绵羊OAS1基因PCR的优化条件

为了研究绵羊OAS1基因片段的PCR最佳反应条件,试验采集绵羊外周血液从中分离出白细胞,并对OAS1基因片段的PCR扩增条件进行优化,通过对引物量、退火温度、模板c DNA的纯度进行筛选,建立最优反应体系。结果表明:PCR反应的最佳cDNA量为2μL,最佳上、下游引物量为1μL,最佳退火温度为60℃。采用上述条件获得的PCR产物,OAS1基因片段的目的条带清晰、明亮,非特异性产物较少。

ISG15和OAS1在奶牛早期妊娠阶段外周血中的表达规律

本研究旨在揭示干扰素刺激基因ISG15和OAS1在中国荷斯坦奶牛早期妊娠阶段外周血中的表达规律,为利用干扰素刺激基因进行早期妊娠诊断提供理论和方法上的指导。试验用青年母牛共27头,其中自然发情牛10头,同期发情牛17头;人工授精后0、14、18、21和28d采集外周血并分离总白细胞或白细胞亚类(淋巴细胞、单核细胞、NK细胞);采用荧光定量PCR检测ISG15和OAS1的相对表达量。结果表明:人工授精后18d妊娠牛外周血中ISG15和OAS1的相对表达量均显著高于空怀牛;ISG15在妊娠牛中一致上调(平均3.92倍),空怀牛中一致下调(平均1.46倍);OAS1在妊娠牛中平均上调3.49倍,空怀牛平均下调1.28倍。自然发情条件下,妊娠牛外周血中ISG15和OAS1的相对表达量均显著高于空怀牛,同期发情条件下两个基因在表达趋势上与之类似,但差异不显著;进一步分析显示:人工授精后18dOAS1在妊娠牛淋巴细胞中的表达显著高于空怀牛,其中妊娠牛中OAS1一致上调表达,平均上调2.14倍,空怀牛中OAS1一致下调,平均下调1.80倍。研究提示:人工授精后第18天妊娠牛与空怀牛之间ISG15的差异表达比OAS1更明显;自然发情状态下,妊娠牛与空怀牛之间两个基因差异表达情况比同期发情状态下更明显;相对于外周血总白细胞,妊娠牛与空怀牛外周血淋巴细胞中ISG15、OAS1的差异表达倍数更低。综上表明,利用外周血中ISG15的表达水平可望能够在人工授精后18d对自然发情奶牛较为准确地做出早期妊娠诊断;对于ISG15、OAS1在外周血免疫细胞亚类中的表达分析,为深入研究奶牛早期妊娠识别的分子机制奠定了基础。

OAS1基因SNP对儿童手足口病易感性和疾病严重性的影响及临床意义

目的探讨OAS1基因单核苷酸多态性(SNP)对儿童手足口病(HFMD)易感性和疾病严重程度的影响及其临床意义,为HFMD的防治提供依据。方法收集2014年12月至2019年12月我院住院治疗的340例儿童HFMD患儿,其中重症HFMD患儿141例,轻型HFMD 199例,另外以120例健康体检儿童作为正常对照组,采集外周静脉血,提取基因组DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术检测OAS1 rsl0774671和rs2660单核苷酸多态位点的分布情况,并用凝胶电泳和测序进行验证,分析各个基因位点多态性与HFMD易感性、严重程度的相关关系。结果OAS1 rs10774671 GG基因型和G等位基因频率在CA16组中明显高于正常对照组(P=0.000),轻症HFMD OAS1 rs10774671位点GG基因型频率显著高于重症HFMD(P=0.032);OAS1 rs10774671位点GG基因型分布男童显著多于女童(P=0.011)。OAS1 rs2660 AG基因型和G等位基因频率在EV71组中明显高于正常对照组(P=0.001),重症HFMD OAS1rs2660位点AG基因型频率显著高于轻症HFMD(P=0.004);携带OAS1基因rs10774671、rs2660 GG基因型的患儿均比AA基因型和AG基因型的患儿IFN-γ水平明显升高(P=0.05),携带rs2660 GG基因型的IFN-γ水平较携带rs10774671 GG基因型也明显升高(P=0.017)。结论OAS1 rs10774671位点GG基因型儿童更易感染CA16,与轻症HFMD相关;OAS1 rs2660位点AG基因型儿童更易感染EV71,与重症HFMD相关;IFN-γ可能参与了HFMD的免疫发病。