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Oct4基因的研究进展 被引量:20
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作者 郑鹏生 曹浩哲 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期521-526,共6页
Oct4基因是POU转录因子家族中的一员,主要表达于胚胎干细胞、生殖干细胞以及未分化胚胎癌中,对于维持胚胎干细胞的多潜能性和自我更新具有极其重要的作用。本文针对Oct4基因的分子结构、功能、调节通路以及与肿瘤的关系给予详细的阐述,... Oct4基因是POU转录因子家族中的一员,主要表达于胚胎干细胞、生殖干细胞以及未分化胚胎癌中,对于维持胚胎干细胞的多潜能性和自我更新具有极其重要的作用。本文针对Oct4基因的分子结构、功能、调节通路以及与肿瘤的关系给予详细的阐述,以期为了解这一基因、开展相关研究提供便利。 展开更多
关键词 oct4基因 POU5F1基因 调控通路 肿瘤
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携带人OCT4A基因的慢病毒载体的构建及其稳定转染K562白血病细胞株的建立 被引量:2
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作者 孟凡静 曹江 +3 位作者 周俊 吴庆运 陈翀 徐开林 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1514-1520,共7页
本研究旨在构建共表达人OCT4A与绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1,并通过感染获得稳定表达重组质粒的白血病K562细胞系,观察OCT4A在其中的表达。根据Gen Bank数据库提供的OCT4A mRNA序列,合成编码mRNA基因的特异性引... 本研究旨在构建共表达人OCT4A与绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1,并通过感染获得稳定表达重组质粒的白血病K562细胞系,观察OCT4A在其中的表达。根据Gen Bank数据库提供的OCT4A mRNA序列,合成编码mRNA基因的特异性引物序列,通过RT-PCR技术扩增出OCT4A全长片段,克隆至p CR-Blunt载体。将OCT4A DNA片段酶切回收后克隆至经EcoR1酶切线性化的慢病毒载体p LVX-IRES-ZsGreen1,构建p LVX-OCT4A-Zs Green1慢病毒重组质粒,利用测序鉴定所构建的重组载体是否正确。经三质粒包装系统包装后获得高滴度慢病毒颗粒并感染人白血病细胞系K562,通过流式细胞仪分选获得稳定表达的白血病细胞系,应用Real-time PCR和Western blot方法分别检测稳定转染细胞系的OCT4A mRNA和OCT4A蛋白表达。应用CCK-8法和平板细胞克隆形成试验测定OCT4A对K562细胞增殖能力的影响。结果表明,经限制性内切酶检测及基因测序证实成功构建了携带OCT4A基因的重组慢病毒;包装病毒颗粒超速离心后病毒滴度达(1.43±0.25)×108U/ml;病毒感染K562细胞后经流式细胞仪分选获得GFP+细胞,实时定量PCR及Western blot证实病毒感染后OCT4A基因及蛋白的表达可有效上调;CCK-8法及平板集落形成试验显示病毒感染的K562细胞体外增殖活性明显升高,与对照组相比均有统计学差异(P<0.05)。结论:成功构建了表达OCT4A基因的慢病毒载体,并且获得可稳定上调OCT4A表达的K562细胞株。 展开更多
关键词 oct4A基因 慢病毒载体 白血病 载体构建 K562细胞
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水牛Oct4、Nanog基因的克隆及其在水牛胎儿成纤维细胞中的表达
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作者 邓彦飞 刘庆友 +3 位作者 邓海莹 罗婵 杨素芳 石德顺 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期394-402,共9页
【目的】转录因子Oct4、Nanog是调节干细胞多能性相关的转录因子,在干细胞的分化和胚胎发育中有重要作用。本研究旨在克隆水牛Oct4和Nanog基因、分析基因序列和蛋白结构、构建逆转录表达载体,并在水牛体细胞中表达,为进一步研究其在水... 【目的】转录因子Oct4、Nanog是调节干细胞多能性相关的转录因子,在干细胞的分化和胚胎发育中有重要作用。本研究旨在克隆水牛Oct4和Nanog基因、分析基因序列和蛋白结构、构建逆转录表达载体,并在水牛体细胞中表达,为进一步研究其在水牛早期胚胎发育中的作用,以及为建立水牛胚胎干细胞系和诱导多能干细胞系(iPSC)奠定基础。【方法】分别从水牛生殖嵴和体细胞中提取RNA和DNA,将RNA反转录成第1链cDNA,参照牛基因序列(Oct4:NM_174580,Nanog:NM_001025344)设计特异性引物,采用RT-PCR和PCR分别扩增Oct4和Nanog的编码区序列(the coding sequences,CDS)和DNA全长序列,其中Oct4全长DNA分3段扩增,Nanog全长DNA分2段扩增;利用生物在线分析软件对水牛Oct4和Nanog进行蛋白质结构预测和同源性比对;采用EcoRⅠ、XholⅠ和XholⅠ、NotⅠ双酶切,T4连接酶,将Oct4和Nanog的CDS连接到逆转录病毒载体pMX上,构建逆转录表达载体pMX-Oct4和pMX-Nanog;采用组织块法培养水牛胎儿成纤维细胞(buffalo fetal fibroblasts,BFFs),逆转录表达系统经过病毒包装后产生的病毒上清液感染BFFs,感染12—15h后,继续培养48 h;通过RT-PCR和免疫荧光技术检测转基因在BFFs中的表达情况。【结果】Oct4 CDS全长1 083 bp,编码361个氨基酸,DNA全长4 509 bp,包括5个外显子和4个内含子;Nanog CDS全长903 bp,编码301个氨基酸,DNA全长4 473 bp,包括4个外显子和3个内含子;将Oct4和Nanog基因序列提交到GenBank,分配的基因登录号分别为JN991003和JN991004;Oct4氨基酸序列与牛、猪、人和鼠相应氨基酸的同源性分别为98%、96%、91%和81%,Nanog氨基酸序列与牛、猪、人和鼠相应氨基酸的同源性分别为90%、81%、69%和47%;Oct4和Nanog蛋白结构与小鼠相应蛋白的结构相似,分别含有本家族特有的POU结构域和HOX同源结构域;成功构建表达Oct4和Nanog的逆转录病毒载体pMX-Oct4和pMX-Nanog;逆转录病毒系统pMX介导的Oct4和Nanog基因能转入BFFs中,在mRNA水平和蛋白水平都表达,阴性对照中不表达。【结论】分别克隆了水牛Oct4和Nanog的DNA序列全长和CDS,其基因序列和氨基酸序列在物种间高度保守;逆转录病毒转基因方法将Oct4和Nanog基因成功地转入BFFs并表达。逆转录病毒系统介导目的基因表达的转基因方法可以应用于水牛转基因研究和水牛iPSC生产。 展开更多
关键词 水牛 oct4基因 NANOG基因 克隆 异位表达
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绵羊Oct4基因启动子序列的克隆及其与猪和牛序列的比较分析
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作者 李昊 郭虎 +3 位作者 王春生 宋红卫 朴善花 安铁洙 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期511-517,共7页
为探明绵羊Oct4基因启动子的结构特点,用PCR方法克隆获得了绵羊Oct4基因启动子,并对绵羊、牛和猪Oct4基因的上游调控序列进行对比分析。结果显示,成功扩增获得长度为2 951 bp的绵羊Oct4基因启动子;绵羊、牛和猪Oct4基因的上游调控序列... 为探明绵羊Oct4基因启动子的结构特点,用PCR方法克隆获得了绵羊Oct4基因启动子,并对绵羊、牛和猪Oct4基因的上游调控序列进行对比分析。结果显示,成功扩增获得长度为2 951 bp的绵羊Oct4基因启动子;绵羊、牛和猪Oct4基因的上游调控序列均含有4个保守区域(CR1–CR4),且4个保守区域在3个物种间具有高度同源性;CR1区域富含GC碱基对,且序列上的Sp1/Sp3位点与激素反应元件HRE在3个物种中具有100%的同源性;绵羊和牛、猪的上游调控序列富含GC,并存在大量的CCC(A/T)CCC位点。 展开更多
关键词 绵羊 oct4基因启动子 序列分析
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干细胞基因Oct4和Bcl-2在宫颈癌及其癌前病变组织中的表达及意义 被引量:6
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作者 唐秋英 黄平 金瑛 《海南医学》 CAS 2013年第5期625-627,共3页
目的探讨干细胞基因Oct4及Bcl-2在宫颈癌及其癌前病变中的表达及意义。方法采用HE、免疫组织化学、RT-PCR及Westernblot检测Oct4及Bcl-2蛋白在正常宫颈组织、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈原位癌及浸润癌(包括高分化、中分化、低分化)中的... 目的探讨干细胞基因Oct4及Bcl-2在宫颈癌及其癌前病变中的表达及意义。方法采用HE、免疫组织化学、RT-PCR及Westernblot检测Oct4及Bcl-2蛋白在正常宫颈组织、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈原位癌及浸润癌(包括高分化、中分化、低分化)中的表达,并进行统计分析。结果 Oct4在正常宫颈组织\CIN\宫颈癌组织中表达逐渐增加,其表达率依次为20%(2/10)、50%(15/30)、90%(18/20)。同样,Bcl-2在正常宫颈组织中的阳性表达率为10%(1/10),在CIN中为40%(12/30),而在宫颈癌中高达70%(14/20)。在正常宫颈组织、CIN及宫颈癌中Bcl-2的表达呈现逐渐增强的趋势,且在CINⅢ中Bcl-2表达高于CINⅠ/Ⅱ。Oct4和Bcl-2蛋白在正常宫颈组织、CIN及宫颈癌中的表达两两比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),但与宫颈癌病理类型无关。结论 Oct4与Bcl-2参与了宫颈癌的发生及发展,Oct4和Bcl-2联合检测有助于为宫颈癌及癌前病变的临床诊治提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 宫颈癌 oct4基因 BCL-2基因 肿瘤干细胞
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OCT4A基因对K562细胞生物学活性的影响 被引量:2
6
作者 孟凡静 曹江 +5 位作者 陈翀 吴庆运 宋旭光 陈伟 徐开林 庄万传 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期330-335,共6页
目的:探讨OCT4A基因体外对K562细胞生物学行为的影响及与凋亡相关的分子机制。方法:克隆人OCT4A基因,构建靶向上调及下调OCT4A基因与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组慢病毒表达载体p LVX-OCT4A-Zs Green1、PLB-OCT4A... 目的:探讨OCT4A基因体外对K562细胞生物学行为的影响及与凋亡相关的分子机制。方法:克隆人OCT4A基因,构建靶向上调及下调OCT4A基因与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组慢病毒表达载体p LVX-OCT4A-Zs Green1、PLB-OCT4A sh RNA,三质粒包装系统包装病毒,并测定滴度。实验分为空白对照、p LVX空质粒、p LVX-OCT4A-Zs Green1、PLB-OCT4A sh RNA和非特异sh RNA共5组。Western-blot检测各组OCT4A蛋白表达。CCK-8法绘制各组细胞增殖曲线。采用Annexin V/7-AAD标记流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞分化抗原CD11b和CD15表达;实时定量PCR检测caspase3、BIM、BCL-x L和BAX m RNA表达变化。结果:成功克隆人OCT4A基因,并成功构建重组慢病毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1和PLB-OCT4A sh RNA。Western blot证实2种病毒感染后可分别有效上调及下调OCT4A蛋白的表达。CCK-8法检测显示,p LVX-OCT4A-Zs Green1组K562细胞体外增殖活性明显升高,而p LVX-OCT4A sh RNA组K562细胞增殖活性显著降低(P<0.05)。感染后p LVX-OCT4A-Zs Green1和PLB-OCT4A sh RNA 2组K562细胞凋亡率分别为(3.48±0.52)%和(7.25±0.57)%(P<0.05),而OCT4A过表达及抑制后细胞表面分化抗原CD15、CD11b的表达无明显变化。OCT4A上调后Caspase-3、BIM、BAX较对照组均下调,但差异无统计学意义(P>0.05),而BCL-x L基因表达则明显升高(P<0.01)。结论:成功构建重组慢病毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1及PLB-OCT4A sh RNA,它们可分别有效地上调及下调OCT4A蛋白表达。OCT4A基因可促进K562细胞的增殖、抑制凋亡,其抑制凋亡机制可能与BCL-x L基因上调有关。 展开更多
关键词 oct4A基因 K562细胞 白血病 细胞凋亡
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人源脐带、脐血和羊水中Oct4基因的表达
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作者 凌占业 余树民 +4 位作者 姚学萍 刘茜 王印 曹随忠 沈留红 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期532-535,共4页
Oct4(Octamer-binding transcription factor 4,Oct4)基因是多潜能干细胞的标志之一,为了解Oct4基因在脐带、脐血、羊水中的表达情况,本研究以人胚胎干细胞为阳性对照,β-actin基因为内参基因,利用半定量RT-PCR(Reverse transcrible pol... Oct4(Octamer-binding transcription factor 4,Oct4)基因是多潜能干细胞的标志之一,为了解Oct4基因在脐带、脐血、羊水中的表达情况,本研究以人胚胎干细胞为阳性对照,β-actin基因为内参基因,利用半定量RT-PCR(Reverse transcrible polymerase chain reaction,RT-PCR)对上述样品检测(各20份),并对扩增片段进行测序和同源分析。结果显示,源于上述样品的RT-PCR扩增片段与人Oct4基因cDNA序列同源性为98%,Oct4基因在脐带、脐血、孕中期羊水和孕晚期羊水中的阳性表达率分别为95%(19/20)、80%(16/20)、90%(18/20)和80%(16/20);在脐带、中期羊水和晚期羊水中,Oct4基因的转录水平没有显著性差异(P>0.05),但显著高于脐血(P<0.05)。结果表明Oct4基因在脐带、脐血和羊水中表达,但不同样品有差异。 展开更多
关键词 oct4基因 脐带 脐带血 羊水 RT—PCR
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OCT4假基因在肿瘤中的研究进展 被引量:2
8
作者 余菁雯 周留林 《癌症进展》 2018年第12期1451-1454,共4页
八聚体结合转录因子4(OCT4)属于POU转录因子家族成员,在生殖细胞、早期胚胎的内细胞团、胚胎干细胞中表达。研究发现OCT4同样表达于多种肿瘤细胞中,对于构建维持干细胞多能性和自我更新能力的核心转录网络至关重要。鉴于OCT4在胚胎干细... 八聚体结合转录因子4(OCT4)属于POU转录因子家族成员,在生殖细胞、早期胚胎的内细胞团、胚胎干细胞中表达。研究发现OCT4同样表达于多种肿瘤细胞中,对于构建维持干细胞多能性和自我更新能力的核心转录网络至关重要。鉴于OCT4在胚胎干细胞自我更新中的关键作用,发现并控制OCT4表达的相关通路极其重要。大量研究表明假基因来源的RNA对于调控其亲本基因的表达具有重要作用,通过反义转录调控染色体结构和短干扰RNA的形成,或者作为竞争性内源RNA(ceRNA)海绵调控基因的表达。大量研究证实了多种人类OCT4假基因的存在,且预测假基因衍生的非编码RNA在胚胎干细胞和肿瘤中都参与并调控其亲本基因OCT4的表达。本文主要就OCT4假基因在肿瘤中的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 oct4假基因 肿瘤 机制研究 胚胎细胞 竞争性内源RNA
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利用结构优化的TALE-TF高效诱导MEF细胞内源基因Oct4的表达(英文)
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作者 吴芸 张志强 +6 位作者 李铎 徐坤 韩芙蓉 任充华 闫强 王昕 张智英 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期461-469,共9页
转录激活子样效应因子核酸酶(TALENs)已用于基因组编辑,而TALE转录激活因子(TALE-TFs)可用于内源基因的调控。通过修饰的TALE蛋白与内源基因的启动子特异性结合来激活或抑制基因的表达。但是,对于截短了N端的TALE是否会影响TALENs的效... 转录激活子样效应因子核酸酶(TALENs)已用于基因组编辑,而TALE转录激活因子(TALE-TFs)可用于内源基因的调控。通过修饰的TALE蛋白与内源基因的启动子特异性结合来激活或抑制基因的表达。但是,对于截短了N端的TALE是否会影响TALENs的效率还不确定。本文设计了不同长度N端的TALENs哺乳动物及酵母表达载体,对应哺乳动物绿色荧光报告载体及酵母报告载体。分别在哺乳动物细胞和酵母细胞上对不同长度N端TALENs的活性进行了检测。检测结果发现,含120个氨基酸N端的TALEN在酵母AH109细胞中的活性最高,N端长度为153个氨基酸的TALENs在293T细胞中表现最高的活性,但N端长度为153、140和160个氨基酸的TALENs的活性差异不显著(P>0.05)。随后,将结构优化了的TALE-TF用于小鼠胎儿成纤维细胞中激活Oct4基因。相对阴性对照组,TALE-TF将Oct4基因表达量上调了418倍。本研究结果表明,在哺乳动物细胞和酵母细胞中,具有最高活性TALENs的N端长度是不同的。本研究用结构优化的TALE-TF诱导内源基因高水平的表达,为从体细胞中获得iP S细胞提供了研究策略。 展开更多
关键词 TALE-N端 转录激活子样效应因子核酸酶(TALENs) oct4基因 TALE转录激活因子(TALE-TF)
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绵羊Oct4基因的克隆及序列分析 被引量:2
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作者 田丽 时邵辉 +3 位作者 胡虹宇 陈胜男 李松美 王春生 《草食家畜》 2019年第3期19-24,共6页
为了克隆出绵羊的Oct4基因的编码区序列,研究利用RT-PCR技术,根据GenBank中小鼠、人,猪、牛等的Oct4基因编码区序列设计出特异性引物,从绵羊囊胚中扩增绵羊Oct4编码区序列并进行测序,分析。结果表明,绵羊Oct4基因的编码区长度为1083bp,... 为了克隆出绵羊的Oct4基因的编码区序列,研究利用RT-PCR技术,根据GenBank中小鼠、人,猪、牛等的Oct4基因编码区序列设计出特异性引物,从绵羊囊胚中扩增绵羊Oct4编码区序列并进行测序,分析。结果表明,绵羊Oct4基因的编码区长度为1083bp,其中包括终止密码子,可以编码360个氨基酸。绵羊Oct4基因CDS区的核苷酸序列与牛、猫、人、恒河猴、小鼠、兔、大鼠和猪等物种相似,比较相应序列,同源性分别为97.8%、91.1%、89.1%、89.0%、82.3%、85.7%、83.2%和94.7%;比较其氨基酸序列,同源性分别为98.3%、93.1%、91.4%、91.1%、83.8%、85.7%和97.2%;使用生物信息学软件分析结果表明,绵羊Oct4基因含有两个POU特异结构域和1个HOMEOBOX-1结构域。本研究为进一步探索Oct4基因的功能及探讨其在绵羊体细胞重编程的过程中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 绵羊 oct4基因 基因克隆 序列分析
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降糖药物相关基因芯片检测技术的建立和应用
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作者 卢雪玲 再努尔·买合木提 王宁 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2020年第20期4291-4294,共4页
目的构建降糖药物相关基因单核苷酸多肽性(SNP)位点芯片,并对糖尿病患者进行分析病因学检测。方法通过文献筛选找到12个影响降糖药物吸收及转运的突变位点用于芯片的制作。收集糖尿病患者34例,取外周血,提取基因组DNA,用构建的芯片检测... 目的构建降糖药物相关基因单核苷酸多肽性(SNP)位点芯片,并对糖尿病患者进行分析病因学检测。方法通过文献筛选找到12个影响降糖药物吸收及转运的突变位点用于芯片的制作。收集糖尿病患者34例,取外周血,提取基因组DNA,用构建的芯片检测患者的12个突变。结果检测的34例糖尿病患者,18例发生单碱基突变,13例发生2个及以上碱基突变,发生rs2016520突变的患者最多。位点的遗传结构分析表明有3个位点群体中杂合度较大,2个位点处于中度多态。4个位点Hardy-Weinberg平衡检验有统计学意义。结论成功构建的降糖基因芯片对降糖相关基因突变位点检出率高,具有高通量、低成本的特点,但准确性还需要进一步的验证,对患者的正确用药有重要作用和应用前景。 展开更多
关键词 糖尿病 octs基因 P450基因 基因芯片
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Oct4及Wnt/β-Catenin在肝癌中的表达及相互作用 被引量:7
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作者 周文波 邹灿 +3 位作者 张有顺 胡洪生 朱正鹏 郑启昌 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期501-505,共5页
目的探讨干细胞相关基因Oct4与Wnt/β-Catenin信号转导通路在人肝癌组织及肝癌细胞系中的表达及相互作用。方法选取肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织,采用免疫组化SP法检测其Oct4的表达;RT-PCR法及实时荧光定量PCR检测Oct4、Wnt5b、β-Ca... 目的探讨干细胞相关基因Oct4与Wnt/β-Catenin信号转导通路在人肝癌组织及肝癌细胞系中的表达及相互作用。方法选取肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织,采用免疫组化SP法检测其Oct4的表达;RT-PCR法及实时荧光定量PCR检测Oct4、Wnt5b、β-Catenin的mRNA表达。Si RNA-Oct4沉默人肝癌HepG2细胞Oct4的表达后,以实时荧光定量PCR检测Oct4、Sox2、Nanog、β-Catenin等干细胞相关基因的表达变化。结果 Oct4在肝癌组织和癌旁组织中均有表达,正常肝脏组织几乎未发现明显的Oct4表达;实时荧光定量PCR发现Oct4和β-Catenin在癌组织内表达最高,癌旁次之,正常肝最低,而Wnt5b却相反。使用Si RNA-Oct4沉默人肝癌HepG2细胞Oct4后,Oct4表达明显下调,β-Catenin、Sox2、Nanog表达亦下调,与Oct4呈正相关关系,而Wnt5b表达却上调,与Oct4呈负相关关系。结论 Oct4在肝癌组织中高表达,且为肝癌发生过程的早期事件;Oct4及Wnt/β-Catenin在肝癌中存在一定的相互作用。 展开更多
关键词 干细胞 oct4基因 WNT/Β-CATENIN 小分子干扰RNA 肝细胞
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干细胞转录因子Sox2、Oct4在肺癌组织中表达及与肿瘤微淋巴管的关系 被引量:4
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作者 项保利 钱海红 +3 位作者 张志林 苏菁 陈丽萍 张志华 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第21期47-49,共3页
目的观察干细胞转录因子Sox2、Oct4在肺癌组织中的表达变化,并探讨二者与肿瘤微淋巴管的关系。方法用免疫组化法检测60例肺癌组织及其相应正常肺组织中Sox2、Oct4蛋白表达、D-240标记的微淋巴管密度(LMVD)。结果肺癌组织中Sox2、Oct4蛋... 目的观察干细胞转录因子Sox2、Oct4在肺癌组织中的表达变化,并探讨二者与肿瘤微淋巴管的关系。方法用免疫组化法检测60例肺癌组织及其相应正常肺组织中Sox2、Oct4蛋白表达、D-240标记的微淋巴管密度(LMVD)。结果肺癌组织中Sox2、Oct4蛋白阳性表达率、LMVD与正常肺组织比较,P均<0.05。Sox2、Oct4蛋白阳性表达及LMVD均与肿瘤分化程度、TNM分期、脉管浸润、淋巴结转移、肝转移有关(P均<0.05),此外Sox2、Oct4蛋白阳性表达还与肿瘤病理类型有关(P均<0.05)。肺癌组织中Sox2、Oct4蛋白阳性表达者LMVD与阴性者比较,P均<0.05。结论 Sox2、Oct4在肺癌组织中呈现高表达,二者可能共同参与了肺癌组织微淋巴管的生成、浸润及淋巴道转移。 展开更多
关键词 肺肿瘤 干细胞转录因子 Sox2基因 oct4基因 微淋巴管密度
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不同培养条件对鸡胚胎生殖细胞Oct4启动子DNA甲基化的影响 被引量:2
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作者 王娟 焦飞 +2 位作者 于媛 潘效红 马云 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期118-121,共4页
旨在在体外通过胚胎生殖细胞(EGC)和细胞外基质共同构建一个EGC的小生境(niche)模型,通过比较Oct4DNA甲基化的变化,研究niche中特有的表观遗传效应对胚胎生殖细胞自我更新的影响。构建EGC细胞标准培养方案(对照组)和改良培养方案(试验... 旨在在体外通过胚胎生殖细胞(EGC)和细胞外基质共同构建一个EGC的小生境(niche)模型,通过比较Oct4DNA甲基化的变化,研究niche中特有的表观遗传效应对胚胎生殖细胞自我更新的影响。构建EGC细胞标准培养方案(对照组)和改良培养方案(试验组),采用甲基化特异性PCR(MS-PCR)技术、RT-PCR技术,对比分析两种培养方案中Oct4启动子的甲基化状态,判断基因表达与其CpG岛甲基化的关系,分析DNA甲基化模式与EGC细胞自我更新的关系。结果显示,试验组可扩增出Oct4的非甲基化扩增产物,而对照组为其甲基化扩增产物,试验组Oct4表达水平明显高于对照组。试验组EGC生长状态明显好于对照组。试验表明,在改良培养条件下,Oct4基因启动子DNA甲基化程度较低,且与基因表达水平呈负相关,更有利于维持胚胎生殖细胞的自我更新状态。 展开更多
关键词 胚胎生殖细胞 oct4基因 DNA甲基化 全能性
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补肾阴对胚胎干细胞关键基因功能的影响 被引量:9
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作者 胡兵 安红梅 +6 位作者 史云峰 许丽雯 史秀峰 陈方敏 顾耘 潘露茜 王志 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期365-367,共3页
关键词 补肾阴 胚胎干细胞 凋亡 Wnt与oct3/4基因
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人八聚体结合蛋白4(Oct4)cDNA的克隆及其在大肠杆菌和HEK293T细胞的表达 被引量:1
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作者 阮碧波 符吴萸 +6 位作者 芮雯 陈海璇 周朋君 廖双叶 吴小清 王一飞 陈宏远 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期308-312,共5页
目的克隆人八聚体结合蛋白4(Oct4)c DNA,研究其在原核及真核系统中的表达。方法提取人宫颈癌He La细胞中的总RNA,经反转录PCR获得c DNA,PCR扩增Oct4 c DNA并将其分别克隆入表达载体p ET-22b(+)原核质粒和pc DNATM3.1(+)真核质粒,构建含... 目的克隆人八聚体结合蛋白4(Oct4)c DNA,研究其在原核及真核系统中的表达。方法提取人宫颈癌He La细胞中的总RNA,经反转录PCR获得c DNA,PCR扩增Oct4 c DNA并将其分别克隆入表达载体p ET-22b(+)原核质粒和pc DNATM3.1(+)真核质粒,构建含该序列的重组原核表达载体p ET-22b(+)-Oct4和真核表达载体pc DNA3.1(+)-his-Oct4。然后分别进行双酶切和测序鉴定。前者在E.coli BL21(DE3)中诱导表达目的蛋白,后者以脂质体介导法转染至HEK293T细胞,SDS-PAGE和Western blot法检测细菌和细胞中OCT4蛋白的表达水平。结果 PCR扩增得到约1100 bp目的 DNA片段;重组表达质粒p ET-22b(+)-Oct4和pc DNA3.1(+)-his-Oct4经双酶切鉴定和测序分析证明载体构建成功;p ET-22b(+)-Oct4经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达后SDS-PAGE分析表明,目的蛋白在宿主E.coli BL21(DE3)中高效表达OCT4融合蛋白,相对分子质量(Mr)约38 000,与其理论Mr基本相符;pc DNA3.1(+)-his-Oct4转染HEK293T细胞经Western blot法检测,证实导入的Oct4成功表达。结论在大肠杆菌和HEK293T细胞成功表达OCT4蛋白。 展开更多
关键词 oct4基因 分子克隆 原核表达 真核表达
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人重组Oct3/4真核表达载体构建及在卵巢癌细胞中的表达研究 被引量:2
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作者 王育 肖世金 赵爱民 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期797-801,共5页
目的构建人Oct3/4真核表达载体并转染人卵巢癌细胞株(SKOV3),观察Oct3/4在SKOV3稳定细胞株中的表达。方法采用RT-PCR技术扩增获得目的基因Oct3/4 cDNA产物,利用pcDNA3.1载体质粒构建人重组Oct3/4真核表达载体pcDNA3.1-Oct3/4,酶切及DNA... 目的构建人Oct3/4真核表达载体并转染人卵巢癌细胞株(SKOV3),观察Oct3/4在SKOV3稳定细胞株中的表达。方法采用RT-PCR技术扩增获得目的基因Oct3/4 cDNA产物,利用pcDNA3.1载体质粒构建人重组Oct3/4真核表达载体pcDNA3.1-Oct3/4,酶切及DNA测序鉴定。利用脂质体Lipofectamine 2000介导重组质粒转染SKOV3,以空载体转染细胞和未转染细胞作为转染对照组和阴性对照组。经G418(neomycin)筛选获得SKOV3稳定转染细胞株,Western blotting分析检测细胞Oct3/4蛋白的相对表达水平。结果 PCR扩增产物经12g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定目的基因条带大小约1000bp,与理论预期值一致。构建完成人重组Oct3/4真核表达载体pcDNA3.1-Oct3/4,DNA测序结果与GenBank数据库进行比对序列一致。Western blotting检测显示,转染pcDNA3.1-Oct3/4组稳定转染细胞中Oct3/4蛋白相对表达量(10.225±0.987)显著高于转染对照组(1.713±0.896)和阴性对照组(校正值为1)(P<0.01)。结论成功构建人重组Oct3/4真核表达载体并转染SKOV3,稳定转染细胞株中Oct3/4蛋白呈稳定过量表达。实验为进一步研究Oct3/4基因在卵巢癌发生、发展及耐药机制中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 oct3/4基因 载体 蛋白表达 卵巢癌
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Oct4在肿瘤发生发展中的作用 被引量:3
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作者 黄灵 郜峰 张声 《国际病理科学与临床杂志》 CAS 2013年第1期78-81,共4页
八聚体4(octamer 4,oct4)基因是POU转录因子家族中的一员,主要表达于胚胎干细胞、生殖干细胞及多种肿瘤细胞中,对维持胚胎干细胞的多潜能性和自我更新具有重要的作用,有望成为靶向治疗的新靶点。
关键词 oct4基因 肿瘤 多潜能性
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The influence of OCT1 gene polymorphisms on the metformin response in Uygur patients with glucose metabolism disorder
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作者 WANG Tao YI Tao-cun +11 位作者 WANG Ye WANG Zhi-hong WANH Chang-hui MAO Xin-min RAN Xin-jian HU Meng-yin GE Wen-ning ZHANG Min-fang XIE Zi-jing LI Shi-qiang LAN Yi LI Lin-lin 《新疆医科大学学报》 CAS 2010年第10期1175-1180,共6页
Objective To determine the effects of genetic variation in the organic cation transporter 1(OCT1)on the short-term responses of the antidiabetic drug,metformin.Method A total of 22 patients recruited with type 2 diabe... Objective To determine the effects of genetic variation in the organic cation transporter 1(OCT1)on the short-term responses of the antidiabetic drug,metformin.Method A total of 22 patients recruited with type 2 diabetes or IFG were treated with metformin(2 000 mg/day)for 1 week.The patients were screened from Second Jikun hospital and Kashidonglu community medicine service,Urumqi,China and their surrounding districts.To examine the effects of metformin on plasma glucose,total cholesterol,low-density lipoprotein-cholesterol,high-density lipoprotein-cholesterol and triglyceride in relation with R61C,G465R and 420 del variants of OCT1(gene encoding organic cation transporter 1,mainly locating in liver,which is metformin's major target)in subjects.In all,R61C,G465R and 420del of OCT1 gene were examined using DNA extracted from whole blood and PCR-RFLP.Data concerning with gene and metformin treatment were handled by t-test.Result After metformin treatment,there were increases both in FPG and LDL(P=0.011and P=0.013 respectively).To divide all participants into mutant and wild groups,according to the polymorphisms of R61C,G465R and 420 del respectively,as well as carriers with one of the mutant genotypes at least and carriers with none of the mutant sites.Analysis was made to compared FPG,Chol,TG,and LDL and HDL between carriers of wild genotypes and carriers of other genotypes showed no statistic significance both before the metformin treatment and after the treatment.The same is the case with changes of FPG,Chol,TG,and LDL and HDL of wild genotype carriers and variant genotype carriers,except of LDL changes(P=0.05)in patients grouped by G465R polymorphisms and TG changes(P=0.03)in subjects differed by 420del genotypes.Conclusion In this study,it is suggested that OCT1 gene polymorphisms have little contribution to the clinical efficacy of blood glucose control by metformin among Uygur people with type 2 diabetes or IFG,but it may have possible relationship with the clinical efficacy on fat metabolism by metformin. 展开更多
关键词 oct1基因 基因治疗 疗效
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特异性小干扰RNA靶向沉默Oct4基因表达对人膀胱癌EJ细胞生物学的影响 被引量:4
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作者 万锋 朱朝辉 +4 位作者 吕磊 王智宇 邢诗安 曾甫清 王艳波 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期281-283,共3页
目的 观察RNA干扰沉默Oct4基因表达对人膀胱癌EJ细胞生物学的影响.方法 将人膀胱癌EJ细胞,常规分为空白对照组、阴性对照组和实验转染组进行实验.体外化学合成Oct4基因序列特异性小干扰RNA(siRNA),脂质体Lipofectamine 2000介导转染... 目的 观察RNA干扰沉默Oct4基因表达对人膀胱癌EJ细胞生物学的影响.方法 将人膀胱癌EJ细胞,常规分为空白对照组、阴性对照组和实验转染组进行实验.体外化学合成Oct4基因序列特异性小干扰RNA(siRNA),脂质体Lipofectamine 2000介导转染人膀胱癌细胞株EJ细胞;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法分别检测特异性siRNA对Oct4基因在mRNA和蛋白水平上沉默效果;转染后采用噻唑蓝(MTT)比色法检测siRNA对细胞增殖的作用;AO/EB荧光染色法检测其凋亡;用细胞划痕和Transwell试验体外检测细胞迁移和侵袭能力.结果 成功转染Oct4-siRNA的膀胱癌EJ细胞,RT-PCR及Western blot分别显示Oct4 mRNA和蛋白表达在相应的癌细胞中明显下降;与阴性对照组比较,细胞增殖明显抑制(P<0.05);同时细胞凋亡率增加(52.73%比11.70%);RNA干扰明显抑制EJ细胞迁移力和侵袭力(15.34±1.85比63.07±1.73).结论 Oct4-siRNA可有效抑制膀胱癌EJ细胞Oct4基因的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,Oct4-siRNA有效地调控EJ细胞恶性生物学行为. 展开更多
关键词 RNA干扰 oct4基因 膀胱癌
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