N-新戊酰,O-异丙醇酯衍生法分析小麦氨基酸含量与碳氮稳定同位素

以2-氨基己二酸为内标,采用异丙醇和新戊酰氯将氨基酸衍生化成N-新戊酰基,O-异丙醇酯(NPP),利用气相色谱-质谱仪分析了小麦籽粒蛋白质氨基酸含量,同时利用气相色谱-燃烧-同位素比值质谱仪分析了氨基酸的碳氮稳定同位素组成。结果表明,N-新戊酰基,O-异丙醇酯(NPP)衍生化法可以得到丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸和酪氨酸的较高的回收率(83.3%～104.9%)和较好的线性关系(相关系数为0.994～1.000);此方法还可以得到丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、天冬氨酸/天冬酰胺、苏氨酸、丝氨酸、蛋氨酸、谷氨酸/谷氨酰胺、苯丙氨酸、赖氨酸和酪氨酸的可靠的碳氮同位素比值。此方法可以为今后作物品质、营养和氨基酸代谢的深入研究提供更加有利的手段。

异丙醇溶剂中O-异丙基-S-十二烷基二硫代甲酸酯的合成工艺

首先采用粉碱、二硫化碳在过量的异丙醇溶剂体系中合成了异丙基黄原酸盐,所得产物不经分离直接加入溴代十二烷合成O-异丙基-S-十二烷基二硫代甲酸酯(DIDTC)。实验考察了异丙醇用量、物料比例、反应时间和温度对产物收率的影响,并且研究了反应过程中溶剂异丙醇的回收循环利用。结果表明,在黄药与溴代十二烷物质的量比为1.05:1,反应温度45℃,溶剂用量为每摩尔溴代十二烷40mL异丙醇,反应时间为4h的较佳条件下,产物DIDTC基于溴代十二烷的收率可达94%。采用异丙醇为溶剂有效解决了溴代十二烷与黄药在水相中的反应效率低问题,而且异丙醇可循环利用,减小了环境污染。

气相色谱-燃烧-同位素比值质谱法分析氨基酸氮稳定同位素并初步评估水生生物体营养级

氨基酸稳定氮同位素(δ^(15)N)分析能准确有效地评估生物体的营养级以及氮在食物链中的流动。本研究优化了氨基酸氮同位素的分析方法:样品在酸性条件下水解后,释放出的蛋白质氨基酸经阳离子交换树脂纯化后,衍生为对应的N-新戊酰基,O-异丙醇(N-pivaloyl-isopropyl,NPP)酯,利用气相色谱-燃烧-同位素比值质谱仪(Gas chromatography-combustion-isotope ratio mass spectrometry,GC-C-IRMS)测定其δ^(15)N。经非极性气相色谱柱DB-5ms分离后,13种氨基酸NPP酯衍生物均可得到良好的基线分离。在样品量不低于20 ng N条件下,GC-C-IRMS方法的精密度优于1‰,测得的δ^(15)N值与EA-IRMS法测得的δ^(15)N值没有明显差异。阳离子树脂纯化前后各氨基酸δ^(15)N值差异低于1‰,表明没有产生明显的同位素分馏。采用本方法成功地估算了阿哈湖生态系统中常见水生生物的营养级,可作为研究氨基酸代谢以及生态系统特征的新方法。