从OCT包埋冰冻组织提取组织RNA和检测病毒RNA

目的探讨如何从OCT包埋冰冻组织提取组织RNA和检测病毒RNA。为临床有限标本的保存和利用提供一简便的方法。方法用汉坦病毒感染的小鼠组织标本,经质量浓度25%蔗糖磷酸缓冲液固定OCT包埋,在-20℃冰箱中保存2年后,对冰冻的OCT包埋的感染组织标本进行RNA提取,用凝胶电泳、紫外分光光度计及RT-PCR等方法检测组织总RNA和病毒RNA。结果组织经质量浓度25%蔗糖磷酸缓冲液固定OCT包埋冰冻保存后,从中提取的RNA仍保持较好的完整性,可扩增出较长片段的病毒RNA。结论OCT包埋的冰冻组织标本不影响提取组织RNA并检测病毒RNA。

OCT包埋剂代替普通胶水在冷冻组织切片中应用比较

冷冻切片主要用于术中的病理诊断,病理医师利用冷冻切片在最短的时间内对送检术中标本进行良、恶性的鉴别,为临床医师进一步的手术方案和手术范围提供可靠的依据[1,2]。术中快速冷冻切片的特点是:时间紧迫,高质量,要求准确。因此,时效性快而优质的冷冻切片迫切亟待。本实验旨在探讨OCT包埋剂在缩短冷冻时间,提高冷冻切片的可实用性。

骨骼肌组织冰冻切片制备方法优化研究

目的 探索新鲜和固定骨骼肌组织的最优冰冻切片方法,为骨骼肌疾病的快速诊断及骨骼肌疾病发病机制的研究奠定实验基础。方法 提取C57BL/6J小鼠胫骨前肌,新鲜组织经液氮直接速冻、包埋剂联合液氮速冻、异戊烷联合液氮速冻前处理;固定组织经直接包埋、包埋剂联合液氮速冻进行前处理,制作冰冻切片后HE染色,并计算冰晶和肌纤维横截面积以评估不同前处理方式的切片效果。结果 新鲜组织经液氮直接速冻和异戊烷联合液氮速冻处理后均可见肌纤维束形态消失,大量的冰晶空泡;包埋剂联合液氮漂浮速冻,可见肌纤维束完整致密、无冰晶,为适合新鲜组织的前处理方法。固定组织包埋剂联合液氮速冻处理后肌纤维束完整、无冰晶。结论 新鲜和固定组织经包埋剂联合液氮速冻处理后肌纤维束完整、无冰晶,便于免疫组化、免疫荧光等实验的进一步进行,有利于准确快速地诊断骨骼肌疾病及探索骨骼肌疾病的发病机制。

普通胶水作为术中冰冻切片包埋剂替代品的可行性研究

目的:寻找冰冻切片包埋剂(OCT)的替代品,并验证其实用性及可行性。方法:冰冻切片制作工作中,采用普通胶水代替OCT包埋剂对组织进行包埋固定,比较普通胶水与OCT包埋剂的制片效果。结果:采用普通胶水包埋固定后制作冰冻切片与OCT包埋剂无差异,符合病理诊断要求。结论:术中冰冻切片诊断是一项要求极高的快速诊断项目,需要以高质量冰冻切片作为保障。长期以来,包埋剂多采用OCT包埋剂,但其价格相对昂贵,现采用普通胶水作为替代品,具有较高性价比,可在日常冰冻切片工作中采用。

两种冰冻切片包埋剂在解吸电喷雾电离质谱成像分析检测中的性能比较

目的评估经羧甲基纤维素(carboxylmethyl cellulose,CMC)包埋、最佳切割温度(optimal cutting temperature,OCT)化合物包埋及OCT清洗处理后,对乳腺癌组织样本解吸电喷雾电离质谱成像分析(desorption electrospray ionization mass spectrometry imaging,DESI-MSI)的潜在影响。方法对同一乳腺癌肿瘤组织,采用直接新鲜冰冻、OCT包埋、CMC包埋、OCT包埋后PBS清洗样本切片并进行DESI-MSI实验。最大强度离子比值用于数据重现性检查,特征离子种类和信号强度用于比较处理方式的影响。结果新鲜冰冻样本连续切片DESI-MSI显示,质量与电荷之比(m/z)为281.25、309.28和279.23的3个离子在肿瘤区域信号检出强度最高,其两两比值变异系数分别为19.61%、20.74%和10.18%。与新鲜冰冻肿瘤组织相比,CMC包埋及OCT包埋后清洗样本检测出的特征离子种类基本无异,而OCT包埋样本检出数目不及新鲜冰冻样本的50%。就信号强度而言,相对新鲜冰冻肿瘤组织,CMC包埋后整体无明显差异,而OCT包埋清洗后大多数特征离子信号强度下降(P<0.05)。结论新鲜冰冻组织和CMC包埋处理样本可用于DESI-MSI常规分析,OCT包埋组织无论是否经PBS清洗,其分析可行性均受到影响。对于体积小、易碎或由于其他问题而需固定的组织切片样本,推荐使用CMC包埋。