好的型特异性,避免了过去免疫血清制备中繁琐的抗原交叉吸收试验。

鸭源大肠杆菌O46血清型分离株的主要生物学特性研究

对首次分离出的鸭源致病性大肠杆菌O46血清型分离株(EC1)的主要生物学特性进行研究.结果发现该分离株具有大肠杆菌典型的形态特征、培养特性以及生化特性;腹腔注射5×108 CFU/只EC1对成年昆明小鼠的致死率为4/4;药敏试验结果显示,EC1对先锋Ⅳ、先锋Ⅴ、先锋Ⅵ、阿米卡星、奈替米星、壮观霉素等敏感,对强力霉素、土霉素、四环素、红霉素、阿齐霉素耐药.从上述结果可见,鸭源大肠杆菌O46致病性较强,且对多种抗菌药物有抗性,应引起重视.

O3∶K6血清型副溶血性弧菌三重PCR检测方法的建立

目的建立副溶血性弧菌O3∶K6血清型三重PCR检测方法。方法基于副溶血性弧菌种特异性基因toxR,O3血清群特异性基因vp0209,K6血清型特异性基因vp0230,建立O3∶K6血清型副溶血性弧菌三重PCR检测方法。对该方法的检测特异性和灵敏度进行分析。结果与结论该方法对O3∶K6血清型副溶血性弧菌具有很好的检测特异性,灵敏度可以达到102 CFU/PCR反应体系。

小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型特异性单克隆抗体的制备

目的利用杂交瘤技术制备小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型特异性单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株的分型鉴定。方法用小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株作为抗原,以骨髓杂交瘤细胞融合技术制备小肠结肠炎耶尔森单克隆抗体,用玻片凝集筛选法进行单克隆抗体的特异性鉴定。结果筛选到1株与小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株呈现阳性反应,并与日本的抗血清检测结果相一致,而与被检测的其他血清型小肠结肠炎耶尔森菌和常见肠道致病菌无交叉凝集反应。结论本实验筛选获得的单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株鉴定,具有良好的特异性,避免了免疫血清难以避免的交叉凝集现象。

重庆市部分地区鸭源大肠杆菌的O抗原血清型及耐药性

从重庆市5个区、县的部分规模化鸭场收集以心包炎、肝周炎及腹膜炎为主要病理变化的病死鸭,无菌采取其心血和肝脏后接种,分离出30株细菌,经细菌的形态特性和生化特性分析,鉴定为大肠杆菌.该试验对分离的大肠杆菌进行了O抗原单价血清型鉴定试验及药敏试验.结果表明:30株分离菌中有23株定型分属于11种血清型,其中以O78,O93,O92和O21为优势血清型(共占46.67%).30株分离菌对21种抗生素的耐药率高于50%,其中耐受7种药物以上的有28株,占93.3%,耐受10种药物以上的有23株,占76.6%,表明重庆地区部分养鸭场鸭源大肠杆菌的耐药性严重.

3株O3血清型鳗弧菌灭活疫苗的免疫原性和免疫保护效果

鳗弧菌(Vibrio anguillarum)O3血清型菌株是感染鱼类的重要病原菌,本文研究了3株O3血清型鳗弧菌(SMP1、SMP3和SMP4)灭活疫苗的免疫原性和免疫保护。首先在牙鲆(Paralichthys olivaceus)体内对3株鳗弧菌进行复壮;检测复壮后的菌株毒力,检测的3株鳗弧菌对蓝蔓龙(Trichogaser trichopterus)的半数致死量(LD50)分别为105.1 CFU/ml(SMP1)、104.7 CFU/ml(SMP3)和105.4 CFU/ml(SMP4);制备了3株菌的甲醛灭活疫苗,注射免疫牙鲆,免疫后第7天可检测到牙鲆的血清特异性抗体产生,免疫后第28天的血清特异性抗体效价为1︰1280(SMP1)、1︰640(SMP3)和1︰905(SMP4),提供的免疫保护率(Relative percent survival rate,RPS)为94.4%(SMP1)、100%(SMP3)和73.7%(SMP4)。研究表明,3株致病性O3血清型鳗弧菌菌株具有良好的免疫原性,其中SMP3为最适疫苗候选株。本研究为鳗弧菌O3血清型疫苗的开发应用奠定了基础。

鸡源大肠埃希菌抗“O”血清型鉴定及药敏试验研究

大肠埃希菌耐药性的增加及大肠埃希菌血清型众多,加大了药物防治大肠杆菌引发病症的难度。为了减少耐药菌株的产生及养殖者的经济损失,笔者对2011年4月～2012年7月门诊分离的鸡源大肠埃希菌进行抗"O"血清型鉴定及药敏试验,并与2005年11月～2007年4月门诊病死鸡疑似大肠埃希氏菌病例的相关统计数据进行了对比。

规模化猪场致病性大肠杆菌血清型鉴定

从四川省 1 6个规模化猪场临诊发生典型仔猪黄、白痢猪只的肛试粪样及死亡猪只的心血和肝中分离出致病性大肠杆菌 2 45株 ,用 35种大肠杆菌单价O抗原进行血清型鉴定。 2 45株分离菌有 1 72株能定型 ,分属 30种血清型 ,其中以O6 0、O89、O1 1 9、O1 41、O9、O2 0、O1 37和O1 0 1等 8种血清型为优势血清型 ,占定型菌株的 6 6 86 %。尚有 73株未能定型 ,占分离菌株的 2 9 80 % (73/2 45 )。

河北省南部鸡肝周炎大肠杆菌的分离及血清型鉴定

通过对2003年3月～2008年4月,自河北省邯郸市、邢台市、石家庄市、衡水市、沧州市等发病鸡场呈现典型肝周炎病变的病死鸡肝脏分离的132株致病性大肠杆菌进行了生化特性测定,O抗原血清型鉴定及药敏试验。结果表明132株均符合大肠杆菌生化特征,试验用55种大肠杆菌单因子阳性血清进行O血清型鉴定,确定了103株O血清型,占分离菌株数的78.03%(103/132)。选取O1、O21、O65、O78、O93血清型共15株菌株(每一血清型选取3株不同来源的菌株)做药敏试验,证实多数菌株对丁胺卡那霉素高敏,对头孢曲松中敏,而对磺胺甲硝唑耐受。

从病死鸵鸟中分离鉴定出O35血清型大肠杆菌

从南京两个鸵鸟场死亡鸵鸟的内脏以多株细菌，经生化试验确定自肝脏的两细菌为大肠杆菌，动物试验揭示这两株大肠杆菌对ＳＰＦ鸡和小白鼠有不同程度的致死性，药敏试验结果显示这两株大肠杆菌对常用抗菌素的敏感不同，但对复方磺胺和卡那霉素均高度敏感。经血清型鉴定，这两株大肠杆菌血清型为Ｏ３５。

广东地区5种优势血清型猪大肠杆菌的外膜蛋白型研究

对从广东地区部分猪场分离的大肠杆菌进行血清型鉴定后,选取优势血清型O_9、O_(26)、O_(60)、O_(101)和O_(107)的8个致病性较强的分离株,采用超声波裂解、N-十二烷基肌氨酸钠处理和超速离心技术提取大肠杆菌的外膜蛋白(OMP),利用SDS-PAGE电泳进行OMP分型。结果8个菌株共有3个OMP型(Ⅰ～Ⅲ型),其中O_(26)、O_(101)、O_(107)型的3个分离株的外膜蛋白型由1条带组成,为OMP-Ⅰ型;O_(60)、O_(101)、O_(107)型的4个分离株的外膜蛋白型由2条带组成,为OMP-Ⅱ型;O_9型的1个分离株的外膜蛋白型由3条带组成,为OMP-Ⅲ型。这表明,优势血清型O_9、O_(26)、O_(60)、O_(101)、O_(107)的分离株OMP型不单一;同一血清型的分离株,存在不同OMP型;而不同血清型的分离株却可有相同的OMP型。

规模化养猪场仔猪黄痢病原菌优势血清型检测及其致病性试验

从临沂市规模化养猪场仔猪黄痢病例中分离病原菌、检测其优势血清型,并经动物致病性试验探讨其优势血清型菌株的致病能力,为临床选用疫苗提供血清型依据,并为灭活苗的制备及药敏试验提供菌株。对临沂市不同区域的23个规模化养猪场的112份疑似仔猪黄痢病例进行了细菌分离,对分离到的致病性大肠杆菌进行了生化试验、毒力试验、血清学鉴定,分析出其优势血清型;取三日龄仔猪进行了优势血清型菌株致病性试验。112份病料中分离出了101株致病性大肠杆菌,分离率为90.2%;不同区域猪场流行的血清型有较大差异,在101个分离株中,7株未能定型、4株自凝,其余90株能定O型血清型,这些定型菌株分布在11个血清型中,其中优势血清型为O8,O54,O115,O149,这四种血清型共占定型菌株的56.7%。上述四种优势血清型的发病率均为100%,死亡率分别是100%、75%、100%、100%,致病率和致死率与对照组相比差异显著(P>0.05)。目前临沂市规模化养猪场仔猪黄痢病原菌的O型血清型分布在11个血清型中,其中优势血清型为O8,O54,O115,O149。四种优势血清型的发病率和死亡率均较高。

由O_(128)血清型大肠埃希氏杆菌引起的仔猪白痢

仔猪大肠杆菌病是幼龄仔猪的常见病,其病原一致病性大肠杆菌在临床上的常见血清型主要为O_8,O_(138),O_(139),O_(141)等,其次为O_2,O_(20),O_(78),O_(91),O_(83),O_(115),O_(147),O_(149)等。现将一起由O_(128)血清型大肠杆菌引起的仔猪白痢病病例报告如下。