白花丹素介导sirt1-FOXO1通路对糖尿病肾病大鼠氧化应激损伤的影响

目的探究白花丹素通过沉默信息调节因子2相关酶(sirt)1-叉头框蛋白(FOX)O1通路对糖尿病肾病(DN)大鼠氧化应激损伤的影响。方法120只SD大鼠随机分为对照组、DN组、白花丹素低剂量组、白花丹素高剂量组、EX-527组(sirt1抑制剂,5 mg/kg)、白花丹素高剂量+EX-527组,每组20只。检测大鼠24 h尿蛋白、空腹血糖(FBG)、血肌酐(SCr)、血β2微球蛋白(β2-MG)及肾组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;测定大鼠左肾指数;过碘酸雪夫(PAS)染色观测肾脏病理变化;TUNEL法检测肾组织细胞凋亡;Western印迹法检测sirt1-FOXO1通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,DN组24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6水平均显著升高,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1蛋白均显著降低(P<0.05)。与DN组相比,白花丹素低、高剂量组24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6水平均显著降低,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1蛋白显著升高(P<0.05);EX-527组24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6水平均显著升高,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1蛋白均显著降低(P<0.05);EX-527可部分削弱白花丹素高剂量对DN大鼠氧化应激损伤的缓解作用。结论白花丹素可能通过激活sirt1-FOXO1通路,缓解DN大鼠氧化应激损伤。

黄芪多糖调控Sirt1/FoxO1通路抑制多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞自噬的研究

目的探究黄芪多糖(APS)调控沉默信息调节因子1/叉头状转录因子O1(Sirt1/FoxO1)通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠颗粒细胞自噬的影响。方法大鼠中分离卵巢颗粒细胞并经促卵泡刺激素受体(FSHR)免疫荧光鉴定,且CCK8检测APS对卵巢颗粒细胞增殖的影响。10-5mol/L丙酸睾丸酮、10μmol/L C2-神经酰胺作用大鼠卵巢颗粒细胞24 h诱导PCOS大鼠颗粒细胞自噬模型,CCK8检测细胞增殖情况;透射电镜观察自噬体情况;免疫印迹法检测细胞中Sirt1、Fox O1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达情况。结果免疫荧光检测显示,FSHR蛋白在大鼠卵巢颗粒细胞中的平均阳性表达量93.18%>90%,可进行接下来实验。0、100、200、400μg/mL APS处理正常卵巢颗粒细胞,在贴壁0、24 h比较,细胞OD450差异均无统计学意义(P>0.05)。与正常组相比,模型组细胞核附近出现大量自噬小体,双层、单层膜包裹胞质形成封闭、圆形结构,部分自噬小体内膜溶解,自噬小体周围可见单层膜结构包裹着一些被降解的胞浆、类似自噬小体结构;100μg/mL APS组与模型组细胞结构类似,随着APS剂量的升高,自噬小体数量减少,在400μg/m L APS组时细胞正常。正常组、模型组、100、200、400μg/mL APS组在细胞贴壁0 h时,细胞OD450差异无统计学意义(P>0.05)。细胞贴壁24 h,与正常组相比,模型组细胞OD450降低(P<0.05),细胞中Sirt1、Fox O1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平升高(P<0.05);与模型组相比,100、200、400μg/mL APS组细胞OD450升高(P<0.05),细胞中Sirt1、Fox O1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平降低(P<0.05)。结论APS可以抑制PCOS大鼠颗粒细胞自噬,可能是通过抑制自噬通路Sirt1/FoxO1实现的。

川芎嗪对脂多糖诱导内皮细胞凋亡及Sirt1/FoxO1通路的影响

目的研究川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对脂多糖(LPS)诱导内皮细胞凋亡及沉默信息调节因子1/叉头转录因子O1(SIRT1/Fox O1)通路的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)并分为对照组、LPS组和TMP组。对照组用不含药物的DMEM处理,LPS组用含有10μg/ml LPS的DMEM处理,TMP组用含有含有10μg/ml LPS及不同浓度TMP(10-10,10-12,10-14mol/L)的DMEM处理,检测细胞活力、凋亡率、凋亡基因及Sirt1/Fox O1通路分子的表达。结果与对照组比较,LPS组HUVECs的细胞活力及Bcl-2、乙酰化-Fox O1的蛋白表达明显降低,凋亡率及Bax、Caspase-9、Caspase-3、Sirt1的蛋白表达量明显增加(P<0.05);与LPS组比较,10-10,10-12,10-14mol/L TMP组的细胞活力明显增加、凋亡率明显降低(P<0.05),且TMP浓度越高,细胞活力的增加及凋亡率的降低越明显(P<0.05);与LPS组比较,10-10mol/L TMP组的Bax、Caspase-9、Caspase-3、Sirt1的蛋白表达量明显增加,Bcl-2、乙酰化-Fox O1的蛋白表达量明显减少(P<0.05),Fox O1的蛋白表达量无明显变化(P>0.05)。结论TMP对LPS诱导内皮细胞凋亡具有抑制作用,且该作用可能与Sirt1/Fox O1通路的抑制有关。

电针通过SIRT1-FOXO1通路激活自噬减轻神经病理性疼痛的机制

目的探讨电针通过沉默信息调节因子(SIRT1)1-叉头状转录因子(FOX)O1通路激活自噬减轻神经病理性疼痛(NP)的机制。方法实验分为假手术组、模型组、电针组、电针+抑制剂组,每组12只。除假手术组外,其余各组建立坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)所致NP大鼠模型,造模第7天电针组选用“环跳”“阳陵泉”穴电针针刺;电针+抑制剂组在电针组基础上分别在第7天、第10天、第14天脊髓鞘内注射SIRT1抑制剂EX-527;假手术组和模型组鞘内注射等体积二甲基亚砜(DMSO)。造模前、造模后给药前、给药后测定机械缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(PWTL);免疫荧光检测脊髓SIRT1蛋白表达情况;透射电镜下观察脊髓超微结构;Western印迹检测脊髓中微管相关蛋白1轻链(LC)3、SIRT1、FOXO1蛋白水平。结果造模前,各组MWT、PWTL差异无统计学意义(P>0.05)。造模后给药前,与假手术组相比,模型组、电针组、电针+抑制剂组MWT、PWTL明显降低(P<0.05)。给药后,模型组出现线粒体肿胀破裂现象,且与溶酶体融合,未发现明显的自噬小体;电针组线粒体结构基本恢复,自噬小体数量多,双膜包裹里可见少量的内质网碎片;电针+抑制剂组自噬小体数量较电针组明显减少,自噬小体部分出现单膜结构。与假手术组相比,模型组MWT、PWTL、脊髓中SIRT1蛋白免疫荧光强度和蛋白水平、FOXO1、LC3Ⅱ蛋白水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显降低(P<0.05),LC3Ⅰ蛋白水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,电针组MWT、PWTL、脊髓中SIRT1蛋白免疫荧光强度和蛋白水平、FOXO1、LC3Ⅱ蛋白水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显升高(P<0.05),LC3Ⅰ蛋白水平明显降低(P<0.05);与电针组相比,电针+抑制剂组MWT、PWTL、脊髓中SIRT1蛋白免疫荧光强度和蛋白水平、FOXO1、LC3Ⅱ蛋白水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显降低(P<0.05),LC3Ⅰ蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论电针通过激活SIRT1-FOXO1通路激活自噬减轻NP,实现对NP大鼠的保护。

丹芪益肾汤含药血清调控SIRT1/FoxO1通路对高糖诱导的肾系膜细胞氧化应激损伤的影响

目的:探讨丹芪益肾汤含药血清调控沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头盒蛋白O1(FoxO1)通路对高糖诱导的肾系膜细胞氧化应激损伤的影响。方法:制备丹芪益肾汤含药血清,体外培养人肾系膜细胞,将其分成6组:正常组(加入10%正常血清)、高糖组(加入30mmol/L葡萄糖和10%正常血清)、低、中、高剂量丹芪益肾汤含药血清组(分别加入30mmol/L葡萄糖和10%低、中、高剂量丹芪益肾汤含药血清)、高剂量丹芪益肾汤含药血清+EX527组(分别加入30mmol/L葡萄糖、10%高剂量丹芪益肾汤含药血清和100nmol/L SIRT1抑制剂EX527)。MTT法检测各组细胞活性;流式细胞仪测定细胞凋亡率;ELISA法检测细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;Western blot检测细胞中促凋亡蛋白caspase-3、caspase-9、Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2以及SIRT1/FoxO1通路蛋白表达水平。结果:与正常组比较,高糖组人肾系膜细胞活性、Bcl-2、SIRT1蛋白表达水平、SOD、GSH-Px含量显著降低,凋亡率和caspase-3、caspase-9、Bax、FoxO1表达水平、MDA、ROS含量显著升高(P<0.05)。与高糖组相比,低、中、高剂量丹芪益肾汤含药血清组人肾系膜细胞活性和Bcl-2、SIRT1蛋白表达水平、SOD、GSH-Px含量明显升高,细胞凋亡率和caspase-3、caspase-9、Bax、FoxO1蛋白表达水平、MDA、ROS含量明显降低(P<0.05),且均表现为剂量依赖性。在高剂量丹芪益肾汤含药血清组中加入SIRT1抑制剂EX527后,细胞活性、Bcl-2、SIRT1蛋白表达水平及SOD、GSH-Px含量明显降低,凋亡率、caspase-3、caspase-9、Bax、FoxO1蛋白表达水平以及MDA、ROS含量显著上升(P<0.05)。结论:丹芪益肾汤含药血清可通过激活SIRT1/FoxO1通路,减缓高糖诱导的肾系膜细胞的氧化应激损伤。

阿托伐他汀抑制PI3K/AKT/FoxO1通路及高糖诱导的足细胞增殖、凋亡及氧化应激损伤

目的 基于磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/转录因子叉头框转录因子O亚族1(PI3K/AKT/FoxO1)通路研究阿托伐他汀对高糖诱导的足细胞增殖、凋亡、迁移、炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-6]及氧化因子超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平的影响。方法 体外培养人肾小球足细胞HGPC,分为对照组、高糖组、阿托伐他汀组、PI3K/AKT/FoxO1信号通路抑制剂组、阿托伐他汀+抑制剂组及阿托伐他汀+PI3K/AKT/FoxO1信号通路激活剂组。分别测定细胞增殖、凋亡、迁移能力、炎症因子(TNF-α、IL-6)水平、氧化因子(SOD、MDA)水平及PI3K/AKT/FoxO1信号通路相关蛋白表达水平。结果 10μmol/L阿托伐他汀为干预细胞活力的最佳浓度。高糖组细胞增殖率、SOD水平降低,凋亡率、迁移率、TNF-α、IL-6、MDA水平、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-FoxO1/FoxO1比值升高;阿托伐他汀组和抑制剂组细胞增殖率、SOD水平升高,凋亡率、迁移率、TNF-α、IL-6、MDA水平、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-FoxO1/FoxO1比值降低;阿托伐他汀+抑制剂组细胞上述指标趋势进一步加大,而阿托伐他汀+激活剂组趋势与之相反。结论 阿托伐他汀可通过抑制PI3K/AKT/FoxO1通路促进高糖诱导的足细胞增殖,抑制细胞凋亡、迁移、炎症及氧化应激损伤。

牡荆素调控Sirt1/FoxO1通路介导的铁死亡对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜损伤的保护作用

目的探究牡荆素对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜损伤的保护作用及其调控机制。方法将SD大鼠随机分为对照组、模型组、牡荆素(3、6、12 mg/kg),及牡荆素(12 mg/kg)+EX527(5 mg/kg)组,每组各10只。除对照组外,其余各组大鼠均采用卵清白蛋白诱导建立变应性鼻炎大鼠模型,模型构建成功后,各组大鼠ip相应剂量药物,对照组和模型组大鼠ip等量的生理盐水,1次/d,连续14 d。末次给药结束后30 min,记录各组大鼠行为学评分,观察鼻黏膜组织病理形态学变化;检测鼻黏膜组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、丙二醛(MDA)、活性氧气簇(ROS)、铁离子(Fe^(2+))水平,铁死亡相关蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)以及沉默信息调节因子1(Sirt1)、叉头框蛋白O1(FoxO1)、p-FoxO1、Ac-FoxO1蛋白表达。结果与模型组相比,牡荆素各剂量组大鼠行为学评分均显著降低,鼻黏膜损伤显著改善(P<0.05);大鼠鼻黏膜组织匀浆SOD、GSH活性显著升高,MDA、ROS、Fe^(2+)含量均显著降低(P<0.05);大鼠鼻黏膜组织SLC7A11、GPX4、Sirt1、FoxO1蛋白表达显著升高,p-FoxO1、Ac-FoxO1、ACSL4蛋白表达显著降低(P<0.05),且呈剂量相关性。结论牡荆素能够改善变应性鼻炎大鼠鼻黏膜损伤,其机制与激活鼻黏膜组织Sirt1/FoxO1通路,抑制细胞铁死亡有关。

沉默信息调节因子1/叉头框蛋白O1信号通路调控铁死亡对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞的影响实验研究

目的:探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框蛋白O1(FOXO1)信号通路调控铁死亡对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞的影响。方法:将30只雌性SD大鼠分为对照组(皮下注射豆油)和PCOS组(皮下注射脱氢表雄酮)。将对照组和PCOS组大鼠分离得到的卵巢颗粒细胞分为对照组、PCOS组,取一半PCOS组卵巢颗粒细胞为过表达SIRT1组(20μmol/L SIRT1激活剂SRT 2183干预)。RT-qPCR及Western blot检测细胞中SIRT1、FOXO1、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA及蛋白表达。Hoechst染色检测细胞活性氧(ROS)及线粒体活性氧(mtROS)水平。ELISA检测细胞中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、Fe^(2+)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)水平。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与对照组比较,PCOS组卵巢颗粒细胞中SIRT1、FOXO1、SLC7A11、GPX4、Bcl-2 mRNA及蛋白表达和GSH、FSH水平降低,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达和MDA、ROS、mtROS、Fe^(2+)、T、LH水平升高,卵巢颗粒细胞凋亡率增加(均P<0.05)。与PCOS组比较,过表达SIRT1组卵巢颗粒细胞中SIRT1、FOXO1、SLC7A11、GPX4、Bcl-2 mRNA及蛋白表达和GSH、FSH水平升高,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达和MDA、ROS、mtROS、Fe^(2+)、T、LH水平降低,卵巢颗粒细胞凋亡率减少(均P<0.05)。结论:SIRT1/FOXO1通路在PCOS卵巢颗粒细胞中下调,激活该通路可能通过下调铁死亡抑制PCOS卵巢颗粒细胞凋亡。

基于sirt1/FOXO1通路研究双氢青蒿素对CCl_(4)诱导大鼠急性肝损伤的保护作用

目的 基于沉默信息调节因子1(sirt1)/叉头框转录因子O1(FOXO1)通路研究双氢青蒿素对四氯化碳(CCl_(4))诱导大鼠急性肝损伤的保护作用的机制。方法 SD大鼠分为对照组、模型组、双氢青蒿素组、EX527组、双氢青蒿素+EX527组,每组12只,全自动生化分析仪测定大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量;HE染色检测各组大鼠肝组织病理学变化,并进行病理评分;采用超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)检测试剂盒检测肝组织中SOD、MDA水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;蛋白免疫印迹法检测sirt1/FOXO1通路相关蛋白表达。结果 与模型组相比,双氢青蒿素组SOD含量、sirt1蛋白表达升高,ALT、AST、TNF-α及IL-6水平、MDA含量、acely-FOXO1/FOXO1降低,差异有统计学意义(P<0.05);EX527组SOD含量、sirt1蛋白表达降低,ALT、AST、TNF-α及IL-6水平、MDA含量、acely-FOXO1/FOXO1升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与双氢青蒿素组相比,双氢青蒿素+EX527组SOD含量、sirt1蛋白表达降低,ALT、AST、TNF-α及IL-6水平、MDA含量、acely-FOXO1/FOXO1升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与EX527组比较,双氢青蒿素+EX527组SOD含量、sirt1蛋白表达升高,ALT、AST、TNF-α及IL-6水平、MDA含量、acely-FOXO1/FOXO1降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 双氢青蒿素可能通过激活sirt1/FOXO1通路,抑制氧化应激及炎症反应,进而减轻CCl_(4)诱导的大鼠急性肝损伤。

丙泊酚调控Sirt1/FoxO1通路对氯化钴诱导的心肌损伤的保护作用

【目的】研究丙泊酚(propofol,Pro)对氯化钴(Co Cl)诱导的心肌损伤产生的氧化应激的保护作用及相关分子机制。2【方法】体外培养H9c2大鼠心肌细胞,采用CoCl2诱导建立H9c2大鼠心肌细胞低氧损伤模型,分为CoCl2组(CoCl2,500 mmol/L)、阳性药物乙酰半胱氨酸组(NAC组)、Pro低(Pro-L,12.5 mg/ml)、高(Pro-H,50.0 mg/ml)剂量组,另设正常对照组(NC组)。MTT法检测各组H9c2大鼠心肌细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡,生物化学法测定H9c2大鼠心肌细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malonalde-hyde,MDA)及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平,免疫印迹法检测H9c2大鼠心肌细胞沉默信息调节因子2相关酶1/叉头框蛋白O1(silencing information regulator 2 related enzyme 1/fork head box O1,Sirt1/Fox O1)蛋白表达水平。【结果】与NC组比较,CoCl2组H9c2大鼠心肌细胞活力、SOD、GSH-Px水平、Sirt1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),凋亡率、MDA水平、Fox O1蛋白表达水平显著增加(P<0.05);与CoCl2组比较,Pro-L组、Pro-H组H9c2大鼠心肌细胞活力、SOD、GSH-Px水平、Sirt1蛋白表达水平依次增加(P<0.05),凋亡率、MDA水平、Fox O1蛋白表达水平依次降低(P<0.05);Pro-L组与NAC组各指标水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】Pro可能通过调控Sirt1/Fox O1通路减轻H9c2大鼠心肌细胞氧化应激损伤,促进其增殖,抑制其凋亡。

蓝萼甲素对急性髓系白血病U937细胞增殖、凋亡、自噬及SIRT1/FoxO1信号通路的影响

目的:探究蓝萼甲素对急性髓系白血病(AML)U937细胞增殖、凋亡、自噬及沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框转录因子O1(FoxO1)信号通路的影响。方法:体外培养AML U937细胞,取培养至对数生长期的U937细胞分为对照组(常规培养U937细胞)、三氧化二砷组(在含U937细胞的培养基中加入2μmol/L的三氧化二砷)、蓝萼甲素低(在含U937细胞的培养基中加入2μmol/L蓝萼甲素)、高(在含U937细胞的培养基中加入4μmol/L蓝萼甲素)浓度组,继续培养48 h后。四甲基偶氮唑蓝法检测U937细胞增殖率,流式细胞术检测U937细胞凋亡率,单丹磺酰尸胺荧光染色观察U937细胞自噬小体数量,荧光定量PCR法检测U937细胞SIRT1、FoxO1 mRNA表达水平,蛋白印迹法检测U937细胞SIRT1、FoxO1蛋白表达水平。结果:与对照组相比,三氧化二砷组、蓝萼甲素低、高浓度组U937细胞增殖率显著降低(均P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05);与三氧化二砷组相比,蓝萼甲素低、高浓度组U937细胞增殖率显著升高(均P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);与蓝萼甲素低浓度组相比,蓝萼甲素高浓度组U937细胞增殖率显著降低(P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。结论:蓝萼甲素能抑制U937细胞的增殖,促进其凋亡和自噬,其机制可能与激活SIRT1/FoxO1信号通路有关。

PPAR-α通过PI3K/Akt/FoxO1信号通路对心肌细胞肥大的负性调控作用

目的 :研究过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferators activated receptor alpha,PPAR-α)对心肌细胞肥大的负性调控作用以及与PI3K/Akt/叉头框蛋白O1(Forkhead box O1,FoxO1)信号通路和氧化应激的关系。方法:应用异丙肾上腺素(isoproternol,ISO)诱导心肌细胞肥大;采用Leica图像分析软件测量心肌细胞表面积;应用实时定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测心房利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)、PPAR-α及FoxO1 mRNA表达;采用试剂盒检测心肌细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果:(1)ISO诱导心肌细胞肥大,PPAR-αm RNA表达显著下降。(2)应用非诺贝特(Fenofibrate,Feno)上调PPAR-α表达明显抑制ISO诱导的心肌细胞表面积、ANP和β-MHC mRNA表达的增加。(3)ISO诱导心肌细胞肥大,FoxO1表达明显减少;应用Feno预处理可增加FoxO1 mRNA的表达;应用PI3K抑制剂LY预处理亦能明显增加FoxO1 mRNA表达。(4)ISO诱导心肌细胞肥大,心肌细胞SOD活性明显降低,MDA含量明显增加,应用Feno预处理能显著提高SOD活性,降低MDA含量。结论:PPAR-α抑制心肌细胞肥大的作用可能与其抑制PI3K/Akt通路的激活,提高FoxO1的表达,降低氧化应激反应有关。

基于AKT/FOXO1信号通路探讨豨莶草提取物对冠心病大鼠心肌损伤的保护作用

目的:基于蛋白激酶B(AKT)/叉头框蛋白O1(FOXO1)通路探讨豨莶草提取物对冠心病(CHD)大鼠心肌损伤的影响。方法:从78只大鼠中随机选取66只大鼠复制CHD大鼠模型,其余12只作为对照组。将造模成功的60只大鼠按随机数字表法分为模型组、豨莶草提取物低剂量组、豨莶草提取物高剂量组、阳性药物对照组、豨莶草提取物高剂量+MK2206组,每组12只。各给药组大鼠分别给予相应药物;模型组、对照组大鼠灌胃给予等体积的蒸馏水,同时尾静脉注射100μg/kg生理盐水,1次/d,连续给药4周。观察心脏功能相关指标心率(HR)、平均动脉压(MAP)、左室收缩压(LVSP)的变化;HE染色、Masson染色分别检测心肌组织病理损伤及纤维化程度;ELISA法检测心肌组织中心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、肌红蛋白(Mb)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡;Western blotting法检测半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p-AKT、AKT、p-FOXO1、FOXO1蛋白表达情况。结果:与对照组比较,模型组大鼠HR、MAP、LVSP及心肌组织中p-AKT/AKT、p-FOXO1/FOXO1均明显降低(P<0.05),心肌组织病理损伤及纤维化程度严重,cTnI、Mb含量,IL-6、TNF-α水平,心肌细胞凋亡率,以及心肌组织中Caspase-3、Bax蛋白相对表达量均明显升高(P<0.05);与模型组比较,豨莶草提取物低剂量组、豨莶草提取物高剂量组、阳性药物对照组、豨莶草提取物高剂量+MK2206组大鼠上述指标变化均呈相反趋势,且差异有统计学意义(P<0.05);MK2206减弱了高剂量豨莶草提取物对CHD大鼠心肌损伤的保护作用。结论:豨莶草提取物可能通过激活AKT/FOXO1通路对CHD大鼠心肌损伤发挥保护作用。

基于Sirt1/FoxO1通路探讨体外冲击波联合富血小板血浆治疗膝关节骨性关节炎大鼠软骨损伤的作用机制

目的基于沉默信息调节因子1/叉头状转录因子O1(Sirt1/FoxO1)通路探讨体外冲击波联合富血小板血浆治疗膝关节骨性关节炎(KOA)大鼠关节软骨损伤的作用机制。方法15只SD大鼠用于富血小板血浆提取,剩余35只SD大鼠按照随机数字表法分为空白对照组、模型组、体外冲击波组、富血小板血浆组及体外冲击波+富血小板血浆组,每组各7例。干预完成后,关节软骨组织苏木精-伊红(HE)染色观察关节软骨形态变化,Mankin评分进行病理评估,细胞活力检测(CCK-8)法检测关节软骨细胞活力和增殖情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测关节液中炎症因子水平,蛋白质印迹法检测各组关节软骨组织Sirt1、acely-FoxO1/FoxO1表达水平。结果关节软骨组织HE染色显示,模型组、体外冲击波组、富血小板血浆组及体外冲击波+富血小板血浆组均存在不同程度的病理损伤,其中模型组最为严重,其他3组差异不大。Mankin评分和关节软骨组织acely-FoxO1/FoxO1水平比较,空白对照组<体外冲击波+富血小板血浆组<富血小板血浆组<体外冲击波组<模型组(均P<0.05)。关节软骨组织Sirt1水平、关节软骨细胞活力和增殖能力比较,模型组<体外冲击波组<富血小板血浆组<体外冲击波+富血小板血浆组<空白对照组(均P<0.05);关节液中炎症因子水平比较,空白对照组<体外冲击波+富血小板血浆组<体外冲击波组<富血小板血浆组<模型组(均P<0.05)。结论体外冲击波联合富血小板血浆可通过上调Sirt1表达和下调FoxO1乙酰化水平,促进骨关节炎软骨细胞增殖,减轻KOA大鼠关节炎症反应和关节软骨损伤。

红景天苷调控FoxO1/β-catenin通路对2型糖尿病骨质疏松大鼠的保护作用研究

目的探讨红景天苷(SDS)对2型糖尿病骨质疏松(DOP)大鼠的保护作用及叉头框转录因子O亚族1(Fox O1)/β-连环蛋白(β-catenin)通路的影响。方法高糖高脂饲养8周,8周后腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素(STZ),第10周无菌条件下去除卵巢构建DOP大鼠模型,建模成功后随机分为模型组、SDS组、Fox O1激动剂组,每组8只;正常组8只大鼠常规饲料正常饲养相同时间。造模成功后第2天予SDS组灌胃36 mg/(kg·d) SDS,Fox O1激动剂组灌胃40 mg/(kg·d)白藜芦醇(Res),连续11周。血糖仪检测空腹血糖水平;苏木精-伊红(HE)检测大鼠股骨组织形态;双能X射线吸收法测定股骨组织骨密度情况;活性氧(ROS)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒检测血清中ROS、SOD、MDA、GSH-Px水平;蛋白免疫印迹检测股骨组织中Fox O1、β-catenin蛋白水平。结果建模后给药前,与正常组相比,模型组、SDS组、Fox O1激动剂组空腹血糖水平升高(P<0.05)。给药后,模型组骨小梁出现明显断裂、破坏严重、数量减少;SDS组、Fox O1激动剂组骨小梁明显断裂,但空隙间隔有所缓解,数量有所增加。与正常组相比,模型组空腹血糖水平,血清中ROS、MDA水平升高(P<0.05);股骨组织骨密度,血清中SOD、GSH-Px水平,股骨组织中Fox O1、β-catenin蛋白水平降低(P<0.05)。与模型组相比,SDS组、Fox O1激动剂组空腹血糖水平,血清中ROS、MDA水平降低(P<0.05);股骨组织骨密度,血清中SOD、GSH-Px水平,股骨组织中Fox O1、β-catenin蛋白水平升高(P<0.05)。结论SDS可激活Fox O1/β-catenin通路,增强抗氧化应激作用,实现对DOP大鼠的保护。

基于SIRT1/FoxO1通路探究小檗碱抑制卵巢颗粒细胞凋亡与自噬的调节机制

目的:通过观察小檗碱(BBR)对卵巢颗粒细胞衰老的影响,探究其保护作用及调节机制。方法:应用H_(2)O_(2)诱导建立人卵巢颗粒样肿瘤(KGN)细胞衰老模型;设置空白组、模型组、BBR高剂量(1μmol·L^(-1))组和BBR低剂量(0.5μmol·L^(-1))组,模型组与BBR组加入浓度为10μmol·L^(-1)H_(2)O_(2),孵育40 min。通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)分析检测BBR对KGN细胞增殖的影响;通过β-半乳糖苷酶染色检测BBR对KGN细胞衰老状态的影响;应用流式细胞术检测BBR对KGN细胞凋亡和ROS含量的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BBR对KGN细胞抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)比值、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、叉头框转录因子O1(FoxO1)及过氧化氢酶(CAT)mRNA表达的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BBR对KGN细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、FoxO1、自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3BⅡ)、自噬关键分子酵母Atg6(Beclin-1)及泛素结合蛋白p62蛋白表达的影响。结果:H_(2)O_(2)诱导40 min后,与空白组比较,模型组细胞增殖率显著下降(P<0.01);与模型组比较,BBR干预组细胞增殖率明显上升(P<0.05);β-半乳糖苷酶染色结果显示,与空白组比较,模型组细胞呈现明显的衰老状态(P<0.01),BBR干预组细胞衰老情况较模型组显著降低(P<0.01);流式细胞术检测显示,与空白组比较,模型组细胞凋亡率显著上升(P<0.01),BBR干预组细胞凋亡率较模型组明显降低(P<0.05);同时,与空白组比较,模型组ROS含量显著增加(P<0.01);与模型组比较,BBR干预组细胞ROS含量显著降低(P<0.01);Real-time PCR结果显示,与空白组比较,模型组KGN细胞CAT、Bcl-2/Bax mRNA表达明显降低,Caspase-3与FoxO1 mRNA表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,BBR干预后KGN细胞CAT与Bcl-2/Bax mRNA表达明显增加(P<0.05),Caspase-3与FoxO1 mRNA表达较模型组明显降低(P<0.05)。Western blot结果显示,与空白组比较,模型组SIRT1、SOD2及p62蛋白水平显著降低(P<0.01),JNK、FoxO1、LC3BⅡ与Beclin-1蛋白水平明显升高(P<0.05);BBR干预后,SIRT1、SOD2及p62蛋白水平较模型组显著增加(P<0.01),JNK、FoxO1、LC3BⅡ与Beclin-1蛋白水平较模型组明显降低(P<0.05)。结论:BBR具有抑制卵巢颗粒细胞衰老效应,其机制与通过SIRT1/FoxO1通路介导抑制细胞凋亡与自噬有关。

布托啡诺调节FOXO3-FOXM1信号轴对骨肉瘤细胞生物活性和化疗药物耐药性的实验研究

目的探究布托啡诺(BUT)调节叉头框蛋白O3(FOXO3)-叉头框蛋白M1(FOXM1)信号轴对骨肉瘤细胞生物活性和化疗药物耐药性的影响。方法将2.0μmol/L顺铂(CDDP)处理的CDDP耐药MG-63细胞(MG-63/CDDP)分为对照组(MG-63/CDDP细胞用含0.05g/dl DMSO培养液处理)、BUT组(40μg/ml BUT处理MG-63/CDDP细胞)、JY-2组(用100μmol/L FOXO3-FOXM1抑制剂JY-2处理MG-63/CDDP细胞)和BUT+JY-2组(用40μg/ml BUT以及100μmol/L JY-2处理MG-63/CDDP细胞)。CCK8法检测MG-63/CDDP细胞活性;流式细胞术检测MG-63/CDDP细胞凋亡情况;Transwell法检测MG-63/CDDP细胞迁移、侵袭情况;Western blot检测自噬蛋白以及FOXO3-FOXM1信号通路相关蛋白表达。结果与MG-63细胞相比,MG-63/CDDP细胞IC50增加(20.56±2.52μmol/L vs 0.97±0.10μmol/L),差异具有统计学意义(q=19.017,P<0.05),筛选出较适浓度1μmol/L CDDP用于后续实验。与对照组相比,BUT组MG-63/CDDP细胞A值(0.43±0.05 vs 0.68±0.06),细胞迁移数量(63.63±7.58个vs114.56±10.57个)以及侵袭数量(43.38±4.58个vs 79.56±8.48个)、自噬相关蛋白Beclin1(0.31±0.05 vs 0.62±0.07)和微管相关蛋白轻链3(LC3)-II/I蛋白(0.51±0.08 vs 0.98±0.11)水平均下降(q=6.763~9.591,均P<0.05),凋亡率(28.57%±3.14%vs 8.67%±1.46%),FOXO3(0.72±0.08 vs 0.33±0.04),FOXM1(1.22±0.15 vs 0.70±0.08)蛋白水平均上升(q=14.077,10.681,7.493,均P<0.05),而JY-2组MG-63/CDDP细胞A值(0.99±0.13 vs0.68±0.06),细胞迁移数量(147.59±15.37个vs 114.56±10.57个)以及侵袭数量(111.83±12.58个vs 79.56±8.48个),Beclin1(0.94±0.11 vs 0.62±0.07),LC3-II/I蛋白(1.27±0.13 vs 0.98±0.11)水平均升高(q=4.171~6.012,均P<0.05),凋亡率(4.56%±0.86%vs 8.67%±1.46%),FOXO3(0.17±0.01 vs 0.33±0.04),FOXM1(0.46±0.03 vs 0.70±0.08)蛋白水平降低(q=5.941,9.505,6.881,均P<0.05),差异具有统计学意义。JY-2逆转了BUT对MG-63/CDDP细胞活性和化疗耐药性的有利影响。结论BUT可能通过激活FOXO3-FOXM1信号通路调节骨肉瘤细胞的细胞活性和CDDP耐药性。

川陈皮素通过激活SIRT1/FOXO3a信号来减轻肾缺血再灌注损伤

目的:本研究旨在探究川陈皮素(NOB)保护小鼠肾缺血再灌注损伤(RIRI)的可能分子机制。方法:将Balb/c小鼠分为5组(n=6):假手术组、模型组、NOB组(50 mg/kg)、组蛋白去乙酰化酶沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂EX527组(5 mg/kg)、NOB+EX527组(50 mg/kg的NOB+5 mg/kg EX527)。在建模前24 h对小鼠进行药物处理。通过阻断小鼠左肾动静脉血流建立RIRI模型。建模24 h后检测肾组织中氧化应激标志物含量。通过苏木精-伊红(HE)染色和天狼星红染色评价肾组织病变和纤维化。通过TUNEL染色检测肾细胞凋亡。通过蛋白质免疫印迹法检测肾组织中SIRT1、叉头框蛋白O3a(FOXO3a)、细胞凋亡和自噬相关蛋白表达。通过实时荧光定量PCR检测肾组织中SIRT1和FOXO3a mRNA的水平。结果:与模型组比较,NOB组小鼠肾脏病变程度减轻,肾脏纤维化面积降低(均P<0.05)。与模型组比较,NOB组肾组织抗氧化作用升高(P<0.05)。与模型组比较,NOB组肾组织中细胞凋亡减少(P<0.05)。与模型组比较,NOB组肾组织中SIRT1和FOXO3a的mRNA和蛋白相对表达量升高,微管相关蛋白轻链(LC)3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白相对表达量升高,而p62降低(均P<0.05)。此外,EX527逆转了NOB对肾脏的保护作用(P<0.05)。结论:NOB通过激活SIRT-1/FOXO3a信号通路介导的自噬来减轻RIRI。

多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗相关信号通路的研究进展

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种好发于青春期及育龄期女性的涉及诸多因素的内分泌代谢性疾病,临床主要表现为闭经、体胖、多毛痤疮以及妊娠率显著降低,但目前其病因病机尚不清楚。胰岛素抵抗(IR)与多种慢性非传染性疾病(高血压、糖尿病、心脑血管疾病、PCOS等)相关,目前已知磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B、肝激酶B1/AMP活化的蛋白激酶、沉默信息调节因子1/叉头框转录因子O1、Toll样因子4/核因子κB信号通路参与了PCOS伴IR(PCOS-IR)的作用机制,因此充分认识PCOS-IR的发病机制在疾病预防中有重要临床意义。

miR-199a在妊娠糖尿病中的表达及参与胰岛素抵抗的作用机制研究

目的探究微小RNA(miR)-199a在妊娠糖尿病(GDM)中的表达及调控沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头盒转录因子O1(FOXO1)通路参与胰岛素抵抗(IR)的机制。方法GDM孕妇56例为GDM组,正常孕妇60例为正常孕妇组,实时荧光定量PCR(qPCR)检测2组胎盘中miR-199a水平;计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);Pearson相关分析miR-199a与HOMA-IR的相关性。体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo并建立IR模型。miR-199a功能验证:细胞依处理方式不同分为模型组、miRNA inhibitor NC组、miR-199a inhibitor组、miRNA mimic NC组、miR-199a mimic组;qPCR检测各组细胞中miR-199a表达情况,蒽酮法检测细胞内葡萄糖吸收量,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,Western blot检测SIRT1、FOXO1、乙酰化(Ac)-FOXO1蛋白水平,双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-199a与SIRT1的靶向关系。结果与正常孕妇组比较,GDM组胎盘中miR-199a、HOMA-IR水平升高(P<0.05);GDM组miR-199a水平与HOMA-IR呈正相关(P<0.05)。棕榈酸、胰岛素共同作用细胞24 h成功建立IR模型。与模型组和miRNA inhibitor NC组比较,miR-199a inhibitor组miR-199a、MDA水平降低,葡萄糖吸收量、SOD水平、SIRT1蛋白水平升高(P<0.05)。与模型组和miRNA mimic NC组比较,miR-199a mimic组miR-199a和Ac-FOXO1蛋白表达升高、MDA水平升高,葡萄糖吸收量、SIRT1蛋白水平降低(P<0.05)。Tarbase数据库分析显示,miR-199a与SIRT1存在互补的结合位点,并经双荧光素酶实验证实。结论GDM患者胎盘中miR-199a高表达,升高的miR-199a可通过靶向下调SIRT1而促进FOXO1乙酰化,导致IR。