蛋鸡OC-116基因的克隆和序列分析

参考原鸡(G.gallus)OC-116编码基因序列(登录号:NM_204569.1)设计3对引物,特异性地从仙居鸡子宫组织中克隆OC-116编码基因的N端、中段和C端,测序鉴定后通过酶切连接获得家鸡OC-116的全长编码基因。根据本研究的测序结果,初步发现突变概率较高的碱基有:第1233位(A→G)、1336位(C→G)、1358位(T→G)、1391位(T→G)、1491位(T→G)、1754位(G→T)、1841位(T→C)、1843位(C→T)、1983位(C→T)和2057位(T→C);其中第1358,1754,1841,1983和2057位的碱基突变均为同义突变,第1233、1336、1391、1491和1843位是错义突变。而且突变碱基主要属于T:G颠换类型,其次是T:C转换类型。另外根据同源性分析,家鸡的OC-116编码基因在进化过程中很保守。总之,本研究已经从仙居鸡子宫组织中克隆到OC-116编码基因,为进一步研究该基因的功能奠定基础。

OC-116基因第1外显子多态性对长顺绿壳蛋鸡蛋壳品质的影响

为探讨OC-116基因第1外显子多态性对鸡蛋壳品质的影响,试验以长顺绿壳蛋鸡为材料,采用PCR产物直接测序法对OC-116基因第1外显子区域进行单核苷酸多态性(SNP)筛查,利用一般线性模型分析多态位点对长顺绿壳蛋鸡蛋壳品质的遗传效应。结果显示,在OC-116基因第1外显子共检测到2个中度多态且完全连锁的SNP位点,分别为g.45667632 T>C和g.45667671 G>A,均产生3种基因型。通过卡方(χ2)检验发现,2个SNPs基因型分布均未偏离Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),共存在2种单倍型和3种双倍型。基因型CC、AA和双倍型H2H2在蛋质量上显著高于基因型TT、GG和双倍型H1H1(P<0.05),基因型TT、GG和双倍型H1H1在蛋形指数上显著高于基因型CT、AG和双倍型H1H2(P<0.05),基因型CT、AG和双倍型H1H2在蛋壳强度上显著高于基因型TT、GG和双倍型H1H1(P<0.05)。综上,基因型CC、AA和双倍型H2H2是改善蛋壳品质的有利基因型和双倍型,揭示g.45667632 T>C位点和g.45667671 G>A位点可作为蛋壳性状选择的标记性位点。

山麻鸭OC-116基因克隆、生物信息学及组织表达谱分析

实验旨在探究OC-116(Ovocleidin-116)基因在山麻鸭蛋壳形成过程中的作用,应用SMART-RACE技术克隆获得了长度为2129 bp的山麻鸭OC-116基因cDNA全长序列,运用生物信息学软件对该基因和蛋白的特征进行分析,结果显示:该基因编码蛋白的分子式为C2710H4331N865O927S12,属于不稳定蛋白,其编码的蛋白中甘氨酸(16.5%)、丙氨酸(11%)、丝氨酸(10.2%)含量较高。蛋白的二级结构中,α螺旋(Hh)占比0.47%、β折叠(Ee)占比17.64%、无规卷曲(Cc)占比81.89%,且包含肽信号,不含跨膜结构;系统进化树显示山麻鸭与绿头鸭、黑天鹅和棕硬尾鸭的亲缘关系最近;在mRNA的水平上,OC-116基因在山麻鸭14种组织中均有不同程度的表达,其中在垂体、子宫部和峡部中的表达量极显著高于其他组织。子宫部和峡部分别是蛋壳矿化形成和蛋壳膜形成部位,表明OC-116基因在山麻鸭蛋壳的形成过程中扮演着重要的角色。

OC-116基因表达载体构建及其对鸡子宫上皮细胞Ca^(2+)浓度和脂质指标的影响

本研究旨在探究OC-116基因过表达对长顺绿壳蛋鸡子宫上皮细胞Ca^(2+)浓度和脂质指标的影响。构建pcDNA3.1(+)+OC-116+Flag表达载体并转染至分离培养的鸡子宫上皮细胞中,通过Flag标签检测试剂盒检测OC-116基因的过表达量,用Fluo-3/AM钙离子荧光标记法检测Ca^(2+)浓度,用脂质指标试剂盒检测细胞内的脂质含量。结果显示:OC-116基因过表达量与Ca^(2+)呈显著正相关,与高密度脂蛋白胆固醇(HDL)呈极显著正相关,与总胆固醇(TCHO)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL)呈显著负相关;Ca^(2+)与HDL呈极显著正相关,LDL与HDL呈极显著负相关。本研究结果揭示了OC-116基因能调控鸡子宫上皮细胞的Ca^(2+)浓度和脂质的代谢,为深入阐释鸡子宫上皮细胞中钙和脂质的分泌路径提供理论基础。

长顺绿壳蛋鸡OC–116基因变异对蛋壳品质的影响

以长顺绿壳蛋鸡为试验对象,采用PCR产物直接测序法,对OC-116基因g.45670562—g.45670994和g.45669431—g.45670163区域进行单核苷酸多态性筛查;运用一般线性模型,分析多态位点对长顺绿壳蛋鸡蛋壳品质的遗传效应。结果显示:OC-116基因存在4个SNP位点,分别为位于第2外显子上的g.45668081 G>T、第3外显子上的g.45669143 T>C、第3内含子上的g.45669061 A>G和g.45669101 T>A,g.45668081 G>T和g.45669143 T>C为同义突变,4个SNP位点均表现为中度多态;卡方(χ2)检验表明,4个SNP位点的基因型分布均未偏离Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);关联性分析结果表明,g.45669061 A>G位点的AA和AG基因型的蛋壳厚度显著高于GG基因型的(P<0.05),g.45669143 T>C位点的TT和CT基因型的蛋壳强度和蛋壳厚度显著高于CC基因型的(P<0.05),揭示g.45669061 A>G和g.45669143 T>C位点可作为蛋壳性状选择的标记性位点。