O1群小川型霍乱弧菌单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗O1群小川型霍乱弧菌(VibriocholeraeO1serotypeOgawa)特异性单克隆抗体(McAb),为霍乱的早期快速诊断提供有力的抗体工具。方法以灭活的O1群小川型霍乱弧菌免疫Balbc小鼠,通过杂交瘤技术制备针对O1群小川型霍乱弧菌的McAb,以间接ELISA法对所需的杂交瘤细胞株进行筛选,分析其亚类,检测其效价及相对亲和力,以间接ELISA和Westernblot鉴定McAb特异性,并进行McAb结合表位分析。结果融合了602株能分泌抗O1群小川型霍乱弧菌McAb的杂交瘤细胞株,最后得到5株能稳定分泌特异性的针对该McAb的细胞株,其抗体亚类分别为3株IgG1,1株IgG2b,1株IgG3;腹水效价均达1×10-6;亲和常数在1×108～1×109之间。间接ELISA法及Westernblot证实所获的McAb可与O1群小川型霍乱弧菌发生特异性反应。ELISA相加实验结果显示除有2株McAb识别相同的抗原表位外,其余均识别不同的抗原表位。结论获得霍乱弧菌O1群小川型特异性McAb,为O1群小川型霍乱早期快速诊断和发病机理的研究提供基础。

O1群小川型霍乱弧菌单克隆抗体识别表位模拟肽的筛选鉴定

目的:以纯化的有高度特异性的IXiao3G6单抗为靶分子,对噬菌体随机7肽库进行淘筛,以期筛选到与O1群小川型霍乱弧菌单抗有高亲和力的模拟肽,为基于表位的霍乱弧菌模拟多肽疫苗的研制奠定基础。方法:运用噬菌体随机7肽库技术,以纯化的IXiao3G6单抗为靶蛋白,进行噬菌体随机肽库3轮筛选,以双抗夹心ELISA和竞争抑制实验分析获得的噬菌体短肽与筛选配基的结合能力及特异性,并进行阳性克隆序列测定和同源性分析。结果:3轮筛选后,阳性噬菌体得到有效富集,夹心ELISA检测随机挑取的25个噬菌体克隆,有22个噬菌体克隆为阳性,测序表明其中20个阳性克隆的氨基酸序列完全一致,均为APAIPAS。对该序列同源性分析,未发现有相同的已知序列。竞争抑制实验表明,O1群小川型霍乱弧菌脂多糖(lipopo-lysaccharide,LPS)能很好地抑制阳性克隆与IXiao3G6McAb的结合,抑制程度随LPS浓度的升高而增加,而对照细菌的LPS则不具有相应的抑制作用,进一步提示噬菌体克隆展示肽模拟了O1群小川型霍乱弧菌LPS抗原表位。结论:筛选到模拟O1群小川型霍乱弧菌LPS的抗原表位的模拟肽,为基于表位的霍乱弧菌模拟多肽疫苗的开发与设计提供了实验依据。

两株O1群小川型霍乱弧菌的分离和鉴定

１９９８年８～９月贵州都匀地区建国以来首次发生霍乱流行。９月１５日，市食品卫生监督检验所收到“市霍乱防治指挥部”送来的５例可疑菌株，现将实验室鉴定结果报告如下。材料与方法（１）菌株来源：５支疑似霍乱碱性胨水棉拭（以下简称待检菌）均来自腹泻病人。（２）...

近红外免疫层析法快速检测O1群小川型霍乱弧菌方法的建立与应用

目的：建立一种快速检测O1群小川型霍乱弧菌的近红外免疫层析方法。方法：利用近红外免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测O1群小川型霍乱弧菌,制备靶向于O1群小川型霍乱弧菌的免疫层析试纸条。结果：整个检测方法在45 min内即可完成,检测O1群小川型霍乱弧菌的最低检出浓度为1×10~2 cfu/mL。特异性实验表明,该试纸条与O1群小川型霍乱弧菌样品发生特异性反应,与沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、单增李斯特菌、副溶血弧菌无交叉反应。与常用的胶体金方法相比,近红外免疫层析法对靶标菌的灵敏度提高了100倍。结论：新研制的O1群小川型霍乱弧菌试纸条具有特异性强、灵敏度高的特点,实验简单、方便,满足口岸现场快速检测的需要,提高检验检疫效率。

非O1群非O139群霍乱弧菌血流感染的诊疗及防控2例报告

目的对2例血流感染患者血培养标本分离的弧菌属进行鉴定和药敏试验,分析非O1群非O139群霍乱弧菌(NOVC)的微生物学特性,为霍乱弧菌感染的诊断和防控提供依据。方法通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)、API细菌生化反应鉴定卡、VITEK 2 Compact鉴定仪和16S rRNA基因测序鉴定2株弧菌分离株,并进行血清学分型、毒力基因分子检测和耐药表型检测。结果2株菌株均鉴定为霍乱弧菌,血清学试验确定为NOVC,毒力基因ctx AB检测阴性;药敏试验显示1株菌对氨苄西林、阿奇霉素、多西环素和氯霉素敏感,对四环素和复方磺胺甲唑耐药,另一菌株对所有检测抗菌药物均敏感。结论NOVC所致的血流感染在中国少有报道,完善血培养标本分离霍乱弧菌的准确鉴定、分型和耐药表型检测,对诊断、治疗和防控霍乱弧菌感染具有重要价值。

一起由非产毒O1群小川型霍乱弧菌引起的感染性腹泻聚集性疫情调查分析

目的为查明一起非产毒O1群小川型霍乱弧菌引起的感染性腹泻疫情传染来源和传播方式,控制疫情蔓延,了解其流行病学特征和临床特征,为今后疫情防控提供依据。方法开展病例搜索,对所有病例及密切接触者开展详细个案调查,采集可疑食物标本开展溯源。结果本次疫情共发现4例确诊病例和1例带菌者,分布于2户家庭,罹患率为16. 67%和57. 14%;病例表现为腹泻、稀水样便;可疑饮食史均为明虾,明虾在同一流动摊贩购买,该摊贩明虾标本检出非产毒O1群小川型霍乱弧菌。结论本次疫情为流动摊贩所售明虾受到非产毒O1群小川型霍乱弧菌污染所致,明虾为本次疫情传染源。

非O_1非O_(139)型霍乱弧菌致败血症1例

霍乱弧菌（Vibrio cholerae）是一类致病性革兰染色阴性菌，根据O抗原不同，可分为多种血清型。不与O1群及O139群霍乱弧菌诊断血清凝集但生化反应符合霍乱弧菌特性的，

肝硬化患者非O1非O139型霍乱弧菌败血症

目的分析非O1非O139型霍乱弧菌感染的肝硬化败血症患者的临床和实验室特点。方法回顾调查病人的临床基本情况、原发病、实验室结果、治疗和预后;BacT/Alert全自动血培养微生物检测仪培养病人全血标本,用VITEK仪器鉴定细菌。药敏试验根据CLSI(2005)规定,K-B药敏纸片测定法进行。结果3例患者均为肝硬化病人;感染发生在夏季;经左氧氟沙星、加替沙星或联用头孢曲松治疗后痊愈。结论非O1非O139型霍乱弧菌败血症推荐使用头孢三代或氟喹诺酮类抗生素治疗。

非O1、非O139型霍乱弧菌中首次发现PER-1超广谱β内酰胺酶

目的明确非O1、非O139型霍乱弧菌中ESBL的基因型及其遗传背景,以探讨该耐药基因传播的机制。方法通过表型确证试验确定细菌是否产生ESBL,通过接合试验了解ESBL是否由质粒介导,通过PCR扩增和序列分析确定ESBL的基因型,通过反向PCR和序列分析了解ESBL基因两侧的结构。结果 ESBL表型确证试验确认菌株RJ354为产ESBL菌株,接合试验证实ESBL基因位于可接合质粒上,PCR、反向PCR扩增和序列分析确定其基因型为blaPER-1,该基因上游序列为ORF513,下游为gst-like基因。结论本研究国际上首次在从非O1、非O139型霍乱弧菌中检出了PER-1型ESBL,而且首次发现该酶基因与一种新的基因元件ISCR1相连,后者可能介导前者的水平转移。

特异性O1群稻叶型霍乱弧菌单克隆抗体的制备、筛选及识别抗原表位的分析

目的制备并筛选出高特异性高活性的抗O1群稻叶型霍乱弧菌(Vibrio cholerae O1 Serotype Inaba)单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),为霍乱的预防诊断提供有力的抗体工具。方法应用杂交瘤技术,通过灭活的O1群稻叶型霍乱弧菌免疫的BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合制备特异性McAb,以间接ELISA法对所需的杂交瘤细胞株进行了特异性及排除性筛选,对筛选出的特异性McAb进行了包括亚型鉴定,效价、亲和常数的测定以及特异性的鉴定与分析,并通过单克隆抗体的位点相加实验、与O1群稻叶型霍乱弧菌脂多糖(LPS)的间接ELISA和Western blot实验对McAb识别的抗原表位进行了初步分析。结果融合了386株能分泌抗O1群稻叶型霍乱弧菌McAb的杂交瘤细胞株,通过用O1群小川型、O139霍乱弧菌及9种非霍乱弧菌的细菌进行的筛选,最后得到4株能稳定分泌特异性的针对该McAb的细胞株,其分泌的抗体亚类分别为2株IgG1,1株IgG2a,1株IgG2b;腹水效价均达10-6;亲和常数达108以上。间接ELISA法及Western blot证实所获的McAb可与O1群稻叶型霍乱弧菌发生特异性反应。ELISA相加实验结果显示4株McAb识别不同的抗原表位,与LPS的反应表明其中2株针对O1群稻叶型霍乱弧菌脂多糖,2株针对非脂多糖抗原位点。结论获得霍乱弧菌O1群稻叶型特异性McAb,初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。

广西130株非O1群霍乱弧菌血清学分型及噬菌体—生物分型研究

目的将噬菌体—生物分型方法应用到非O1群霍乱弧菌的分型 ,以掌握广西地区非O1群霍乱弧菌血清型别的分布 ,并对此分型方法进行探讨。方法收集广西部分地区130株非O1群霍乱弧菌进行血清学分型和噬菌体—生物分型 ,并用多聚酶链反应 (PCR)进行霍乱肠毒素检测。结果在130株菌株中有90株可以分型 ,占69.23 % ,分布于34个血清型 ,腹泻病人菌株可分为14个血清型 ,其中以O2为优势血清型 ,外环境菌株分布于31个血清型 ,以O21、O32为优势血清型。107株非O1群霍乱弧菌共分为14个噬菌体型 ,4个生物型 ,用PCR方法检测其中17株非O1群霍乱弧菌肠毒素 (CT)为阴性。结论腹泻病人与外环境菌株的优势血清型别不同 ,而噬菌体—生物分型结果基本一致 ,肠毒素检测为阴性 ,因此 ,不具备引起流行的能力 ,为非流行株。

三峡库区长江水非O_1群霍乱弧菌L型的研究

为了解三峡库区长江水非Ｏ_１群霍乱弧菌Ｌ型的流行病学状况，１９９４～１９９８年作者在三峡库区选三地取长江水同时进行非 Ｏ_１群霍乱弧菌与非Ｏ_１群霍乱弧菌Ｌ 型的检测（培养温度与采样时水温一致）．结果发现非 Ｏ_１群霍乱弧菌Ｌ型冬天阳性检出率较高，夏天阳性检山率较低（Ｐ＜０．０１）。但各月份总阳性率无明显差异（Ｐ＞０．１）。非Ｏ_１群霍乱弧菌Ｌ型返祖记回复后证实为非Ｏ_１群霍乱弧菌。表明非Ｏ_１群霍乱弧菌Ｌ型为非Ｏ_１群霍乱弧菌越冬的一种重要形式．在卫生监督中，应加强对非Ｏ_１群霍乱弧菌Ｌ 型的监测．

7株产色素非O_1群霍乱弧菌的生物学性状及毒素原性检测

目的 了解佛山市产色素非O1,群霍乱弧菌的生物学性状、血清学分型和致病性。方法 1998-2000年在珠江水系佛山段沿岸的25个采水点每月采样1次,采用水样吸附沉淀集菌法分离非O1,群霍乱弧菌。使用PCR检测待测菌是否带有霍乱肠毒素(CT)基因;用ELISA法检测耐热肠毒素(ST)和不耐热肠毒素(LT)。结果 3年共检测1644份水样,共分离到478株非O1群霍乱弧菌,其中分离到7株分属7个不同血清型的产褐色色素的非O1群霍乱弧菌,并发现其中3株带有毒素。结论 首次在佛山市外环境水体中分离出产色素O1群霍乱弧菌,通过检测发现部分菌株具有一定的致病性,提示在感染性腹泻和霍乱的监测工作中,应注意对产色素非O1群霍乱弧菌的观察和研究。

霍乱弧菌O1群和O139群SXT基因扩增及其酶切分型

霍乱是一种烈性传染病，其致病菌为霍乱弧菌。根据菌体（O）抗原的不同，霍乱弧菌已被分为200个以上的O血清群，其中只有O1和O139群能引起霍乱大流行，其他群主要引起散发，因此，关于霍乱弧菌的检测包括O1群和O139群。霍乱弧菌的快速检测对控制霍乱流行及治疗有重要的意义。