免疫磁珠分离羊水来源OCT-4阳性胎儿干细胞的实验研究

目的探讨免疫磁珠分离羊水来源OCT-4阳性胎儿干细胞的可行性。方法采用免疫磁珠细胞分选法去除羊水细胞中CD44和SSEA4阳性细胞，使OCT-4阳性胎儿干细胞间接得到分离，体外培养扩增后，观察细胞生长特性，免疫荧光染色计算OCT-4阳性胎儿干细胞得率，Real—TimePCR比较分离前后OCT-4表达量的差异，免疫组化检测NANOG、AKP、MAP-2、NGFR和Myosin等细胞因子的表达。结果经免疫磁珠分离的细胞接种12h内贴壁生长，形态呈梭形，部分呈多角形．融合后形成辐射状排列。免疫荧光染色OCT-4阳性细胞得率为（90．15±8．25）％，Real—TimePCR检测结果显示分离后细胞OCT-4的表达量较未分离细胞和M义有显著性差异（P〈0．01）。原代培养可获得（1～2）×10^7个细胞，3代可获得（2～4）×10^8个细胞．传至10代以后细胞的增殖能力下降。免疫组化结果显示OCT-4阳性胎儿干细胞表达NANOG、AKP、MAP-2和NGFR等细胞因子。结论免疫磁珠细胞分选法可以从羊水中分离出OCT-4阳性的胎儿干细胞，分离后的细胞保持干细胞原有特性及生物学特征，可作为组织工程种子细胞。

羊水来源OCT-4阳性胎儿间充质干细胞向血管内皮细胞的体外诱导分化

背景:已证实将血管内皮细胞与具有良好组织相容性的生物材料复合,并移入体内后可增殖分化形成血管。但由于获取内皮细胞时创伤较大,所以细胞来源是一个急需解决的问题。目的:探讨羊水来源OCT-4阳性胎儿间充质干细胞分化为内皮细胞的可行性。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-06/2009-03在上海交通大学医学院附属新华医院科研中心完成。材料:羊水标本来自孕16～22周行产前诊断的孕妇,在超声引导下行羊膜腔穿刺取得60mL羊水。方法:采用免疫磁珠细胞分选法去除人羊水细胞中CD44和SSEA-4阳性细胞,使OCT-4阳性胎儿间充质干细胞间接得到分离,并在体外进行培养扩增。取第3代羊水来源OCT-4阳性胎儿间充质干细胞,诱导组换用含体积分数为15%胎牛血清的内皮细胞生长培养液,对照组持续用原培养液培养细胞。主要观察指标:倒置相差显微镜观察诱导过程中细胞形态变化,采用间接细胞免疫荧光法、内皮细胞吞噬DiI-acLDL法检测诱导效果。结果:诱导30d后,镜下观察细胞集落相互连接,呈典型的"鹅卵石"样外观,经诱导的羊水来源OCT-4阳性胎儿间充质干细胞可在体外保持良好的增殖活力。诱导后的贴壁细胞eNOS和vWF呈阳性表达,细胞胞浆内可见发出红色荧光的DiI阳性细胞;对照组细胞免疫荧光染色eNOS和vWF均呈阴性,且无红色荧光细胞出现。结论:羊水来源的OCT-4阳性的胎儿间充质干细胞在适当的体外微环境下,可诱导分化为血管内皮细胞。