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Vero细胞毒性试验法检测大肠杆菌O157:H7毒素 被引量:6
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作者 郁燕萍 彭奕冰 +2 位作者 支立民 季育华 吴仲粱 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1999年第3期17-18,共2页
建立Vero细胞毒性试验法检测大肠杆菌0157:H7毒素(Verotoxin.VT)的实验方法。采用Vero细胞培养法。利用VT对Vero细胞具有强力毒性作用特点,从细胞形态学及OD值变化确认有无毒素产生。普通大肠埃希菌(ATCC25922)对Vero细胞无毒性... 建立Vero细胞毒性试验法检测大肠杆菌0157:H7毒素(Verotoxin.VT)的实验方法。采用Vero细胞培养法。利用VT对Vero细胞具有强力毒性作用特点,从细胞形态学及OD值变化确认有无毒素产生。普通大肠埃希菌(ATCC25922)对Vero细胞无毒性,大肠埃希菌0157:H7(ATCC43889)使Vero细胞发生明显病变。以此方法检测了9株待检菌,其中仅1 株来源于人的对Vero细胞具有强力毒性作用。用Vero细胞毒性试验法检测VT是一种经典、特异、灵敏的检测法,它直观地确认毒素的生物活性作用,有效地检出产毒株,并根据毒素产量高低进行分类,有助于疾病的诊断与治疗。 展开更多
关键词 VERo细胞 细胞病变效应 大肠埃希菌 o157:h7毒素
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大肠杆菌O157:H7VT2毒素基因的克隆及测序 被引量:5
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作者 曾明 孟淑芳 +1 位作者 王薇媛 辜清吾 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第5期53-54,31,共3页
目的 克隆出血性大肠杆菌O15 7:H7的VT2毒素基因。方法 利用PCR技术从出血性大肠杆菌O15 7:H7染色体基因组中扩增出VT2毒素基因 ,并连接至pGEM -T载体上 ,构建重组质粒pGVT2并进行序列测定。结果与结论 酶切分析表明重组质粒含有VT2... 目的 克隆出血性大肠杆菌O15 7:H7的VT2毒素基因。方法 利用PCR技术从出血性大肠杆菌O15 7:H7染色体基因组中扩增出VT2毒素基因 ,并连接至pGEM -T载体上 ,构建重组质粒pGVT2并进行序列测定。结果与结论 酶切分析表明重组质粒含有VT2毒素基因 ,核苷酸序列分析表明 ,其序列与GenBank上O15 展开更多
关键词 大肠杆菌 o157:h7VT2毒素基因 克隆 序列分析
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2007年浙江省衢州地区动物中产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7感染状况 被引量:5
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作者 占利 陆群英 +2 位作者 程苏云 叶菊莲 罗芸 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第11期2348-2351,共4页
目的:了解2007年浙江省衢州地区产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7在动物中的分布情况及其耐药性、PFGE分型及毒力基因携带状况。方法:按全国O157:H7监测方案于5~10月份肠道传染病高发季节,在衢州地区采集各种动物粪便/肛拭,用免疫... 目的:了解2007年浙江省衢州地区产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7在动物中的分布情况及其耐药性、PFGE分型及毒力基因携带状况。方法:按全国O157:H7监测方案于5~10月份肠道传染病高发季节,在衢州地区采集各种动物粪便/肛拭,用免疫磁珠富集后进行O157:H7分离培养、鉴定,可疑菌株以PCR法检测O、H抗原及志贺样毒素(SLT1和SLT2)、粘附抹平因子(eaeA)及溶血素(hly)4种毒力基因。用脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophoresis,PFGE)方法进行同源性分析,同时选择14种抗生素进行药敏试验,分析分离所得菌株的耐药状况。结果:共监测动物粪便标本300份,分离得产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7菌株16株,分离率为5.33%。16株O157:H7菌株,毒力基因Hly、eaeA、SLT2均阳性,SLT1均阴性。脉冲场凝胶电泳分型显示,16株O157:H7菌株可分2个PFGE基因型,型间差异较小。耐药性分析显示这些菌株对红霉素、利福平的耐药率最高,达100.0%,对其他受试抗生素均敏感。结论:该地区动物中产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7带菌率较高,所分离菌株主要携带SLT2基因,因此推测该地区存在发生产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7感染暴发或流行的潜在危险,需增加对动物源性O157:H7的监测力度。 展开更多
关键词 产志贺毒素大肠埃希菌o157:h7 毒力基因 PFGE 监测
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非致病性大肠埃希菌能增多大肠埃希菌O157:H7志贺毒素的产生
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作者 徐宁 陈智 《国外医学(微生物学分册)》 2004年第3期46-47,共2页
大肠埃希菌(简称大肠杆菌)O157:H7毒力因子为志贺毒素2(stx2),其基因由温和噬菌体编码,由晚期基因启动子调控表达。stx2的合成与释放需要诱导噬菌体溶菌周期,而且正常肠道大肠杆菌感染了毒素编码的噬菌体就能制造毒素和噬菌体,使... 大肠埃希菌(简称大肠杆菌)O157:H7毒力因子为志贺毒素2(stx2),其基因由温和噬菌体编码,由晚期基因启动子调控表达。stx2的合成与释放需要诱导噬菌体溶菌周期,而且正常肠道大肠杆菌感染了毒素编码的噬菌体就能制造毒素和噬菌体,使毒素水平远远超过病原性菌株本身的产量,作者在体外以及鼠肠道验证了这一假设。 展开更多
关键词 非致病性大肠埃希菌 大肠埃希菌 o157:h7志贺毒素 基因启动子
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Stx2B与IntiminC300融合蛋白的构建、表达及免疫保护研究 被引量:13
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作者 易勇 邹全明 +6 位作者 程建平 毛旭虎 童文德 曾明 朱永红 马颖 王庆旭 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期227-233,共7页
目的 构建表达肠出血性大肠杆菌 (EHEC)O1 57∶H7志贺毒素Ⅱ结合亚单位 (Stx2B)与紧密黏附素C 端免疫保护性片段 (IntiminC30 0 )的融合蛋白 (Stx2B IntiminC30 0 ) ,并观察其免疫保护作用。方法 设计引物采用PCR法自EHECO1 57∶H7基... 目的 构建表达肠出血性大肠杆菌 (EHEC)O1 57∶H7志贺毒素Ⅱ结合亚单位 (Stx2B)与紧密黏附素C 端免疫保护性片段 (IntiminC30 0 )的融合蛋白 (Stx2B IntiminC30 0 ) ,并观察其免疫保护作用。方法 设计引物采用PCR法自EHECO1 57∶H7基因组扩增Stx2B的编码基因stx2b ,T A克隆后在前期已构建原核表达质粒 pET 2 8a( + ) eaeC30 0的基础上构建融合基因表达质粒 pET 2 8a( + ) stx2b eaeC30 0 ,经测序鉴定后转化E .coliBL2 1 (DE3) ,IPTG诱导表达 ,PAGE检测 ;通过包涵体洗涤与阴离子柱层析纯化 ,获得目的蛋白Stx2B IntiminC30 0 ,以Al(OH ) 3为佐剂皮下注射免疫BALB/c小鼠 ,再以EHECO1 57∶H7超声破菌液腹腔注射免疫后的小鼠 ,观察攻毒保护效果。结果 PCR法自EHECO1 57∶H7基因组扩增出了约 2 90bp的目的片段 ;原核表达质粒 pET 2 8a( + ) stx2b eaeC30 0经酶切及测序鉴定与设计序列一致。转化E .coliBL2 1 (DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约 2 5% ;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量 (Mr)约 4 3× 1 0 3,破菌后电泳证实目的蛋白以包涵体形式表达。纯化后目的蛋白Stx2B IntiminC30 0的纯度达 75% ,免疫BALB/c小鼠后血清特异性抗体阳转率及抗体效价均显著增高 ,能够抵御致死剂量EHECO1 57∶H7超声破菌? 展开更多
关键词 融合蛋白 o157:h7志贺毒素 保护研究 BALB/c小鼠 表达及 BL21(DE3) 肠出血性大肠杆菌 原核表达质粒 EhEC 免疫保护性 基因组扩增 免疫保护作用 基因表达质粒 E.CoLI E.CoLI 相对分子质量 免疫保护效果 PCR法 PAGE T-A克隆
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