血清FOXO3a、NLRP3、sICAM-1水平在冠心病合并高尿酸血症患者中的意义

目的探讨冠心病合并高尿酸血症(HUA)患者叉头转录因子O亚家族成员3a(FOXO3a)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)水平变化的意义。方法选取河南科技大学第一附属医院2021年1月至2022年8月收治的156例冠心病患者为研究对象,根据尿酸水平分为HUA组(62例)和UA正常组(94例)。比较两组一般临床资料及FOXO3a、NLRP3、sICAM-1水平,分析FOXO3a、NLRP3、sICAM-1水平与临床资料中有统计学差异指标及UA水平相关性,采用logistic回归分析影响冠心病合并HUA的危险因素,以受试者工作特征(ROC)曲线分析FOXO3a、NLRP3、sICAM-1水平联合检测对冠心病合并HUA的诊断价值。结果HUA组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平高于UA正常组(P<0.05);HUA组FOXO3a、NLRP3、sICAM-1水平高于UA正常组(P<0.05);相关性分析发现,FOXO3a、NLRP3、sICAM-1水平与TC、TG、LDL-C、UA水平均呈正相关(P<0.05);logistic回归分析发现,TC(>5.04 mmol·L^(-1))、TG(>1.88 mmol·L^(-1))、LDL-C(>2.53 mmol·L^(-1))、FOXO3a(>4.65μg·L^(-1))、sICAM-1(>195.73μg·L^(-1))、NLRP3(>1322.12 ng·L^(-1))水平是冠心病患者合并HUA的危险因素(P<0.05);ROC分析发现,FOXO3a、sICAM-1、NLRP3水平联合诊断冠心病合并HUA的曲线下面积(AUC)为0.811,敏感度、特异度分别为95.16%、67.02%,优于各指标单一指标诊断,具有较高诊断效能(P<0.05)。结论FOXO3a、NLRP3、sICAM-1参与冠心病合并HUA发生过程,且在临床诊断冠心病合并HUA方面具有较高效能。

叉头框蛋白O3a在失神经肌萎缩中的研究进展

骨骼肌失神经后,肌纤维直径和横截面积减小,导致肌肉质量下降。实验证明,叉头框蛋白O3a(FoxO3a)作为叉头框转录因子亚家族O重要成员之一,对失神经肌萎缩有着重要的调节作用。本文从FoxO3a的结构和功能、上游翻译后修饰和下游靶基因的调控方面,阐述其作为重要的治疗靶点在失神经肌萎缩中的重要意义,旨在未来延缓失神经肌萎缩方面提供精准的理论依据并寻求新的靶点和治疗方法。

血清HDAC6和FoxO3a蛋白水平在预测妊娠期糖尿病并发重度子痫前期中的临床价值

目的探究血清组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)和叉头框O3a(FoxO3a)蛋白水平在预测妊娠期糖尿病(GDM)并发重度子痫前期(sPE)中的临床价值。方法选取2021年7月至2022年7月在广元市第一人民医院分娩的224例单胎妊娠孕妇作为研究对象。其中GDM孕妇78例为GDM组,GDM并发sPE孕妇76例为GDM-sPE组,正常孕妇70例为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清HDAC6和FoxO3a的蛋白水平;采用Pearson法分析GDM-sPE患者血清HDAC6和FoxO3a的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析HDAC6和FoxO3a对GDM-sPE的预测价值。采用Logistic回归分析GDM-sPE发生的影响因素。结果GDM-sPE组HDAC6和FoxO3a水平均显著高于GDM组和对照组,GDM组显著高于对照组(P<0.05)。相关性分析显示,GDM-sPE患者血清HDAC6和FoxO3a的表达水平呈正相关(r=0.569,P<0.001)。ROC曲线分析显示,二者联合预测GDM-sPE发生的曲线下面积(AUC)高于HDAC6和FoxO3a单独预测的AUC(Z=24.214,P<0.001;Z=19.601,P<0.001)。Logistic回归分析显示,FBG、HDAC6和FoxO3a是GDM-sPE发生的影响因素(P<0.05)。结论GDM-sPE患者血清HDAC6和FoxO3a表达水平均显著升高,二者联合对GDM-sPE具有一定的预测价值。

重型颅脑损伤病人血清FOXO3a和TREM-1动态水平变化及临床意义研究

目的:探讨叉头蛋白O3a(FOXO3a)和髓系细胞触发受体-1(TREM-1)在重型颅脑损伤病人血清中动态水平变化及其临床意义。方法:选取82例重型颅脑损伤病人作为观察组,同期80名健康体检志愿者作为对照组。采用酶联免疫吸附法测定受试者血清FOXO3a、TREM-1水平。根据病人伤后28 d格拉斯哥昏迷评分将病人分为预后良好组60例和预后不良组22例。比较观察组病人确诊后第1天与对照组受试者体检当日血清FOXO3a、TREM-1水平;观察重型颅脑损伤病人血清FOXO3a、TREM-1水平动态变化;比较不同预后重型颅脑损伤病人临床资料;分析血清FOXO3a、TREM-1水平对重型颅脑损伤病人预后的预测价值。结果:与对照组受试者相比,观察组病人确诊后第1天血清FOXO3a水平明显降低(P<0.01),TREM-1水平明显升高(P<0.01)。重型颅脑损伤病人确诊后第3天血清FOXO3a水平高于确诊后第1、7天(P<0.05),TREM-1水平低于确诊后第1、7天(P<0.05)。与预后良好组相比,预后不良组重型颅脑损伤病人确诊后第1、3、7天血清FOXO3a水平明显降低(P<0.01),TREM-1水平明显升高(P<0.01)。预后良好与预后不良病人确诊后第3天血清FOXO3a水平均高于确诊后第1、7天,TREM-1水平均低于确诊后第1、7天(P<0.05)。ROC曲线分析显示,确诊后第3天FOXO3a、TREM-1、二者联合预测重型颅脑损伤病人预后的AUC分别为0.776、0.762、0.832,二者联合的预测价值优于FOXO3a、TREM-1单独预测(Z=1.94、1.87,P<0.05)。结论:重型颅脑损伤病人血清FOXO3a水平随时间先升高再降低,TREM-1水平先降低再升高,均与病人预后有关,且二者联合可较好对重型颅脑损伤病人预后进行预测。

人脐带间充质干细胞通过GDF-15/FOXO3a治疗小鼠卵巢功能不全的研究

目的:探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)改善卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)小鼠的卵巢损伤及机制。方法:采用足底注射透明带3多肽(zona pellucida3 peptide,pZP3)方法构建POI小鼠模型,将小鼠分为对照组、佐剂对照组、pZP3组和hUC-MSCs组,每组10只。以阴道涂片监测动情周期、以酶联免疫吸附测定检测血清卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)和雌二醇(estradiol,E_(2))水平,以HE染色观察卵巢组织学,以蛋白质印迹(Western blotting)检测叉头框转录因子O3a(forkhead box O3a,FOXO3a)、p-FOXO3a、p53、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、Bax表达水平,以实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测POI的标志物骨形态发生蛋白15(bone morp hogenetic protein 15,BMP15)、抗米勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)、WNT、卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)以及促炎因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和IL-1β的表达水平,以RNA-seq检测生长分化因子-15(growth differentiation factor-15,GDF-15)的表达水平。通过环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)构建体外模型。结果:(1)造模6周后,与对照组相比,pZP3组和hUC-MSCs组动情周期出现紊乱,且血清FSH水平升高,血清E_(2)水平降低,表明模型构建成功。(2)相较于对照组,pZP3组闭锁卵泡增加,原始卵泡数目降低,hUC-MSCs干预后小鼠原始卵泡比例和数目均高于pZP3组(P<0.05)。(3)与对照组相比,pZP3组卵巢中凋亡蛋白p53、Bax表达水平上调,hUC-MSCs干预后小鼠凋亡蛋白p53、Bax表达较pZP3组下调(均P<0.05);pZP3组体内Caspase-3变化与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。pZP3组炎症因子IL-1β、TNF-α表达上调,hUC-MSCs干预小鼠的IL-1β、TNF-α表达较pZP3组显著下调(均P<0.05)。(4)pZP3组体内Treg细胞数量降低(P<0.01),hUC-MSCs干预后小鼠Treg细胞数量较pZP3组升高(P<0.0001)。pZP3组卵巢组织中BMP15、AMH、WNT以及FSHR的mRNA表达水平较对照组降低,hUC-MSCs干预后小鼠的表达水平较pZP3组升高(均P<0.05)。(5)pZP3组FOXO3a磷酸化水平高于对照组(P<0.0001),hUC-MSCs干预后,FOXO3a磷酸化水平较pZP3组下降(P<0.0001)。测序结果提示,pZP3组GDF-15表达上调,hUC-MSCs组中GDF-15表达较pZP3组下调。结论:POI小鼠体内GDF-15和p-FOXO3a表达上调,h UC-MSCs通过下调GDF-15的表达和降低FOXO3a的磷酸化水平,改善POI小鼠的卵巢组织形态,实现对POI小鼠的治疗作用。

颅脑外伤患儿血清FoxO3a和Cav-1水平变化及其临床意义

目的探讨颅脑外伤患儿血清叉头框转录因子O3a(FoxO3a)和陷窝蛋白-1(Cav-1)水平变化及其临床意义。方法选取2020年12月—2022年11月南京医科大学附属儿童医院颅脑外伤患儿107例,根据格拉斯哥昏迷评分(GCS)分为轻度组(49例)、中度组(37例)和重度组(21例)。收集所有患儿临床资料,并检测血清FoxO3a、Cav-1水平。对所有患儿从入院当日起连续随访60 d,根据预后情况分为预后不良组和预后良好组。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价FoxO3a、Cav-1判断颅脑外伤患儿预后的效能,采用多因素Logistic回归分析评估颅脑外伤患儿预后不良的危险因素。结果轻度组、中度组和重度组血清FoxO3a和Cav-1水平均依次升高(P<0.001)。预后不良组血清FoxO3a和Cav-1水平均显著高于预后良好组(P<0.001)。血清FoxO3a和Cav-1单项检测和联合检测判断颅脑外伤患儿预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.764、0.843、0.908。预后不良组入院GCS得分≤8分、合并其他脏器损伤、受伤至入院时间、D-二聚体(DD)、白细胞(WBC)计数、血小板(PLT)计数均高于预后良好组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,入院GCS评分≤8分、合并其他脏器损伤、FoxO3a≥6.31 ng·mL^(-1)、Cav-1≥23.15 ng·mL^(-1)是颅脑外伤患儿预后不良的危险因素[比值比(OR)值分别为1.943、2.061、2.649、3.337,95%可信区间(CI)分别为1.414~2.669、1.474~2.881、1.711~4.100、2.076~5.362,P<0.001]。结论血清FoxO3a、Cav-1水平异常与颅脑外伤患儿的病情和预后密切相关,FoxO3a高水平和/或Cav-1高水平是颅脑外伤患儿预后不良的危险因素。

基于FOXO3a/Nrf2信号通路探讨尿毒症骨骼肌自噬的分子机制

目的:探讨叉头盒(forkhead box,FOX)O蛋白3a(forkhead box O3a,FOXO3a)/转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)信号通路的调节尿毒症骨骼肌自噬的机制。方法:24只小鼠随机分为假手术组(Sham组)、慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)组和CKD+AST-120(AST)组,每组8只。通过5/6肾切除术建立CKD模型。在肾切除术后4周,CKD+AST组小鼠给予含AST-120粉末(尿毒毒素的木炭吸附剂)饮食,持续8周。透射电子显微镜观察腓肠肌组织中的自噬溶酶体。C2C12小鼠成肌细胞分为对照(Control,Con)组、硫酸吲哚酚(indophenol sulfate,IS)组、IS+si-FOXO3a组。实时RT-PCR和蛋白质印迹法分析FOXO3a表达情况。Giemsa染色对C2C12肌管直径进行量化。结果:与CKD组相比,CKD+AST组血清IS水平和腓肠肌组织中FOXO3a表达、自噬溶酶体的数量明显降低(P<0.05),以及腓肠肌、胫骨前肌、比目鱼肌质量明显增加(P<0.05)。与IS组相比,IS+si-FOXO3a组C2C12细胞中FOXO3a、肌肉萎缩盒基因(Muscle Atrophy F-box,atrogin-1)肌肉环脂蛋白1(muscle RING-finger protein-1,MuRF-1)的表达和细胞自噬通量明显降低(P<0.05),以及细胞直径明显增加(P<0.05)。与Sham组相比,CKD组小鼠腓肠肌组织中Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,KEAP1)表达明显升高(P<0.05),和NRF2表达明显降低(P<0.05)。AST治疗逆转了CKD小鼠腓肠肌组织中这些蛋白的变化。si-NRF2逆转了FOXO3a敲低对自噬流量的抑制作用。结论:IS可能通过持续刺激FOXO3a-KEAP1-NRF2轴促进骨骼肌过度自噬,参与尿毒症少肌症的发病机制。

基于SIRT1/FOXO3a信号通路探讨“温阳通脉”灸法对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠炎症反应的影响

【目的】探讨“温阳通脉”灸法防治动脉粥样硬化(AS)的作用机制。【方法】将10只饲喂普通饲料的C57BL/6J小鼠设为空白组;将30只ApoE^(-/-)小鼠给予高脂饲料喂养建立动脉粥样硬化模型,随机分为模型组、辛伐他汀组和艾灸组,每组10只。于造模第1天开始干预,艾灸组小鼠给予膻中、神阙、内关、血海穴艾灸,辛伐他汀组给予辛伐他汀蒸馏水混悬液灌胃,共干预12周。给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠胸主动脉病理形态结构,透射电镜观察小鼠胸主动脉内皮细胞超微结构,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)水平,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测胸主动脉沉默信息调节因子1(SIRT1)和叉头框转录因子O3a(FOXO3a)的mRNA表达水平,Western Blot法检测胸主动脉SIRT1和FOXO3a蛋白表达水平。【结果】与空白组比较,模型组小鼠胸主动脉及血管内皮细胞病理变化明显,血清炎症因子TNF-α、ICAM-1和VCAM-1水平升高(P<0.05或P<0.01),胸主动脉SIRT1 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.01),FOXO3a mRNA和蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,辛伐他汀组和艾灸组小鼠的胸主动脉及血管内皮细胞结构得到明显改善,血清TNF-α、ICAM-1、VCAM-1水平均降低(P<0.05),胸主动脉SIRT1 mRNA和蛋白表达量增加(P<0.05或P<0.01),FOXO3a mRNA和蛋白表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。辛伐他汀组和艾灸组上述指标组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】“温阳通脉”灸法可通过调控SIRT1/FOXO3a信号通路减轻炎症反应防治小鼠AS。

叉头框蛋白O3a在神经退行性疾病中靶向研究进展

神经退行性疾病是大脑或脊髓内特定神经元细胞群的丢失或进程性病变而导致的不可逆的神经功能障碍性疾病。神经炎症、氧化应激、线粒体功能障碍、兴奋性毒性和蛋白质聚集可促进神经退行性病变过程。叉头框蛋白O3a(FoxO3a)是Forkhead转录因子FoxO亚家族的一个重要成员,通过磷酸化、泛素化介导的降解、微信号转导以及相关蛋白通路,在细胞增殖、凋亡、自噬、活性氧(ROS)解毒方面发挥着重要作用,与神经退行性疾病的发生与发展息息相关。本文重点对近年来FoxO3a在神经退行性疾病中的作用机制及相关通路的靶向作用进行阐述,旨在为该病的防治提供新的研究思路。

FOXO3a在子宫内膜样癌中的表达及意义

目的观察叉形头转录因子O3a(forkhead box O transcription factor 3a,FOXO3a)在子宫内膜样癌中的表达特征,分析其在不同临床及病理特征中的表达差异,探讨其对预后的判断价值。方法选取2016年1月至2018年5月期间在华北理工大学附属医院确诊为子宫内膜样癌并行手术根治的患者48例作为观察组,选取同期确诊为子宫内膜单纯性增生的子宫内膜组织32例作为对照组,选取同期确诊为增生期的子宫内膜组织22例作为正常对照组,应用免疫组化EnVision法检测三组中FOXO3a的蛋白表达水平。FOXO3a与术后生存时间的关系应用Kaplan-meier进行生存分析;应用The Cancer Genome Atlas(TCGA)数据库进行生信分析,观察FOXO3a mRNA在子宫内膜样癌组织和正常组织中FOXO3a mRNA表达的差异及其与临床病理特征的相关性;应用UCSC XENA工具分析FOXO3a mRNA表达水平与总体生存率的相关性。结果FOXO3a在子宫内膜样癌组织中表达的阳性率明显低于子宫内膜单纯性增生和增生期子宫内膜组织(FOXO3a在三组中的阳性率分别为14.58%、75%和95.5%),差异有统计学意义(P=0.000);FOXO3a在子宫内膜样癌不同年龄(P=0.311)、分化程度(P=0.730)、有无癌结节/淋巴结转移(P=0.902)、不同浸润深度(P=0.919)、增殖指数(P=0.165)及是否存在错配修复缺陷(P=1.000)的分组中差异无统计学意义(P>0.05);生存分析显示FOXO3a蛋白表达量与子宫内膜样癌术后总体生存时间无相关性(χ^(2)=0.2526,P=0.6152)。生信分析显示子宫内膜癌组织中FOXO3a mRNA的表达具有降低趋势(P<0.01),并与年龄显著相关(P=0.044),而与组织学分级、临床分期、总体生存期均无明显相关性(P>0.05)。结论FOXO3a在子宫内膜样癌组织中的表达下调,参与肿瘤的形成;子宫内膜样癌中FOXO3a的表达水平与患者的预后无明显相关性。

2型糖尿病周围神经病变患者血清FOXO3a、PDGF表达及临床意义

目的 探究2型糖尿病周围神经病变(DPN)患者血清叉头盒O类转录因子-3a(FOXO3a)、血小板源性生长因子(PDGF)表达及临床意义。方法 选取2020年12月—2022年12月中部战区总医院接收的110例2型糖尿病患者作为研究对象。根据是否并发DPN将患者分为无并发症组(NDPN组)和周围神经病变组(DPN组),分别有45和65例,随机选取同期在该院体检的健康人群30例作为对照组(NC组)。采集受试者的一般资料及血脂、血糖等相关生化指标。采用酶联免疫吸附试验检测3组受试者血清FOXO3a、PDGF水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清FOXO3a、PDGF水平对2型糖尿病发生DPN的预测价值。结果 各组年龄、病程比较,差异均有统计学意义(P <0.05)。各组性别构成、体质量指数、舒张压、收缩压、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、肌酐、尿素氮水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。NDPN组与DPN组动脉粥样硬化、视网膜病变、降压药使用史、注射胰岛素、服用二甲双胍构成比比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。各组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、空腹C肽、踝肱指数比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。NDPN组、DPN组糖化血红蛋白、空腹血糖水平较NC组高(P <0.05),DPN组运动神经传导速度、感觉神经传导速度水平较NDPN组低(P <0.05)。NDPN组、DPN组FOXO3a、PDGF水平较NC组高(P <0.05),DPN组FOXO3a、PDGF水平较NDPN组高(P <0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清FOXO3a、PDGF以及联合诊断糖尿病患者是否发生DPN的曲线下面积分别为0.695(95%CI:0.590,0.779)、0.636(95%CI:0.539,0.726)、0.732(95%CI:0.639,0.812),敏感性分别为80.00%(95%CI:0.733,0.848)、92.31%(95%CI:0.856,0.977)、89.23%(95%CI:0.838,0.954),特异性分别为55.56%(95%CI:0.438,0.654)、33.33%(95%CI:0.238,0.452)、51.11%(95%CI:0.416,0.597)。结论 2型糖尿病DPN患者体内血清FOXO3a、PDGF水平异常,提示其与2型糖尿病周围神经病变发生、发展有相关性。

阿魏酸钠通过SIRT1/FOXO3A改善血管性痴呆大鼠学习记忆障碍的机制研究

目的探究阿魏酸钠在血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠中的神经保护作用及其对前额叶皮质沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SRIT1)和叉头框转录因子O3A(forkhead box transcription factor O3A,FOXO3A)表达的影响。方法将32只雄性SD大鼠随机分成4组,每组8只。模型组和阿魏酸钠组大鼠行双侧颈总动脉栓塞;假手术组进行相同的手术操作,但不做结扎处理;正常组不做处理。阿魏酸钠组连续4周灌胃阿魏酸钠溶液(100 mg/kg),其余3组接受相同体积的生理盐水灌胃。通过Morris水迷宫、尼氏染色、Western Blot和免疫组织化学染色法观察比较各组大鼠行为学、细胞形态及SIRT1和FOXO3A蛋白的表达情况。结果正常组和假手术组神经元呈现较完整的形态结构。相较于正常组,模型组大鼠逃避潜伏期显著延长、穿越平台次数明显减少(P<0.05),细胞核固缩,SIRT1表达水平显著下降(P<0.05),FOXO3A表达显著上升(P<0.05);与模型组相比,阿魏酸钠组细胞形态得以改善,逃避潜伏期和FOXO3A蛋白表达均降低(P<0.05),穿台次数和SIRT1蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论阿魏酸钠通过调节SIRT1/FOXO3A改善大鼠学习记忆能力,为VD治疗提供了一定的研究基础。

丹皮酚对去卵巢骨质疏松大鼠叉头框蛋白O3a/Wnt信号通路及椎骨密度的影响

背景:丹皮酚可抑制炎症,减轻慢性骨关节炎临床症状,作为一种不良反应小、更为安全的天然药物成分,探讨其对骨质疏松症的治疗作用具有重要的临床意义。目的:探究丹皮酚对去卵巢骨质疏松大鼠叉头框蛋白O3a(forkhead box O3a,FoxO3a)/Wnt信号通路及椎骨密度的影响。方法:雌性SD大鼠随机分为6组,每组10只。假手术组仅切除卵巢旁部分脂肪组织;其余50只大鼠均采用双侧卵巢摘除法制备去卵巢骨质疏松大鼠模型,模型制备成功后分为模型组、雌激素组[炔雌醇10μg/(kg·d)]、丹皮酚低、中、高剂量组[丹皮酚125,250,500 mg/(kg·d)],每组10只,灌胃给药;假手术组、模型组灌胃等量生理盐水,持续干预12周。ELISA法测定血清雌激素、骨保护素、骨钙素水平;采用双能X射线动物骨密度测定仪检测大鼠股骨及椎骨骨密度;采用骨科生物力学测试仪检测大鼠股骨及椎骨生物力学指标:弹性模量、最大载荷、屈服载荷;实时荧光定量PCR检测椎骨组织FoxO3a、Wnt2 mRNA表达水平;免疫印迹法检测椎骨组织FoxO3a、Wnt2及核内β-catenin蛋白表达。结果与结论:①治疗后,与假手术组比较,模型组L4,5骨密度、弹性模量、最大载荷、屈服载荷、血清雌二醇、骨保护素水平、椎骨组织Wnt2 mRNA及蛋白水平、核内β-catenin蛋白水平均显著降低(P<0.05),骨钙素水平、椎骨组织FoxO3a mRNA及蛋白水平显著增加(P<0.05);②与模型组比较,丹皮酚低、中、高剂量组大鼠L4,5骨密度、弹性模量、最大载荷、屈服载荷、血清雌二醇、骨保护素水平、椎骨组织Wnt2 mRNA及蛋白水平、核内β-catenin蛋白水平依次增加(P<0.05),血清骨钙素水平、椎骨组织FoxO3a mRNA及蛋白水平依次降低(P<0.05),且丹皮酚高剂量组均优于雌激素组(P<0.05);③提示丹皮酚可增加去卵巢骨质疏松大鼠椎骨骨密度,改善其骨生物力学状况,减轻骨质疏松,该作用可能与抑制FoxO3a、促进Wnt2/β-catenin通路激活有关。

PI3K/AKT信号通路参与AG1478对肺癌细胞中FOXO3a分子的上调及核转位

目的:探讨表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)AG1478对非小细胞肺癌细胞(NSCLC)中叉头转录因子O3a(FOXO3a)表达及其在细胞核质分布的调控及分子机制。方法:Western blot法检测AG1478及EGFR下游信号通路抑制剂LY294002、U0126、AG490作用后A549细胞中FOXO3a的表达及其在细胞核质分布情况。瞬时转染AKT、FOXO3a小干扰RNA(siRNA),RT-PCR及Western blot检测转染效率及相关蛋白的表达改变。结果:AG1478呈时间依赖性诱导FOXO3a表达上调并促进其核转位。与U0126、AG490相比,PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002呈时间依赖性抑制p-FOXO3a的表达,促进其核转位;沉默AKT后,p-AKT及p-FOXO3a分子的表达明显下调。结论:AG1478可能通过PI3K/AKT信号通路上调FOXO3a的表达并促进其核转位,进而下调FOXM1及下游增殖蛋白的表达,抑制肺癌细胞的增殖,提示FOXO3a为肺癌治疗及药物开发的重要靶点。

有氧运动通过调节FoxO3a磷酸化及亚细胞定位减轻小肠缺血再灌注损伤

目的探讨有氧运动通过调控叉头框家族蛋白O3a(forkhead box protein O3a,FoxO3a)活性在C57BL/6小鼠小肠缺血/再灌注(II/R)损伤中的保护作用及机制。方法6~8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为静息+假手术(SS)组、静息+II/R(SI)组、游泳训练+II/R(TI)组和游泳训练+II/R+FoxO3a磷酸化激活剂SC79(TSC)组。TI和TSC组进行为期5周的游泳训练,所有小鼠于训练结束后3 d行II/R术,SS组不夹闭血管,TSC组小鼠于再灌注前1 h腹腔注射0.04 mg/g SC79。再灌注2 h后处死小鼠取标本,苏木精-伊红染色观察小肠组织病理改变,DHE染色检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。同时检测小肠组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量以及过氧化氢酶(catalase,CAT)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性。Western blot法检测Ser253磷酸化叉头框家族蛋白O3a(P-FoxO3a^(Ser253))、FoxO3a表达。qRT-PCR检测抗氧化基因锰超氧化物歧化酶(Manganese superoxide dismutase,MnSOD)和过氧化物酶体增殖物活化受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator 1α,PGC1α)的表达。结果II/R前行有氧运动干预,通过发挥抗氧化应激作用,减轻II/R损伤。与SI组小鼠相比,TI组小鼠小肠组织细胞质内P-FoxO3a^(Ser253)表达水平下调(P<0.01),细胞核内FoxO3a含量提高(P<0.01),抗氧化基因MnSOD和PGC1α的表达增加(P<0.05和P<0.01),小肠组织ROS生成减少(P<0.01),氧化应激产物MDA含量明显下降(P<0.05),抗氧化酶CAT和SOD含量增加(P<0.05和P<0.01);再灌注前腹腔注射SC79后,上述有氧运动减轻II/R损伤作用被抵消。结论有氧运动通过调节FoxO3a磷酸化及亚细胞定位减轻C57BL/6小鼠II/R损伤。

foxo3a在脓毒血症患者外周血单个核细胞的表达变化及意义

目的检测叉头蛋白O3a(forkhead box O3a,foxo3a)在脓毒血症患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)的表达变化,并探讨其在脓毒血症发生过程中的作用。方法分离急性梗阻性化脓性胆管炎(acute obstructive suppurative cholangitis,AOSC)患者(n=27)治愈1周后的PBMC和血清,以及健康志愿者(n=12)的PBMC和血清,分别用蛋白印记法(western blotting,WB)和实时荧光定量聚合酶链反应法(qRT-PCR)检测PBMC中foxo3a、核因子κB p65(NF-κB p65)和核转录因子κB抑制因子(IκB)和蛋白及基因的表达和磷酸化水平;并用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中脂多糖(LPS)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素10(IL-10)的含量。结果 27例AOSC患者血清中LPS、TNF-α和IL-10的含量明显高于治愈后1周及12例健康志愿者。同时,AOSC患者foxo3a的蛋白和基因的表达量明显低于健康志愿者,但是在治愈1周后,foxo3a的蛋白和基因的含量恢复到正常水平,p-foxo3a与foxo3a的表达呈负相关;另外,NF-κB p65在发病初期增高,治愈1周后基本恢复正常,而IκB及p-IκB表达与foxo3a与p-foxo3a变化相似。这些结果说明在AOSC中foxo3a的磷酸化过程参与调控NF-κB的激活及机体炎症因子的失衡。结论 foxo3a在脓毒血症发生过程中可通过磷酸化降解IκB或直接激活NF-κB,可作为缓解脓毒血症发生初期的治疗靶点之一。

FoxO3a基因rs2253310位点多态性与2型糖尿病的相关性

目的观察辽宁地区2型糖尿病患者Fox O3a基因rs2253310位点多态性,探讨rs2253310多态性与2型糖尿病的相关性。方法纳入2型糖尿病患者374例(病例组),非糖尿病健康志愿者283例(对照组)。检测并比较两组Fox O3a基因rs2253310单核苷酸多态性。测算不同rs2253310基因型患者的BMI,测量收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、空腹血糖(FBG)。结果病例组BMI、SBP、DBP、FBG高于对照组(P均<0.05)。两组Fox O3a基因rs2253310基因型GG纯合子为主,等位基因以G基因为主;病例组rs2253310位点G等位基因频率为73.4%、GG基因型频率为54.01%,对照组分别为74.56%、55.12%,两组相比,P均>0.05。病例组中不同rs2253310基因型患者BMI、SBP、DBP、FBG差异无统计学意义。结论 Fox O3a基因rs2253310位点多态性与2型糖尿病无相关性。

FoxO3a在三氧化二砷诱导的人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中的表达和意义

目的探讨FoxO3a在三氧化二砷(As2O3)诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡过程中的表达变化及其可能的机制。方法将不同浓度的As2O3(2.0、4.0、8.0μmol/L)与MCF-7细胞共同培养24h后,采用流式细胞术检测MCF-7细胞凋亡;采用免疫细胞化学及Western blot技术检测FoxO3a和Caspase-3蛋白的表达,各实验均设相应的阴性对照组。结果经不同浓度As2O3作用后,MCF-7细胞凋亡率逐渐增加,分别为(6.26±0.94)%、(9.30±1.63)%和(13.02±3.82)%,且呈剂量依赖关系(rs=0.949,P<0.01);免疫细胞化学染色显示FoxO3a蛋白胞核表达增强,且Caspase-3蛋白表达增强(P<0.05);Westernblot条带显示FoxO3a蛋白表达水平逐渐升高,且激活型Caspase-3蛋白表达水平逐渐升高(P<0.05)。结论 As2O3可通过增强FoxO3a蛋白的活性,激活Caspase-3蛋白的表达而诱导MCF-7细胞凋亡。

结直肠癌组织中CCDC12、FOXO3a、Twist、MMP-9的表达变化观察

目的观察结直肠癌组织中卷曲螺旋结构域蛋白12(CCDC12)、转录因子叉头框蛋白O3a(FOXO3a)、Twist蛋白、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的变化,同时探讨上述四指标与结直肠癌患者病情之间的关系。方法老年结直肠癌患者82例,取患者的结直肠癌组织及癌旁正常肠黏膜组织,采用免疫组化SP法检测癌组织及癌旁组织中的CCDC12、FOXO3a、Twist、MMP-9蛋白,比较癌组织及癌旁组织中CCDC12、FOXO3a、Twist、MMP-9蛋白阳性表达率,比较不同临床病理参数的结直肠癌患者癌组织中CCDC12、FOXO3a、Twist、MMP-9蛋白阳性表达率。采用Kendall相关分析结直肠癌组织中CCDC12、FOXO3a、Twist与MMP-9蛋白阳性表达率的关系。结果结直肠癌组织中CCDC12、FOXO3a、Twist、MMP-9蛋白阳性表达率分别为75.61%、52.44%、63.41%、79.27%,癌旁组织中分别为19.51%、93.90%、17.07%、23.17%,与癌旁组织比较,结直肠癌组织中CCDC12、Twist、MMP-9蛋白阳性表达率高,FOXO3a蛋白阳性表达率低(P均<0.05)。分化程度高、TNM分期高、存在浆膜浸润、存在淋巴结转移的结直肠癌患者癌组织中CCDC12、FOXO3a、Twist、MMP-9蛋白阳性表达率高(P均<0.05)。结直肠癌组织中的CCDC12、Twist蛋白表达与MMP-9蛋白表达呈正相关(r分别为0.368、0.353,P<0.01),FOXO3a蛋白与MMP-9蛋白表达呈负相关(r=-0.205,P<0.01)。结论结直肠癌组织中的CCDC12、Twist、MMP-9蛋白阳性表达率升高,FOXO3a蛋白阳性表达率降低;CCDC12、FOXO3a、Twist、MMP-9蛋白阳性表达率与结直肠癌患者病情有关。直肠癌组织中CCDC12、Twist与MMP-9蛋白表达有正相关关系,FOXO3a与MMP-9蛋白表达有负相关关系。

黄芪莪术药对调控Akt/FoxO3a信号通路对胃癌前病变的影响研究

目的 基于蛋白激酶B(Akt)/叉头状转录因子O亚族3(FoxO3a)通路探究黄芪-莪术药对逆转胃癌前病变的机制。方法 取48只雄性Wistar大鼠,随机选择12只作为正常组,其余大鼠采用甲基硝基亚硝胍(MNNG)复合造模法建立胃癌前病变模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、黄芪-莪术组、叶酸组,每组10只。正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,黄芪-莪术组给予黄芪-莪术水煎浓缩液3.6 g/kg灌胃,叶酸组给予叶酸1.8 mg/kg灌胃,均1次/d,连续灌胃10周。观察大鼠日常生活情况、体重、精神状态,HE染色观察胃黏膜组织病理形态,RT-PCR法检测胃组织中Akt1、FoxO3a、Beclin1、LC3-Ⅱ、p62 mRNA表达情况,Western blot法检测胃组织中Akt1、FoxO3a、LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠体重、食量、活力下降,精神变差;胃黏膜见腺体增大,腺体间细胞增生,少量炎症细胞浸润;胃组织中Akt1、p62 mRNA相对表达量和Akt1、LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),Beclin1、FoxO3a、LC3-ⅡmRNA相对表达量和FoxO3a蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。与模型组比较,黄芪-莪术组和叶酸组大鼠精神、食量及活力均有好转;胃黏膜腺体细胞排列较为整齐紧密,未见出血、炎症细胞浸润;胃组织中Akt1、p62 mRNA相对表达量和Akt1、LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),Beclin1、FoxO3a、LC3-ⅡmRNA相对表达量和FoxO3a蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。结论 黄芪-莪术药对可一定程度逆转大鼠胃癌前病变,其可能是通过影响Akt/FoxO3a信号通路,激活增强体内自噬系统从而清除胃癌前病变细胞实现的。