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大肠杆菌O157:H7VT2毒素基因的克隆及测序 被引量:5
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作者 曾明 孟淑芳 +1 位作者 王薇媛 辜清吾 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第5期53-54,31,共3页
目的 克隆出血性大肠杆菌O15 7:H7的VT2毒素基因。方法 利用PCR技术从出血性大肠杆菌O15 7:H7染色体基因组中扩增出VT2毒素基因 ,并连接至pGEM -T载体上 ,构建重组质粒pGVT2并进行序列测定。结果与结论 酶切分析表明重组质粒含有VT2... 目的 克隆出血性大肠杆菌O15 7:H7的VT2毒素基因。方法 利用PCR技术从出血性大肠杆菌O15 7:H7染色体基因组中扩增出VT2毒素基因 ,并连接至pGEM -T载体上 ,构建重组质粒pGVT2并进行序列测定。结果与结论 酶切分析表明重组质粒含有VT2毒素基因 ,核苷酸序列分析表明 ,其序列与GenBank上O15 展开更多
关键词 大肠杆菌 o157:h7vt2毒素基因 克隆 序列分析
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大肠杆菌O157:H7中编码vt2基因的噬菌体的分离与鉴定 被引量:5
2
作者 张慧英 孙建和 严亚贤 《中国病毒学》 CSCD 2005年第6期668-672,共5页
根据GenBank中VT1、VT2毒素的基因序列设计合成2对引物,以大肠杆菌O157:H7菌株DNA为模板,扩 增vt1、vt2。诱导只扩增出vt2的菌株释放噬菌体,利用多种指示菌经双层琼脂平板法来分离纯化VT2噬菌体,观 察噬菌斑的特征,提纯病毒粒子进行电... 根据GenBank中VT1、VT2毒素的基因序列设计合成2对引物,以大肠杆菌O157:H7菌株DNA为模板,扩 增vt1、vt2。诱导只扩增出vt2的菌株释放噬菌体,利用多种指示菌经双层琼脂平板法来分离纯化VT2噬菌体,观 察噬菌斑的特征,提纯病毒粒子进行电镜观察,并对噬菌体中vt2基因检测、克隆和序列分析。结果显示VT2噬菌 体感染MC1061在双层琼脂平板上形成的噬菌斑小而混浊,多呈磨玻璃样;而首次感染大肠杆菌CC118(λpir),此 后用MC1061分离的噬菌体,再以MC1061为指示菌,在双层琼脂平板上形成小而清晰透明的噬菌斑。电镜下噬 菌体头部呈六边形外廓,尾部细长无尾鞘结构。以噬菌体DNA为模板进行PCR扩增,检测到vt2特异性DNA 带,克隆的vt2基因序列与GenBank中编码VT2毒素的核苷酸序列(X07865,NC_002655,BA000007,AF291819) 的同源性分别达到99%,确定编码VT2毒素的基因位于噬菌体上,并获得VT2噬菌体(?)HY。 展开更多
关键词 大肠杆菌o157:h7 vt2噬菌体 形态特征 vt2基因 序列分析
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大肠杆菌O_(157):H_7 Stx2毒素B亚单位基因的克隆、序列分析及表达载体的构建
3
作者 曾明 许文香 王斌 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第1期16-17,22,共3页
目的 克隆出血性大肠杆菌O157:H7的Stx2毒素B亚单位基因 ,进行序列分析并构建表达载体。方法 利用PCR技术从出血性大肠杆菌O157:H7染色体基因组中扩增出Stx2毒素B亚单位基因 ,并连接至质粒载体上 ,进行序列测定和分析 ,亚克隆构建表... 目的 克隆出血性大肠杆菌O157:H7的Stx2毒素B亚单位基因 ,进行序列分析并构建表达载体。方法 利用PCR技术从出血性大肠杆菌O157:H7染色体基因组中扩增出Stx2毒素B亚单位基因 ,并连接至质粒载体上 ,进行序列测定和分析 ,亚克隆构建表达载体 ,经SDS PAGE电泳分析目的蛋白表达量。结果 所克隆的基因序列与Genbank上基因序列高度同源 ,所表达目的蛋白约占宿主菌蛋白的 2 0 %。 展开更多
关键词 大肠杆菌 o157:h7Stx2 毒素 B亚单位 基因 克隆 序列
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2007年浙江省衢州地区动物中产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7感染状况 被引量:5
4
作者 占利 陆群英 +2 位作者 程苏云 叶菊莲 罗芸 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第11期2348-2351,共4页
目的:了解2007年浙江省衢州地区产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7在动物中的分布情况及其耐药性、PFGE分型及毒力基因携带状况。方法:按全国O157:H7监测方案于5~10月份肠道传染病高发季节,在衢州地区采集各种动物粪便/肛拭,用免疫... 目的:了解2007年浙江省衢州地区产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7在动物中的分布情况及其耐药性、PFGE分型及毒力基因携带状况。方法:按全国O157:H7监测方案于5~10月份肠道传染病高发季节,在衢州地区采集各种动物粪便/肛拭,用免疫磁珠富集后进行O157:H7分离培养、鉴定,可疑菌株以PCR法检测O、H抗原及志贺样毒素(SLT1和SLT2)、粘附抹平因子(eaeA)及溶血素(hly)4种毒力基因。用脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophoresis,PFGE)方法进行同源性分析,同时选择14种抗生素进行药敏试验,分析分离所得菌株的耐药状况。结果:共监测动物粪便标本300份,分离得产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7菌株16株,分离率为5.33%。16株O157:H7菌株,毒力基因Hly、eaeA、SLT2均阳性,SLT1均阴性。脉冲场凝胶电泳分型显示,16株O157:H7菌株可分2个PFGE基因型,型间差异较小。耐药性分析显示这些菌株对红霉素、利福平的耐药率最高,达100.0%,对其他受试抗生素均敏感。结论:该地区动物中产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7带菌率较高,所分离菌株主要携带SLT2基因,因此推测该地区存在发生产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7感染暴发或流行的潜在危险,需增加对动物源性O157:H7的监测力度。 展开更多
关键词 产志贺毒素大肠埃希菌o157:h7 毒力基因 PFGE 监测
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与HEp-2细胞粘附现象相关的大肠杆菌O157基因的发现 被引量:2
5
作者 韩烨 周志江 张玉静 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期266-269,共4页
将产志贺毒素大肠杆菌O157∶H7菌株97094培养于含有不同质量浓度的萘啶酮酸(nalidixicacid,NA)的麦康凯(MacConkey)琼脂平板上,获得对NA有抗性的菌株。用含有自杀性质粒pRT733的供体菌SM10λpir(携带转座子TnphoA)和抗萘啶酮酸的97094... 将产志贺毒素大肠杆菌O157∶H7菌株97094培养于含有不同质量浓度的萘啶酮酸(nalidixicacid,NA)的麦康凯(MacConkey)琼脂平板上,获得对NA有抗性的菌株。用含有自杀性质粒pRT733的供体菌SM10λpir(携带转座子TnphoA)和抗萘啶酮酸的97094菌株做接合试验,使转座子TnphoA转入受体菌97094,经过约200个接合试验,有503个菌株在含有Km、NA、XP的LB琼脂平板上形成蓝色菌落,说明在这些菌株中形成了phoA融合基因,并能表达phoA基因。在这503个Kmr,NAr变异体中,有6株完全失去了对HEp-2细胞的局灶型粘附(localadherence,LA)现象。对构建的6株大肠杆菌O157TnphoA变异体,克隆TnphoA及其两侧的大肠杆菌O157DNA序列,用根据TnphoA融合接点处的phoA的DNA序列设计合成的寡核苷酸引物,对各克隆中TnphoA上游的大肠杆菌O157的DNA片段部分进行测序,测序结果做BLAST搜索,发现有4个变异体的TnphoA插入到已知的大肠杆菌O157紧密素基因eae中,有2个变异体的TnphoA分别插入到eae之外的核苷酸序列中,分别插入到一个功能未知的菌毛分子伴侣基因和一个功能未知的Z4182基因的上游。这项研究表明,除紧密素外,大肠杆菌O157尚有其他因子参与对真核细胞的粘附。 展开更多
关键词 细胞粘附 大肠杆菌o157:h7 hEP-2细胞 DNA序列 相关 萘啶酮酸 琼脂平板 DNA片段 BLAST 核苷酸序列 变异体 质量浓度 志贺毒素 acid 融合基因 寡核苷酸 设计合成 分子伴侣 真核细胞 转座子 菌株 pir 受体菌 插入 试验 接合
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出血性大肠杆菌O157:H7的Tir与stx1/2B融合基因的构建和表达 被引量:5
6
作者 张雪寒 何孔旺 +3 位作者 卢维彩 俞正玉 茅爱华 刘亚栋 《内蒙古农业科技》 2009年第3期59-61,共3页
为了更好防治由出血性大肠杆菌O157:H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗,其中亚单位疫苗具有很大优势。方法:构建表达tir和stxb的融合基因,将tir基因中间295个氨基酸残基(Tir295)与stxB亚基基因72个氨基酸串联,构建pET28a-stx2b-Tir295-... 为了更好防治由出血性大肠杆菌O157:H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗,其中亚单位疫苗具有很大优势。方法:构建表达tir和stxb的融合基因,将tir基因中间295个氨基酸残基(Tir295)与stxB亚基基因72个氨基酸串联,构建pET28a-stx2b-Tir295-stx1b重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达。结果:薄层扫描分析表明,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30%左右。结论:由于该融合蛋白由Tir、stx1b和stx2b三部分抗原组成,可刺激机体产生针对转位紧密素受体(Tir)和志贺毒素(stx)的抗体,在EHECO157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。 展开更多
关键词 EhEC o157:h7 转位紧密素受体 志贺毒素 融合基因
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大肠杆菌O157噬菌体中vt2基因A、B亚单位的克隆与序列分析
7
作者 张慧英 孙建和 严亚贤 《中国病毒学》 CSCD 2005年第1期75-78,共4页
根据GenBank中毒素基因vt1、vt2序列设计合成4对引物,以大肠杆菌O157菌株DNA为模板,扩增vt1、vt2,从只含有vt2的菌株中诱导释放噬菌体,以噬菌体DNA为模板进行PCR扩增,获得vt2、vt2-A、vt2-B3条特异性DNA带;将vt2-A、vt2-B扩增产... 根据GenBank中毒素基因vt1、vt2序列设计合成4对引物,以大肠杆菌O157菌株DNA为模板,扩增vt1、vt2,从只含有vt2的菌株中诱导释放噬菌体,以噬菌体DNA为模板进行PCR扩增,获得vt2、vt2-A、vt2-B3条特异性DNA带;将vt2-A、vt2-B扩增产物纯化后,分别插入pMD18-T载体,测序结果与相应序列比较,vt2-A和vt2-B亚单位的基因序列与GenBank中编码VT2毒素的A、B亚单位的核苷酸序列(X07865,NC_002655,:BA000007,AF291819)的同源性分别为98%~99%、96%~100%,确定vt2位于噬菌体,并为进一步研究大肠杆菌O157中VT噬菌体的毒力转导、VT2毒素的表达和应用奠定基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌o157 噬菌体 毒素基因vt2 克隆 序列分析
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应用多重引物PCR方法检测O157:H7毒力基因的初步研究
8
作者 凌志强 盛清 +3 位作者 郑伟 张文元 王满琴 何浙生 《浙江省医学科学院学报》 2003年第2期12-14,共3页
目的 研究一种快速、特异的检测大肠杆菌O157:H7毒力的复合RSR方法。方法 选用针对大肠杆菌O157:H7志贺样毒素I、Ⅱ的两对引物,在同一扩增体系中进行PCR,检测不同来源的大肠杆菌O157:H7及E.coli ATEEE5922株。结果 EHEC O157:H7 ... 目的 研究一种快速、特异的检测大肠杆菌O157:H7毒力的复合RSR方法。方法 选用针对大肠杆菌O157:H7志贺样毒素I、Ⅱ的两对引物,在同一扩增体系中进行PCR,检测不同来源的大肠杆菌O157:H7及E.coli ATEEE5922株。结果 EHEC O157:H7 933W株扩增出两条志贺样毒素基因产物,而E.coli ATOC25922株和EHEC O157:H7 97-l-68的扩增结果均为阴性。结论 应用多重引物RCR方法检测大肠杆菌O157:H7毒力基因,简便、快速、特异、敏感,对流行病学调查分析、制定预防和控制对策有重要的参考价值。 展开更多
关键词 PCR 检测 o157:h7 基因 大肠杆菌 志贺样毒素 聚合酶链反应
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PCR检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7 被引量:12
9
作者 金慧英 陶开华 +4 位作者 李越希 陈华标 李法卿 李素芹 谭维国 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期394-395,共2页
目的 研究快速、特异、灵敏的检测肠出血性大肠杆菌O15 7∶H7的多重PCR方法 ,并比较单一PCR和多重PCR对检测灵敏度的影响。方法 选择O15 7∶H7的O抗原、H鞭毛抗原及SLT1和SLT2毒素基因特异的 4对引物 ,分别或共同进行PCR扩增 ,检测 4 ... 目的 研究快速、特异、灵敏的检测肠出血性大肠杆菌O15 7∶H7的多重PCR方法 ,并比较单一PCR和多重PCR对检测灵敏度的影响。方法 选择O15 7∶H7的O抗原、H鞭毛抗原及SLT1和SLT2毒素基因特异的 4对引物 ,分别或共同进行PCR扩增 ,检测 4 0株O15 7∶H7和非O15 7∶H7菌株 ,将细菌按 10 1~ 10 6稀释后比较PCR的检测灵敏度。结果 所有O15 7∶H7菌株均在 4 97bp和 6 2 5bp处出现O15 7抗原基因和H7抗原基因产物 ,其产毒株在4 84bp和 (或 ) 2 10bp处出现SLT2和 (或 )SLT1基因产物 ,非O15 7∶H7菌株PCR结果均为阴性 ;单一PCR检测灵敏度为 15 0CFU/PCR反应 ,多重PCR为 >15 0 0CFU/PCR反应。结论 在经过增菌后 ,多重PCR比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便 ,为产毒和非产毒O15 7∶H7的诊断提供了新的手段。 展开更多
关键词 PCR 肠出血 大肠杆菌o157:h7 聚合酶链反应 rfbE基因 fliC基因 毒素基因
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河南省新发传染病EHEC O157:H7监测研究 被引量:8
10
作者 夏胜利 沈刚健 +2 位作者 靳会娟 马宏 张锦 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2008年第23期4691-4694,共4页
[目的]了解河南省肠出血性大肠杆菌(EHEC)感染性腹泻的发病情况、宿主带菌状况、食品污染程度及志贺毒素(stx)基因型,为制订有效的防治对策提供依据。[方法]采集河南省监测点腹泻病人、家畜、家禽粪便,水和肉食品等标本分离EHEC菌株,应... [目的]了解河南省肠出血性大肠杆菌(EHEC)感染性腹泻的发病情况、宿主带菌状况、食品污染程度及志贺毒素(stx)基因型,为制订有效的防治对策提供依据。[方法]采集河南省监测点腹泻病人、家畜、家禽粪便,水和肉食品等标本分离EHEC菌株,应用分子生物学技术检测分析菌株rfbO157、rfbO111、hlyA、eaeA、stx2和stx1等毒力基因和突变基因。[结果](1)从腹泻病人、家畜、家禽、食品、水、蜣螂和苍蝇中均分离出EHEC菌株共275株,总分离率7.88%;其中O157︰H7菌株为232株(84.36%),携带stx2基因EHECO157︰H7菌株88株(37.93%);非O157︰H7菌株43株(15.64%)。(2)宿主动物中羊带菌率最高(6.96%),是河南省EHEC最主要宿主动物;多重PCR检测出8种不同毒力基因组合型,主要为rfbO157+、hlyA+、eaeA+、stx2+组合。stx2变种毒素GK探针检测出3种毒素变种杂交带型,其中stx2原毒素+stx2vha型占7.4%,stx2vha型的占72.2%,未知新杂交带型占20.4%。(3)EHECO157︰H7菌株可分为9个PFGE型,自羊、牛、鸡和蜣螂和腹泻病患者中分离的携带stx2vha菌株同属一个PFGE型。(4)144株不携带志贺毒素的O157菌株中发现O157︰H38、O157︰H42和O157︰Hund(未确定型)新菌株。[结论]河南省家禽、家畜中普遍携带EHECO157︰H7大肠杆菌,羊是最主要的宿主动物;EHECO157︰H7为我省优势菌型,其毒素基因型为stx2-eaeA-hlyA并以stx2vha亚型为主。EHEC在外环境中污染严重并可在人与人、动物与人之间传播,家畜、家禽携带stx2 EHECO157︰H7率的高低与EHEC人群感染发病呈相关关系。 展开更多
关键词 EhEC o157:h7 腹泻 志贺毒素基因 基因 多重PER PFGE
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徐州地区73株大肠杆菌O157:H7的遗传多样性分析 被引量:2
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作者 顾玲 祖荣强 +2 位作者 周璐 杨华富 张雪峰 《江苏预防医学》 CAS 2019年第1期30-32,共3页
目的了解不同来源大肠杆菌O157:H7菌株遗传标志物的分布频率。方法对1999年徐州地区O157:H7暴发疫情中分离到的73株O157:H7菌株,用PCR方法对stx1和stx2阳性菌株分别进行亚型分型;对stx2阳性菌株检测q933和q21基因;用RT-PCR进行tir等位... 目的了解不同来源大肠杆菌O157:H7菌株遗传标志物的分布频率。方法对1999年徐州地区O157:H7暴发疫情中分离到的73株O157:H7菌株,用PCR方法对stx1和stx2阳性菌株分别进行亚型分型;对stx2阳性菌株检测q933和q21基因;用RT-PCR进行tir等位基因检测。结果 73株菌中除1株tir(255A)和tir(255T)均为阴性外,其余菌株均携带tir(255T)基因;10株携带stx1,亚型分型检测显示均为stx1a;全部分离株均为stx2阳性,其中携带stx2a13株(17.81%),携带stx2c 60株(82.19%)。食品中未检出stx2a;病人分离株中stx2a检出率高于动物分离株,差异有统计学意义(P<0.01),食品、动物分离株中stx2c检出率(100.00%、87.30%)较高。13株(17.81%)菌株为单q933阳性,60株(82.19%)为单q21阳性。食品中未检出q933,病人分离株中检出率高于动物分离株(P<0.01);q21在病人分离株中未检出,食品、动物分离株检出率较高(100.00%、87.30%)。结论不同来源的O157:H7分离菌株的遗传标志存在多样性,这可能有助于从外环境来源菌株中识别具有潜在人类疾病风险的基因型。 展开更多
关键词 大肠杆菌o157:h7 志贺毒素 基因亚型 遗传标志物
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非致病性大肠埃希菌能增多大肠埃希菌O157:H7志贺毒素的产生
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作者 徐宁 陈智 《国外医学(微生物学分册)》 2004年第3期46-47,共2页
大肠埃希菌(简称大肠杆菌)O157:H7毒力因子为志贺毒素2(stx2),其基因由温和噬菌体编码,由晚期基因启动子调控表达。stx2的合成与释放需要诱导噬菌体溶菌周期,而且正常肠道大肠杆菌感染了毒素编码的噬菌体就能制造毒素和噬菌体,使... 大肠埃希菌(简称大肠杆菌)O157:H7毒力因子为志贺毒素2(stx2),其基因由温和噬菌体编码,由晚期基因启动子调控表达。stx2的合成与释放需要诱导噬菌体溶菌周期,而且正常肠道大肠杆菌感染了毒素编码的噬菌体就能制造毒素和噬菌体,使毒素水平远远超过病原性菌株本身的产量,作者在体外以及鼠肠道验证了这一假设。 展开更多
关键词 非致病性大肠埃希菌 大肠埃希菌 o157:h7志贺毒素 基因启动子
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EHECO157∶H7志贺样毒素Ⅱ结合亚单位Stx2B的基因克隆、表达与纯化 被引量:4
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作者 马颖 毛旭虎 +4 位作者 邹全明 易勇 程建平 曾明 张卫军 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期155-158,共4页
目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7志贺样毒素B亚单位(Shiga liketoxin2B,Stx2B),并对其初步纯化。方法设计引物采用PCR法自EHEC O157∶H7基因组扩增志贺样毒素B亚单位的编码基因stx2b,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22b(+)-s... 目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7志贺样毒素B亚单位(Shiga liketoxin2B,Stx2B),并对其初步纯化。方法设计引物采用PCR法自EHEC O157∶H7基因组扩增志贺样毒素B亚单位的编码基因stx2b,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b,经测序鉴定后转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,以Tricine-PAGE和Western blot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白。结果扩增的stx2b基因约210bp;原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coliBL21(DE3)中得到高效可溶性表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约7×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达90.1%。结论EHEC O157∶H7志贺样毒素B亚单位的高效表达与初步纯化,有利于进一步的生物学性质研究。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌(EhEC)o157:h7 志贺样毒素B亚单位(Stx2B) 基因克隆 原核表达 纯化
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Vero毒素-1B亚基基因克隆及表达
14
作者 陈宋义 李海波 +2 位作者 赵哲 熊海平 崔晓燕 《中国卫生检验杂志》 CAS 2005年第11期1301-1302,1330,共3页
目的:构建表达Vero毒素-1B亚基的重组质粒。方法:用PCR法扩增并用低熔点琼脂糖法回收Vero毒素-1B亚基基因,将其与质粒pGEX-4T-2重组,通过酶切图谱和序列分析法筛选出重组质粒。将含重组质粒的宿主菌诱导表达后,提取全菌总蛋白进行SDS-P... 目的:构建表达Vero毒素-1B亚基的重组质粒。方法:用PCR法扩增并用低熔点琼脂糖法回收Vero毒素-1B亚基基因,将其与质粒pGEX-4T-2重组,通过酶切图谱和序列分析法筛选出重组质粒。将含重组质粒的宿主菌诱导表达后,提取全菌总蛋白进行SDS-PAGE电泳分析。结果:获得了克隆有Vero毒素-1B亚基基因的重组质粒,经诱导后表达分子量为34 kDa的新蛋白。结论:重组质粒pVT1B的构建和表达成功说明克隆的Vero毒素-1B亚基基因具有完整的阅读框架,使简便获得Vero毒素-1B亚基成为可能,为以后研究新型的肠出血性大肠杆菌疫苗及治疗用药奠定了基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌o157:h7 Vero毒素 基因表达
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应用高分辨率熔解曲线技术检测大肠埃希菌O157:H7志贺毒素基因变种stx2c 被引量:1
15
作者 陈强 王涛 +3 位作者 孙晖 王艳 熊衍文 卢珊 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2012年第5期950-952,共3页
目的:探索高分辨率熔解曲线(High Resolution Melting,HRM)分析技术在检测大肠埃希菌O157:H7志贺毒素基因变种stx2c中的应用。方法:用HRM技术对20株O157:H7代表性菌株志贺毒素2基因进行分型,并与测序结果进行比较。结果:20份O157:H7样... 目的:探索高分辨率熔解曲线(High Resolution Melting,HRM)分析技术在检测大肠埃希菌O157:H7志贺毒素基因变种stx2c中的应用。方法:用HRM技术对20株O157:H7代表性菌株志贺毒素2基因进行分型,并与测序结果进行比较。结果:20份O157:H7样品中有3种类型熔解曲线。测序结果显示,12例A型熔解曲线中除1例为stx2a+stx2c杂合型外,其它均为原毒素基因型stx2a;1例B型熔解曲线测序结果为stx2a+stx2c杂合型,7例C型熔解曲线菌株测序结果均为stx2c纯合子。结论:HRM技术简便、快速,可作为志贺毒素2基因变种stx2c的检测方法。 展开更多
关键词 大肠埃希菌o157:h7 志贺毒素2变种stx2c 高分辨率熔解曲线分析
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产志贺毒素大肠杆菌毒力基因检测 被引量:2
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作者 张锦 马宏 +2 位作者 夏胜利 王建丽 黄丽莉 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1460-1461,共2页
目的 分析河南省 2 0 0 0~ 2 0 0 2年分离的 3 51株与产志贺毒素大肠菌 (STEC)感染有关的菌株 ,了解不同来源标本各种毒素基因携带模式。方法 应用多重PCR技术 ,检测所有菌株志贺毒素 (stx1和stx2 )、hlyA、eaeA、rfbO111和rfbO15 7... 目的 分析河南省 2 0 0 0~ 2 0 0 2年分离的 3 51株与产志贺毒素大肠菌 (STEC)感染有关的菌株 ,了解不同来源标本各种毒素基因携带模式。方法 应用多重PCR技术 ,检测所有菌株志贺毒素 (stx1和stx2 )、hlyA、eaeA、rfbO111和rfbO15 7基因。结果  3 51株待检菌株分为枸橼酸杆菌、O157:H7大肠杆菌、rfbO 15 7基因阳性不携带志贺毒素基因的大肠杆菌和rfbO15 7基因阴性携带志贺毒素基因的大肠杆菌 4种不同类型。 4种类型菌株具有 6种rfbO15 7、stx2 、stx1基因模式。携带志贺毒素基因的菌株主要源自波尔山羊、普通本地羊和病人 ,其它家畜家禽中有不同程度感染STEC。结论 河南省存在STEC的感染 ,主要以O157:H7大肠杆菌为主 ,但也存在其它非O157的STEC。 展开更多
关键词 志贺毒素 大肠杆菌 o157:h7 毒力 基因 多重PCR
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大肠埃希菌O157:H7分离鉴定及毒素基因多重PCR检测 被引量:1
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作者 李刚山 王意银 +18 位作者 邓波 古良琪 张超雄 王惠萱 张琳 张向容 杨川莉 王承珠 周奕帆 张雪莲 朱姝媛 朱琼媛 侯敏 刘德华 周丽华 周卫国 覃敏 邱薇 范泉水 《中国热带医学》 CAS 2011年第12期1431-1433,共3页
目的了解大肠埃希菌O157:H7(EHEC O157:H7)在云南战区感染性腹泻患者及猪粪便中检出情况。方法将标本接种mEC增菌液中增菌,免疫磁珠磁珠富集后,分别接种科玛嘉显O157显色琼脂和山梨醇麦康凯(S-MAC)琼脂平板培养,MUG初筛,肠杆菌科细菌生... 目的了解大肠埃希菌O157:H7(EHEC O157:H7)在云南战区感染性腹泻患者及猪粪便中检出情况。方法将标本接种mEC增菌液中增菌,免疫磁珠磁珠富集后,分别接种科玛嘉显O157显色琼脂和山梨醇麦康凯(S-MAC)琼脂平板培养,MUG初筛,肠杆菌科细菌生化鉴定编码系列(API-20E)和VITEK32全自动微生物生化分析仪鉴定。应用多重PCR扩增检测志贺毒素1、2(SLT1/SLT2)和侵袭相关基因。小白鼠腹腔注射法测定其毒力。K-B法做抗生素药敏试验。结果从腹泻患者和猪中均检出EHEC O157:H7,具有志贺毒素SLT1/SLT2和侵袭相关基因的三个毒素基因。毒力试验使小白鼠发病死亡。药敏试验对14种抗生素敏感。结论云南战区存在EHEC O157:H7感染。建立和优化的多重PCR方法,能快速、敏感特异的检测EHEC O157:H7毒素基因,为重大食源性疾病处理、诊治及流行病学调查提供了强有力的技术手段。 展开更多
关键词 大肠埃希菌o157:h7 免疫磁珠 多重PCR 毒素基因
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EHEC O157:H7志贺样毒素Ⅱ(Stx2)的克隆表达与活性研究
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作者 马颖 毛旭虎 +1 位作者 邹全明 易勇 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期933-936,共4页
目的 克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7志贺样毒素Ⅱ(ShigaliketoxinⅡ,Stx2),并鉴定其生物学活性.方法 采用PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增志贺样毒素Ⅱ的编码基因stx2,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-11c(+)-stx2,经测... 目的 克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7志贺样毒素Ⅱ(ShigaliketoxinⅡ,Stx2),并鉴定其生物学活性.方法 采用PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增志贺样毒素Ⅱ的编码基因stx2,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-11c(+)-stx2,经测序鉴定后转化E.col iBL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDS-PAGE、Western blot分析目的蛋白的表达.以EHEC O157:H7野生菌株作对照,通过对HeLa细胞的细胞毒作用及对小鼠攻毒实验,鉴定重组蛋白的生物学活性.结果 扩增的stx2基因约1230bp;原核表达质粒pET-11c(+)-stx2经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coli BL21(DE3)中得到表达,蛋白表达率约25%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约72×10^3;重组蛋白Stx2对HeLa细胞具有细胞毒作用,CD50为35 pg/ml;Stx2对小鼠致死剂量LD100为10μg.结论 成功克隆并表达了Stx2重组蛋白,为探讨O157:H7菌的感染机制及其防治研究奠定了一定的基础. 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌(EhEC)o157:h7 志贺样毒素Ⅱ(Stx2) 基因克隆 原核表达
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产志贺毒素大肠杆菌O157∶H7的亚碲酸钾抗性基因簇分布和抗性水平 被引量:4
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作者 李新军 叶长芸 +3 位作者 张晶波 卢珊 白雪梅 徐建国 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期833-836,共4页
目的 了解产志贺毒素大肠杆菌O15 7∶H7的亚碲酸盐抗性基因簇的分布和抗性水平的关系。方法 运用PCR和核酸杂交方法进行基因检测 ,使用平皿法检测亚碲酸钾抗性水平。结果在所检测的志贺菌、沙门菌、霍乱弧菌、耶尔森菌、泌尿道致病性... 目的 了解产志贺毒素大肠杆菌O15 7∶H7的亚碲酸盐抗性基因簇的分布和抗性水平的关系。方法 运用PCR和核酸杂交方法进行基因检测 ,使用平皿法检测亚碲酸钾抗性水平。结果在所检测的志贺菌、沙门菌、霍乱弧菌、耶尔森菌、泌尿道致病性大肠杆菌、肠产毒性大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌、肠黏附性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌中 ,只有大肠杆菌O15 7∶H7具有ter(telluriteresistance ,ter)基因簇。所检测的 34株产志贺毒素的大肠杆菌O15 7∶H7有 33株具有ter基因簇 ,所检测的 18株不产生志贺毒素的大肠杆菌O15 7,4株具有ter基因簇 ,但是没有该毒力岛的其它基因。ter基因阳性的 33株菌中 ,亚碲酸钾的抗性水平一般较高 ,4株在 75 0 μg ml以上 ,19株为5 0 0~ 75 0 μg ml,10株为 2 5 0~ 5 0 0 μg ml;而 4株ter基因簇阴性的菌株 ,也表现了高水平的耐药性 ,其抗性水平均为 5 0 0~ 75 0 μg ml。其它ter基因簇阴性的菌株 ,2 0株耐药性为 5~ 10 μg ml,1株 10~ 2 0 μg ml,6株 2 0~ 5 0 μg ml,2株 5 0~ 10 0 μg ml,1株 10 0~ 2 5 0 μg ml。结论 ter基因簇在产志贺毒素的大肠杆菌O15 7∶H7中高频率存在 ,而在其它病原菌中没有检测到。高水平的亚碲酸钾抗性可以作为选择性分离产志贺? 展开更多
关键词 产志贺毒素大肠杆菌 o157:h7 亚碲酸钾抗性 基因 分布 抗性水平
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大肠杆菌O157∶H7基因组分析的启示 被引量:6
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作者 徐建国 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期237-238,共2页
关键词 毒力岛 志贺毒素 溶血素 大肠杆菌o157:h7 基因
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