高剂量O-糖基化修饰抑制剂Benzyl-α-GalNAc诱导体外培养肝细胞脂肪变

目的初步探讨蛋白质O-糖基化抑制剂Benzyl-α-GalNAc对肝细胞的影响。方法取雌性Balb／c小鼠（8～10周）20只随机分为正常组（n=10），Benzyl—d—GalNAc药物组（n=10），给Benzyl-α-GalNAc药物（5mg／kg，1次／d）灌胃。第2周末取小鼠血清及肝脏进行血清生化指标AIJT及AlJP测定及肝组织HE染色。培养HepG2细胞．Benzyl-α-GalNAc分别以0．5、1及5mg／ml与HepG2细胞共孵育。24h后进行油红O染液染色。5mg／ml药物组完全未贴壁，去除处理因素，继续培养12h观察细胞。Benzyl-α-Gal—NAc以3mg／ml处理HepG2细胞12h及24h观察细胞贴壁情况。培养L02细胞，Benzyl-α-GalNAc分别以0．1及0．5mg／ml与L02细胞共孵育。24h后进行油红O染液染色。结果药物组与正常对照组比较，肝组织切片显示轻微脂肪变。油红O染色显示药物处理组HepG2及L02细胞内的脂滴积聚。高浓度组细胞完全没有贴壁，24h后更换无药物培养基，去除处理因素12h后，可见HepG2开始贴壁生长。结论高浓度O-糖基化抑制剂Benzyl-α-GalNAc抑制体外肝细胞的黏附，并诱导轻微肝细胞脂肪变。

提高O-糖基化水平对CHO-K1细胞突变型tau蛋白过度磷酸化的影响

目的观察提高O-糖基化水平对CHO-K1细胞中突变型R406W tau蛋白过度磷酸化及细胞轴突转运功能的影响。方法分别将突变型PSG-5 R406W tau质粒和PSG-5空载体质粒转染CHO-K1细胞。将成功转染PSG-5 R406W tau质粒的CHO-K1细胞分为实验组与对照组,分别加入20μM的NAG-Ae及等量的DMEM/F12培养基,转染PSG-5空载体的细胞为空载体组,培养12 h。用Western blot法检测tau蛋白表达;免疫印迹法检测实验组与对照组细胞tau蛋白的糖基化及磷酸化水平;荧光漂白后恢复技术(FRAP)检测三组细胞漂白后荧光恢复的速度以表示细胞轴突转运速度。结果转染空载体的细胞未见tau蛋白表达,转染PSG-5 tau R406W的细胞tau蛋白呈高表达。实验组与对照组细胞O-糖基化水平分别为1.30±0.09、0.59±0.04(P<0.05)。实验组tauThr205、tauS-er396、tauThr212位点磷酸化水平分别为0.44±0.21、0.98±0.01、0.44±0.19,对照组分别为1.11±0.38、1.34±0.22、0.79±0.05,两组相比,P均<0.05。10、40、70 s时实验组荧光强度分别为262.00±12.50、300.00±10.00、461.66±10.40,对照组分别58.33±10.40、131.66±11.54、208.33±14.43,空载体组分别为514.00±10.14、888.33±11.06、1188.00±10.60,三组相比,P均<0.05。结论提高CHO-K1细胞的O-糖基化水平有助于减轻突变型tau蛋白的过度磷酸化水平,改善细胞轴突转运功能。

O-连接N-乙酰葡糖胺转移酶抑制剂的筛选与活性分析

利用药物发现软件Discovery Studio 4.5(DS),以基于结构的虚拟筛选天然产物化合物库的方法,获得O-连接N-乙酰葡糖胺转移酶(OGT)天然产物抑制剂阿曼托双黄酮(AF).AF能够在体外抑制OGT的酶活.分子动力学(MD)模拟实验结果表明,AF能够稳定结合在OGT蛋白的底物结合口袋中,并与口袋附近多个氨基酸形成氢键.细胞内活性检测结果表明,AF能够有效抑制蛋白质的O-GlcNAc修饰,具有良好的OGT抑制活性.

新型内源性凝血途径抑制剂——岩藻糖基化硫酸软骨素九糖的合成

血栓性疾病是全球人口死亡与致残的首要原因,抗凝血药物的研发具有重要的临床意义.目前临床使用的抗凝血药物均存在较大的出血风险.由于内源性凝血途径与病理性血栓形成密切相关而非止血功能所必须,其选择性抑制剂的研发已成为新型抗凝药物研究热点.北京大学药学院天然药物及仿生药物国家重点实验室李中军课题组与中国科学院昆明植物研究所赵金华课题组合作,在酶解软骨素的基础上,通过保护基转换和糖基化修饰,最终经过12步反应分别以5.0%和3.0%的收率合成了海参来源的天然多糖FuCS片段六糖与九糖.抗凝血活性测试表明,该九糖具有与低分子量肝素相当的体外抗凝活性,并且能够选择性作用于内源性凝血途径的末端复合物FXase,IC50可达12.9nmol·L^(-1).此为FuCS天然九糖的首次合成报道,有望发展成为低出血倾向的新型抗凝剂.

O-GlcNAc转移酶及其抑制剂

O-GlcNAc转移酶(OGT)是一种哺乳动物必需的酶,其将单个的N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)以β-构型的O-糖苷键连接到蛋白质的丝氨酸和苏氨酸(Ser/Thr)羟基上.O-GlcNAc糖基化在细胞质和细胞核中广泛地存在,这种蛋白质的翻译后修饰对细胞内的许多信号通路具有调节作用,并与多种重大疾病的发生和发展密切相关.本文主要对OGT的结构、催化机制、活性测定方法和抑制剂的研究现状进行综述,并对研究前景进行展望.